兩種豬偽狂犬病gB抗體檢測方法對比試驗

郭慧娟　王成龍

[中圖分類號]S858.28 [文獻標識碼]B [文章編號]1003—1650 Q016）03—0248—01

豬偽狂犬病（Pseudorabies，PR）是由豬偽狂犬病病毒（Pseudotabies virus，PRV）引起的一種高度接觸性傳染病。豬是本病的主要宿主和傳染源，健康豬與病豬、帶毒豬直接接觸可感染本病。通常引起妊娠母豬流產、木乃伊胎、死胎和產弱仔；初生仔豬出現神經癥狀，感染率和死亡率可達100%，成年豬感染后多耐過，不發病呈隱性感染，造成長期帶毒排毒，成為最危險的傳染源，嚴重影響種豬場生產。本病廣泛分布于世界各地，已有50多個國家和地區報道該病的流行，給養豬業構成很大威脅。我國自1947年首次報道該病以來，隨著養豬業集約化規模化的發展，已有20多個省市報道發生了該病，并在許多種豬場呈暴發流行趨勢，給我國養豬業造成了巨大的經濟損失。偽狂犬病病毒屬于皰疹病毒科α-皰疹病毒亞科豬疤疹病毒Ⅰ型（Suid Herpesvirus Ⅰ，SHV-Ⅰ），病毒粒子呈圓形或橢圓形外觀，核衣殼含病毒基因組DNA和核衣殼蛋白，核衣殼外被一層非晶體狀蛋白樣結構（tegument）所包裹，病毒粒子最外層是病毒囊膜（envobpe），它是由宿主細胞膜結構衍生而來的脂質雙層結構，囊膜上鑲嵌有病毒編碼的囊膜蛋白，大多是糖蛋白。α-皰疹病毒中至今已鑒定的糖蛋白有gB、gC、gD、gE、gG、gH、gI、gK、gL、gM和gN，除gG外其余都是病毒粒子結構成分。目前已對PRV的多種糖蛋白進行了結構和功能的研究，糖蛋白gB是豬偽狂犬病病毒的一種主要糖蛋白，能誘導機體產生中和抗體，是PR V免疫抗體評價的首先蛋白。

1材料和方法

1.1材料

1.1.1儀器酶標儀M 550型，購自Bio-R ad公司：洗板機ELx50型，購自B io-Tek公司。

1.1.2試劑盒PRV gB-I-E L ISA試劑由河南省農業科學院動物免疫學重點實驗室提供，主要成分包括抗原包被E LISA板2塊，抗體稀釋液1瓶，辣根過氧化物酶標記的養抗豬IgG 1支，底物A液和B液各1瓶，終止液1瓶；愛德士PRV-gB ELISA試劑盒為美國美國ID EXX公司產品。

1.2方法

1.2.1 PRV gB-I-ELISA 操作程序按常規間接E LISA方法進行。結果判定：按方法說明書中，陰、陽性血清效價的臨界值為0.3，根據標準陽性和陰性對照血清和檢測樣品的0 D450nm吸光值計算被檢樣品的效價，血清樣本抗體效價=（樣品的0 D450nm值-陰性對照的0 D450nm值）/（陽性對照的0 D450nm值-陰性對照的0 D450nm值）計算每一份血清效價。當效價≥3.0時判為陽性，效價<0.3時判為陰性。

2結果與分析

2.1 PRV感染血清檢測結果

PRV感染豬血清檢測結果見表1。檢測350份PRV感染豬血清，ID EXX PRV-gB EL ISA和PRV gB-I-ELISA檢測均為陽性的血清319頭份，均為陰性的有12頭份，二者檢測結果不一致的有19頭份，符合率為94.6%（331/350）。

2.2 PR V免疫血清檢測結果

PRV免疫豬血清檢測結果見表2。共檢測420頭份，其中，ID EXX PRV-gB E LISA和PRV gB-I-ELISA檢測均為陽性的血清362頭份，均為陰性的有23頭份，二者檢測結果不一致的有35頭份，符合率為91.6%（385/420）。

根據兩種不同背景的豬血清，用兩種ELISA方法檢測，總符合率為92.6%（792/855），說明兩種方法檢測結果基本一致，所建立的PRV gB-I-ELISA方法具有較好的特異性和敏感性，可以用于評價豬PRV gB抗體。

3討論

疫苗免疫我國控制PRV的主要措施，因此檢測血清抗體效價，評估免疫抗體水平至關重要。常用的PRV免疫抗體檢測方法主要有中和實驗（SNT）、酶聯免疫吸附試驗（ELISA）、乳膠凝集試驗（LAT）等，其中，ELISA被列為國際貿易種PRV抗體檢測的指定方法。本研究團隊利用PRV gB蛋白抗原富集區為診斷抗原，成功建立了PRV gB抗體間接ELISA方法（gB-I-ELISA），為進一步評價該ELISA方法的性能，本研究通過檢測PRV感染血清、免疫血清和臨床血清樣品，通過與商品化的愛德士PRV gB抗體ELISA試劑盒對比，所研制EL ISA方法的特異性和敏感性，二者的符合率為92.6%，可以用于評價豬PRY gB抗體，為PRY免疫抗體監測、母源抗體評估以及免疫程序制定提供參考依據。