闌尾組織的免疫表達及其應用價值*

李明顯 周 娜 何青蓮 鄭廣娟 杜曉華 謝興意 馮 兵

廣州中醫藥大學第二附屬醫院(廣東省中醫院)，廣東省廣州市 510120

免疫組化技術[1]在病理診斷中的作用十分重要，免疫染色結果的穩定性和可靠性依賴于免疫組化對照的設置[2]。組織芯片是將數十個甚至上千個組織標本規則有序地排布于一張載玻片上，進行同一指標檢測的原位組織學研究技術，具有容量大、高效率、低消耗、定位準確等諸多優點，適用于免疫組化的質量控制及室間評價。但是，由于組織芯片制作技術的完善離不開專業的儀器設備和種類豐富的組織標本，再者，商品化的組織芯片價格較高[3]，這些因素都阻礙了基層醫院免疫組化質量控制方面的發展。為了尋找抗原標記物表達較廣泛的組織以滿足日常工作中免疫組化質量控制的要求，筆者對臨床常見且富含多種組織成分的闌尾組織進行了相關的免疫組化染色。

1 材料與方法

1.1 標本來源 選取廣東省中醫院2018年5—10月進行闌尾切除并診斷為慢性闌尾炎、急性單純性闌尾炎、急性化膿性闌尾炎和急性壞疽性闌尾炎患者各15例，所有患者術前均無腫瘤及免疫疾病相關病史，診斷報告由兩位主治以上醫師簽發。

1.2 儀器設備 ES全自動封閉式組織處理儀購自美國Thermo Fisher公司，BENCHMARK@XT全自動免疫組化儀購自美國Roche公司，即用型抗體購自泉暉、邁新、中杉金橋、基因等生物公司。

1.3 方法 闌尾組織10%中性福爾馬林固定，常規脫水、石蠟包埋，依次連續切片，每張玻片上均設立相應陽性質控對照組織，68℃烤片1h，免疫組化采用SP法，實驗操作步驟均嚴格按照全自動免疫組化儀的設定程序，染色結果由2位主治醫師判讀。

2 結果

慢性闌尾炎、急性單純性闌尾炎、急性化膿性闌尾炎和急性壞疽性闌尾炎組織中抗體染色陽性種類平均分別為104種、82種、65種、46種。慢性闌尾炎組織中的抗體染色陽性種類均穩定表達，其表達的種類范圍涵蓋了其余3種急性闌尾炎組織中抗體染色陽性的所有種類，圖1。實驗中慢性闌尾炎組織抗體染色陽性的具體情況匯總如下：

ATRX、Calretinin、CK、CK7、CK8、CK18、CK19、CK20、CK-LMW、CEA、E-Cadherin、EMA、CDX-2、Villin、β-catenin表達于腺上皮細胞；BCL-2、BLC-6、CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、CD9、CD10、CD15、CD16、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD25、CD27、CD30、CD35、CD38、CD43、CD45、CD45RO、CD57、CD61、CD68、CD75、CD79a、CD99、CD117、CD138、CD163、CD207、CDK4、C-MYC、CyclinD1、CXCL13、FLI-1、Galectin-3、IgG、IgG4、INI-1、Ki67、kappa、Lammda、MAC387、MLH1、MSH2、MSH6、MUM-1、P120、PAX5、PAX8、PD-1、PMS2、SOX-11、TIA-1表達于黏膜下層淋巴組織細胞；CD31、CD34、D2-40、ERG、FactorⅧ、VEGF表達于血管及淋巴管的內皮細胞；AAT、AACT、CD68、CollagenⅣ、Lyosozyme、Mac387、Vimentin表達于黏膜下層的組織細胞；Caldesmon、Calponin、Desmin、HHF35、MSA、SMA、SMMHC表達于肌層平滑肌細胞；CD56、CgA、NF、NSE、Syn、S-100表達于肌層神經纖維細胞；CK(H)、CK5、CK5/6、MC表達于闌尾漿膜。

圖1 慢性闌尾炎不同組織結構的免疫表達

A.S-100神經細胞胞漿陽性 20×；B.MSA肌型細胞胞漿陽性 20×；C.CD7增生反應性T細胞細胞膜陽性 20×；D.CEA腺上皮胞漿陽性 20×。

3 討論

免疫組織化學技術已成為病理診斷中必不可少的輔助工具，近年出現的組織芯片技術通過科學合理的設計使得大規模的免疫組化質量控制工作變得簡便易行，但組織芯片技術在開展過程中仍然存在一些問題。首先，組織取材的大小及取樣深度[4]能否真實反映異質性腫瘤的全部信息是芯片設計中經常遇到的問題；組織固定、處理時間、包埋條件及自身硬度的差別也會影響組織芯片的制作質量；組織芯片的組織來源尤其是少見或罕見的組織標本收集十分困難，因此組織芯片技術的推廣應用具有一定的難度。

闌尾炎是一種臨床常見病，根據病程常分為慢性闌尾炎和急性闌尾炎，急性闌尾炎包括急性單純性闌尾炎、急性化膿性闌尾炎、急性壞疽闌尾炎三種主要類型，手術摘除的闌尾組織是病理科常見的病理標本。闌尾由上皮組織、黏膜下層、肌層組織和淋巴組織四部分組成，含有上皮、淋巴組織、平滑肌、間質、神經等不同胚層發育而來的各種組織[5]，能夠表達多種抗原，可作為質控對照組織用于大部分常用抗體的檢測。本實驗通過比較不同類型的闌尾炎組織，發現抗體染色陽性的穩定表達及表達種類與患者的性別和年齡無關，而與闌尾組織的壞死程度相關。慢性闌尾炎組織因無壞死成分，抗體染色陽性的種類具有一致性，均為104種；而急性闌尾炎組織由于發生了不同程度的壞死，以間皮、腺上皮細胞及黏膜下淋巴組織影響最嚴重，抗體染色陽性的種類均少于慢性闌尾炎組織，即使同一類型的急性闌尾炎組織抗體染色陽性的種類因壞死程度的不同而存在一定差異，因此慢性闌尾炎組織可以作為一種簡易而又高效穩定表達的質控對照組織。在確認將慢性闌尾炎組織作為合格的質控對照組織前需進行HE染色觀察判斷，以保證所選的組織包含上皮組織、黏膜下層、肌層組織和淋巴組織，而且包含至少1個淋巴濾泡。實驗中發現，當闌尾組織管徑≥1cm時，沿組織切面的直徑切開可以得到兩個合格的質控對照組織[6]。因此可以將闌尾組織與其他類型的組織進行組合，以進一步擴大新型組合的組織芯片的免疫表達種類，為免疫組化質量控制工作帶來更多方便。在實際工作應用中尚需要注意以下幾點：(1)需在病理報告工作完成后再對闌尾組織進行質控對照實驗，同時盡量避開含糞石的組織或清洗干凈，以便于切片制作。(2)闌尾組織每次制備200張組織切片后都應將最后一張切片進行HE染色，以確定制備的質控對照切片合格和剩余組織結構的完整性及變化趨勢，為下次質控對照工作做好隨時調整的準備。(3)質控對照切片制備數量以滿足1周的工作量需求為宜，且需放置在4℃冰箱保存[6]。(4)定期更換新鮮固定液，24～48h后再進行脫水處理，以防止固定不足影響抗體染色的穩定表達。

總之，慢性闌尾炎組織可表達種類廣泛的抗原，與組織芯片相比，具有組織來源豐富、制作簡單、成本低的優點，因此利用闌尾組織制作免疫組化的質控對照是一種簡單實用而又高效的方法，不但適用于基層醫院，其他醫院也可以參考借鑒，值得推廣。