食用菌液體菌種發(fā)酵罐專用母種制作方法

白胡木吉力圖　白福林　哈斯圖力古爾　刁雅娟　錢丹珠

摘 要：本文介紹了液體專用母種的制作過程、培養(yǎng)終點(diǎn)及質(zhì)量好壞的判斷、液體專用母種生產(chǎn)中應(yīng)注意的問題等內(nèi)容。

關(guān)鍵詞：液體菌種；培養(yǎng)器；母種

中圖分類號：S646 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A DOI：10.11974/nyyjs.20160432006

在液體菌種培養(yǎng)器的使用越來越普及時(shí)種植戶遇到了不會制作液體菌種培養(yǎng)器專用母種的難題，影響了種植戶使用液體菌種培養(yǎng)器這種先進(jìn)設(shè)備的積極性。本文介紹其制作方法如下：

1 液體專用母種的制作過程

1.1 試管斜面種的制作

采用PDA綜合培養(yǎng)基。另外，根據(jù)不同需要可以采用營養(yǎng)加富培養(yǎng)基，即在上述配方外加入20g麩皮或0.5g蛋白胨；用漏斗將培養(yǎng)基分裝至試管1/5～1/4處，試管口壁不粘培養(yǎng)基；梳棉制作大小合適的棉塞，松緊適度，塞入試管內(nèi)1.5 ～2.0cm，外露0.5 ～1.0cm7支或10支捆成1捆，管口用牛皮紙包好，直立于滅菌鍋內(nèi)，準(zhǔn)備滅菌；121～126℃（0.11 ～0.15MPa）的條件下滅菌30min，將培養(yǎng)基冷卻至60～70℃時(shí)將滅好菌的培養(yǎng)擺成斜面，冷卻備用；當(dāng)培養(yǎng)基溫度降至30℃以下時(shí)，無菌室內(nèi)將菌種用接種鉤接入空白培養(yǎng)基上，動作迅速、準(zhǔn)確；根據(jù)不同的品種選擇其適宜的溫度避光培養(yǎng)，常規(guī)品種22～26℃，高溫品種29～31℃，一般7～11d即可長好，菌絲生長健壯、潔白、均勻、無任何雜菌污染的菌種為優(yōu)良菌種。

1.2 搖瓶種的制作

按液體培養(yǎng)基的配料辦法按一定的配比制作培養(yǎng)基（土豆20%、麩皮45%～5%、紅糖1.2%～5%、葡萄糖1.5%、KH2PO40.2%、MgSO40.1%、蛋白胨0.3%、VB120mg/L）；每瓶裝料系數(shù)為20%～40%，即1000mL的錐形瓶裝料約200～400mL；棉塞外包1層紗布，大小要合適，上面加蓋1層牛皮紙，用線繩綁好。

121～126℃（0.11MPa～0.15MPa）的條件下滅菌30min；每瓶接入2～3塊0.5cm2～1cm2的菌塊，使菌塊盡量漂浮在液面上；把接好種的錐形瓶置搖床上（或靜置24h后），在23～25℃的條件下振蕩培養(yǎng)，一般7～10d即可長好?？梢钥匆姡坷镉写罅炕揪鶆颉⒒盍ν⒌木?；菌球形態(tài)應(yīng)大小均勻、活力旺盛、毛刺明顯，靜置5min后菌球占菌液濃度的80%以上或不分層。菌液由前期的微渾濁變得澄清透明，多數(shù)是淺黃色或橙黃色；若變得渾濁不清，則很可能是染菌。到培養(yǎng)后期菌液的糖香味會逐漸消失，取而代之的是或有或無的菌種特有的清香味；若有臭味、酸味、霉味，則可能是染菌。若以上指標(biāo)還不能判斷菌種的質(zhì)量，還可以將菌種放在20～25℃的條件下靜置48h左右。若表層菌種萌發(fā)明顯且無其它顏色的孢子，則多為正常；若有其它特殊顏色，則可能是染菌。

1.3 固體顆粒培養(yǎng)基的制作

配方有木腐類，硬雜木屑73%～78%、麩皮20%～25%、

紅糖1%、KH2PO40.2%、MgSO40.1%、石膏1%、含水量60%～63%；草腐類，谷粒40%～50%、麩皮20%～25%、紅糖1%、木屑20%～25%、KH2PO40.2%、MgSO40.1%、石膏1%～2%、含水量60%～63%。注：其中雜木屑和麩皮用20～40目的篩子過篩，用篩子中間的細(xì)小顆粒；用500mL錐形瓶盛裝，用壓子壓平至刻度450mL左右（每瓶約裝干料150g）；塞上大小合適外包紗布的棉塞，蓋上1層牛皮紙；在121～126℃的條件下滅菌90min；在無菌條件下用滅過菌的吸管將經(jīng)過測生長正常的搖瓶種接到滅好菌的固體培養(yǎng)基上，每瓶接入10mL；把接好種的菌瓶置24～26℃下培養(yǎng)，待菌絲長滿后可以使用；用肉眼觀察將菌絲生長弱、慢及有其它異常情況的菌種瓶挑出不用，生長良好的菌種一般菌絲短、密、齊，菌絲顏色潔白一致，無任何雜菌。

2 液體專用母種生產(chǎn)中應(yīng)注意的問題

2.1 制定好生產(chǎn)計(jì)劃、嚴(yán)格執(zhí)行生產(chǎn)操作程序

制定好生產(chǎn)計(jì)劃，合理安排各級菌種的生產(chǎn)時(shí)間，保持其生產(chǎn)的連續(xù)性，保證菌種在最佳狀態(tài)時(shí)得到應(yīng)用。嚴(yán)格執(zhí)行菌種的生產(chǎn)操作程序，保證菌種的純度、質(zhì)量和合格率。

2.2 保證菌種的可靠性

能及時(shí)準(zhǔn)確地判斷出作為各類種源的菌種是否染菌，特別是搖瓶種，更應(yīng)該通過各種途徑保證其可靠性。

2.3 保存好母種

液體專用母種長好后應(yīng)在1～5℃條件下避光保存，在1個(gè)月之內(nèi)使用效果最好。

2.4 熟練生產(chǎn)工藝操作

在生產(chǎn)初期，如果自己不會制作母種，可以從專業(yè)制作廠家購買專用母種進(jìn)行生產(chǎn)或用搖瓶種生產(chǎn)，以便于熟練生產(chǎn)工藝操作，及時(shí)準(zhǔn)確判斷操作中可能出現(xiàn)的問題。

參考文獻(xiàn)

[1] 王德芝，張水成，王賢香等.食用菌生產(chǎn)技術(shù)[M].北京：中國輕工業(yè)出版社，2007：167-183.

作者簡介：白胡木吉力圖（1973-），男，通遼職業(yè)學(xué)院副教授、農(nóng)學(xué)碩士，從事食用菌育種與栽培研究。