關(guān)于高壓液相色譜測(cè)定IMP、GMP的研究

夏麗娟

【摘要】本實(shí)驗(yàn)確定了一個(gè)可靠的測(cè)定調(diào)味劑中I+G的方法，能夠較準(zhǔn)確地GMP和IMP的含量。具有時(shí)間短，可靠性高，適用性廣的特點(diǎn)。很多調(diào)味劑中添加了I+G，在接下來的研究工作中，將會(huì)對(duì)不同品牌的相同品種中做深入地研究，也會(huì)對(duì)不同GMP、IMP含量之比的產(chǎn)品中做出感官評(píng)價(jià)和質(zhì)量報(bào)告。

【關(guān)鍵詞】液相色譜；食品添加劑；IMP ；GMP

1 概述

呈味核昔酸二鈉（IMP+GMP）是新一代的核昔酸類食品增鮮劑。IMP和GMP直接加入到食品中，起增鮮作用，因此在食品行業(yè)應(yīng)用廣泛。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定I+G含量是用紫外分光光度法，此法適用于純度高，含雜質(zhì)較小的樣品。雜質(zhì)會(huì)對(duì)其檢測(cè)產(chǎn)生較大的影響。本文建立的高效液相色譜法測(cè)定IMP和GMP的含量的方法，操作簡(jiǎn)單，靈敏度高，重復(fù)性好。對(duì)于大批量樣品的檢測(cè)和成分復(fù)雜樣品的檢測(cè)同樣適用。

2 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑

2.1 實(shí)驗(yàn)儀器

高效液相色譜儀（帶四元泵、紫外檢測(cè)器）（Agilent 1200）；AT-930柱恒溫箱（天津奧特塞恩斯）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（德祥科技有限公司）；純水機(jī)（重慶利迪）；離心機(jī)（上海安亭）；電子天平（千分之一）；電子天平（十萬分之一）50ml小燒杯、5.00ml移液管，50ml容量瓶，100ml容量瓶，50ml離心管。

2.2 試劑

0.5%磷酸二氫鈉（現(xiàn)配現(xiàn)用）；甲醇（色譜純）；75%甲醇-水溶液（按照體積3：1配置）；IMP、GMP標(biāo)準(zhǔn)品（sigma 公司）純度≥99.0%。

IMP、GMP標(biāo)準(zhǔn)貯備液[c（IMP、GMP）=1.00mg/mL]：準(zhǔn)確稱取色譜級(jí)IMP、GMP標(biāo)準(zhǔn)品各0.1000g，用水溶解并定容至100mL。

IMP、GMP標(biāo)準(zhǔn)使用液：吸取適量IMP、GMP標(biāo)準(zhǔn)貯備液，用水稀釋成每毫升相當(dāng)于5，10，100，200，500 mg IMP及5，10，100，200，500mg GMP。

2.3 實(shí)驗(yàn)材料 隨機(jī)從市場(chǎng)上購(gòu)買醬油、雞精、雞粉、醬

3 實(shí)驗(yàn)方法

3.1 樣品前處理（參考GB 5009.12）

3.1.1 常規(guī)三類樣品處理方法

①食品添加劑IMP、GMP、IMP+GMP

用千分之一電子天平準(zhǔn)確稱取1.000g樣品于小燒杯中，先加少量水使其溶解后用水完全轉(zhuǎn)移入100mL容量瓶中，多次潤(rùn)洗小燒杯，一同轉(zhuǎn)移到容量瓶中并定容至刻度，搖震容量瓶一分鐘，使之混合均勻。用移液管準(zhǔn)確吸取該稀釋液5.00mL，轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中并定容至刻度，搖均。用0.22μm微孔膜過濾，濾液備用。

②雞精

用千分之一電子天平準(zhǔn)確稱取1.000g樣品于小燒杯中，先加少量水使其溶解，用水轉(zhuǎn)移入100mL容量瓶中，多次潤(rùn)洗小燒杯，一同轉(zhuǎn)移到容量瓶中并定容至刻度，搖震容量瓶一分鐘，使之混合均勻。用0.22μm微孔膜過濾，濾液備用。

③醬油、調(diào)味汁

用千分之一電子天平準(zhǔn)確稱取5.000g試樣，用75%甲醇溶液定容至50mL，搖勻，靜置30min，取20-30ml醇沉液于50ml離心管中，2000r/min離心5min，用移液管吸取10.00mL上清液于濃縮瓶中，于45℃水浴條件下濃縮至2ml左右，用水將剩余溶液完全轉(zhuǎn)移入10mL容量瓶并用水定容至刻度，經(jīng)0.22μm濾膜過濾，濾液備用。

3.1.2 其他類樣品處理方法

與①、②、③相同或相似體態(tài)的其他樣品可參照上述處理方法進(jìn)行。不同于上述幾類樣品體態(tài)的其他樣品應(yīng)另行確定樣品的處理方法。

3.2 測(cè)定

3.2.1 儀器條件

色譜柱：Phenomenex SAX色譜柱，4.0×250mm，粒徑5μm

流動(dòng)相：0.5%磷酸二氫鈉，流速為1.000ml/min，等梯度洗脫

柱溫：25℃

波長(zhǎng)：254nm

運(yùn)行時(shí)間：10min

3.2.2 測(cè)定

進(jìn)樣20μL標(biāo)準(zhǔn)系列中各濃度標(biāo)準(zhǔn)使用液于液相色譜儀中，可測(cè)得不同濃度IMP、GMP的峰面積，以濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，作一標(biāo)準(zhǔn)曲線。

同時(shí)進(jìn)樣20μL樣品溶液，測(cè)得峰面積與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較定量。

3.2.3 試樣中IMP、GMP的含量計(jì)算

試樣中IMP、GMP的含量按下式計(jì)算：

式中：X――試樣中IMP、GMP含量，單位為克每千克（mg/kg）。

A――進(jìn)樣體積中IMP、GMP的質(zhì)量，單位為毫克（mg）。

V2――進(jìn)樣體積，單位為毫升（ml）。

V1――試樣稀釋液總體積，單位為克（g）。

m――試樣質(zhì)量，單位為克（g）。

計(jì)算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的10%。

4 實(shí)驗(yàn)圖譜處理及分析總結(jié)

4.1 實(shí)驗(yàn)圖譜處理

實(shí)驗(yàn)按照上述方法，制定了標(biāo)準(zhǔn)曲線，在標(biāo)樣穩(wěn)定、復(fù)合回收要求的情況下測(cè)量了雞精、雞粉、醬油等樣品的I+G含量。

逐級(jí)稀釋GMP和IMP標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行HPLC分析。

GMP的線性回歸方程為Y=34204.23X（R=0.9999736），線性范圍為1～500mg/L，檢測(cè)限為1mg/kg1。

IMP的線性回歸方程為Y=26838.3X（R=0.9999905），線性范圍為1～500mg/L，檢測(cè)限為1mg/kg。

4.3 總結(jié)

在高壓液相色譜上的GMP和IMP相關(guān)系數(shù)都達(dá)到了0.9999以上，說明相關(guān)度高。測(cè)得的數(shù)據(jù)可靠性較高。

可以看出，回收率已經(jīng)達(dá)到了1.000，表明實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性是非常高的，系統(tǒng)的穩(wěn)定性足以滿足實(shí)驗(yàn)條件。并且我們通過多次重復(fù)實(shí)驗(yàn)也證明了這一點(diǎn)。

雞精和雞粉是含有其它成分相對(duì)較少的樣品。可以看出，IMP和GMP的峰型都很好，都能夠非常清晰的得知樣品中的I+G含量。

雖然雜峰較多，但是也不失穩(wěn)定性，其測(cè)得結(jié)果也是可靠的。實(shí)際的平行樣中，最終結(jié)果也是相對(duì)穩(wěn)定的，能夠滿足日常工作需要。

從實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可知，用液相色譜法測(cè)定調(diào)味品中的I+G結(jié)果重現(xiàn)性高，測(cè)定數(shù)據(jù)穩(wěn)定，測(cè)定時(shí)間短，能夠滿足大批量樣品的測(cè)定，提高了勞動(dòng)效率。

5 項(xiàng)目成功及未來的工作

采用高壓液相色譜測(cè)定食品添加劑IMP、GMP（以下簡(jiǎn)稱I+G）與國(guó)標(biāo)法測(cè)定I+G具有精密度高，處理簡(jiǎn)單，方便快速等特點(diǎn)。該檢測(cè)方法最低檢出量為1μg標(biāo)準(zhǔn)物，對(duì)于樣品的色譜定量分析時(shí)，最低檢出濃度為0.100g/kg，具有適用范圍廣的特點(diǎn)。

參考文獻(xiàn)：

[1]鄭勝彪，唐靖.紫外分光光度法同時(shí)測(cè)定雞精谷氨酸鈉和呈味核昔酸《中國(guó)調(diào)味品》2009年第五期.

[2]宇辰.星湖生物科技股份有限公司I+G鮮味劑達(dá)到國(guó)際先進(jìn)水平《中國(guó)食品添加劑》2005 年第2期.