小兒氨酚黃那敏顆粒有關物質對氯苯乙酰胺檢測方法的建立

郭艷　劉英來　李洪建　趙清爽　邢耘

[摘 要]文章旨在建立小兒氨酚黃那敏顆粒中有關物質對氯本乙酰胺的檢測方法。文章采用高效液相色譜法，對該成分的檢測方法進行了摸索，結果顯示所建方法簡便，專屬性強，對氯苯乙酰胺與對乙酰氨基酚能夠有效分離，可用于測定小兒氨酚黃那敏顆粒中有關物質對氯苯乙酰胺。

[關鍵詞]小兒氨酚黃那敏；有關物質；對氯苯乙酰胺；檢測方法

[DOI]10.13939/j.cnki.zgsc.2016.36.247

小兒氨酚黃那敏顆粒為甲類非處方兒童感冒藥，適用于緩解兒童普通感冒及流行性感冒引起的發熱、頭痛、四肢酸痛、打噴嚏等癥狀。本品收載于國家藥品標準地方標準上升國家標準第三冊[WS-10001-（HD-0214）-2002]，但質量標準中無有關物質檢查項，該制劑中對氯苯乙酰胺為對乙酰氨基酚的工藝雜質，具有遺傳毒性結構，故建立該檢測方法，有利于提高患者用藥安全性。

1 儀器與試藥

Agilent1260高效液相色譜儀；小兒氨酚黃那敏顆粒[葵花藥業集團（衡水）得菲爾有限公司，批號：110801]；對乙酰氨基酚[河北冀衡（集團）有限公司]，對乙酰氨基酚對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：100078-200414）對氯苯乙酰胺對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：100850-201102）；甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：迪馬C8色譜柱（4.6mm×250mm，5μm）；流動相：磷酸鹽緩沖液（取磷酸氫二鈉8.95g，磷酸二氫鈉3.9g，加水溶解至1000ml，加10%四丁基氫氧化銨12ml）—甲醇（60∶40）；檢測波長為245nm；柱溫：40℃；流速：1.0mL·min-1；進樣量：20μl。

2.2 測定方法

精密稱取對乙酰氨基酚含量測定項下的細粉適量（約相當于對乙酰氨基酚200mg），置容量瓶中，精密量取溶劑[甲醇-水（4∶6）]制成1ml中約含20mg對乙酰氨基酚的溶液，搖勻過濾，取續濾液作為供試品溶液；另精密量取對氯苯乙酰胺對照品和對乙酰氨基酚對照品適量，用溶劑[甲醇-水（4∶6）]溶解并稀釋制成1ml中各含1μg的混合溶液，作為對照品溶液。照色譜條件，精密吸取對照品溶液20ul，注入液相色譜儀，調節檢測靈敏度，使對氯苯乙酰胺色譜峰的峰高約為滿量程的10%，再精密量取供試品溶液與對照品溶液各20ul，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖；按外標法以峰面積計算，含對氯苯乙酰胺不得過0.005%。

2.3 專屬性試驗

2.3.1 空白干擾試驗

精密稱取陰性制劑（按處方量除對乙酰氨基酚外的其他原料與輔料）約3.2g，置25ml量瓶中，加入溶劑10ml使溶解，搖勻，作為陰性空白溶液，精密量取20ul注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結果在對氯苯乙酰胺對照品相應保留時間處未出峰，表明空白無干擾。

2.3.2 破壞性試驗

取供試品1批（批號：110801）置表面皿中，于5000lx強光下和60℃水浴中放置6個小時；用流動相溶解并稀釋成1ug/ml的溶液，作為強光破壞和高溫破壞溶液。分別精密量取強光破壞和高溫破壞溶液20ul分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。各破壞溶液分別進行檢測，結果見下圖，表明小兒氨酚黃那敏顆粒在高溫、強光、氧化破壞條件下均未生產對氯苯乙酰胺。表明對氯苯乙酰胺并非對乙酰氨基酚降解而產生，其來源是對乙酰氨基酚原料藥制備過程中引入的雜質。

小兒氨酚黃那敏顆粒破壞性試驗的色譜

2.4 線性關系考察

精密稱取對氯苯乙酰胺對照品10mg，置100ml量瓶中，加溶劑[甲醇-水（4∶6）]溶解，并稀釋至刻度，搖勻，作為對氯苯乙酰胺對照溶液A，精密量取對氯苯乙酰胺溶液A 0.2ml，0.5ml，0.8ml，1.0ml，1.2ml，1.5ml分別置100ml容量瓶中，加流動相溶解并定容至刻度。分別精密量取上述溶液注入色譜儀進行測定，記錄色譜圖。以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，進行線性回歸，回歸方程為：y=212139x+1694.7，其中R2=0.999，表明對氯苯乙酰胺濃度在0.06882μg/ml～1.7205μg/ml范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

2.5 供試品溶液穩定性試驗

取制備好的供試品溶液分別于0、2、4、6、8h進行測定，其RSD均小于2%，且雜質個數未見增加，結果表明該溶液在8h內穩定性良好。

2.6 精密度試驗

取樣品6份，分別加入一定量的對氯苯乙酰胺對照品，由不同的分析人員，在不同的設備上，按有關物質對氯苯乙酰胺的方法測定，記錄色譜圖。結果表明，儀器精密度良好。

2.7 最低檢測限

精密稱取對氯苯乙酰胺對照品適量，加溶劑稀釋制成約含1ug/ml對氯苯乙酰胺的溶液，進樣，精密吸取20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。當信噪比為3∶1時，對照品溶液濃度即為最低檢測濃度，經計算得出對氯苯乙酰胺的檢測限為0.4ng。

2.8 定量限

精密稱取對氯苯乙酰胺對照品和對乙酰氨基酚對照品適量，用溶劑[甲醇-水（4∶6）]溶解并稀釋制成1ml中各含1μg的混合溶液，精密量取上述混合溶液3ml，置50ml容量瓶中，加入溶劑稀釋至刻度，搖勻，即為最低定量限濃度的溶液，配制6份。依法測定，當信噪比比例為10∶1，即為定量限，記錄色譜圖，經計算定量限為1.2ng。

2.9 樣品有關物質的測定

取3批樣品，按照 “2.2”項下進行測定，供試品有關物質測定結果見下表。

3 討 論

3.1 耐用性的考察

分別考察流動相比例變化±5%、柱溫變化、不同型號色譜柱，鑒于樣品中未檢測出對氯苯乙酰胺，為驗證方法的耐用性，我們向樣品中添加一定量的對氯苯乙酰胺對照品進行測定，結果表明流動相比例變化±5%，柱溫變化±5℃以及不同型號色譜柱條件下，對氯苯乙酰胺峰與對乙酰氨基酚峰的分離度符合要求，色譜峰峰形良好，試驗結果無差別，表明該檢測方法耐用性強。

3.2 結論

本文中有關物質對氯苯乙酰胺的測定方法符合方法學的各項要求，并且對不同型號的色譜柱、不同柱溫等有良好的耐用性，從兒童用藥安全性角度考慮，建立本品有關物質對氯苯乙酰胺檢測方法有著十分重要的意義。因此，建議將該方法定入小兒氨酚黃那敏顆粒的質量標準中。

參考文獻：

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].二部.北京：化學工業出版社，2010：234.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].二部.北京：化學工業出版社，2010：194.