幾種常見(jiàn)酶對(duì)何首烏生物轉(zhuǎn)化的初步探索

陳　珍，黃福榮，馬春霓

楚雄醫(yī)藥高等專科學(xué)校藥學(xué)系，云南楚雄　 675005

幾種常見(jiàn)酶對(duì)何首烏生物轉(zhuǎn)化的初步探索

陳珍，黃福榮，馬春霓

楚雄醫(yī)藥高等專科學(xué)校藥學(xué)系，云南楚雄 675005

生物轉(zhuǎn)化［1］本質(zhì)是利用生物體系本身所產(chǎn)生的酶對(duì)外源化合物進(jìn)行酶催化反應(yīng)，它具有反應(yīng)選擇性強(qiáng)，反應(yīng)條件溫和，副產(chǎn)物少，不造成環(huán)境污染和后處理簡(jiǎn)單等特點(diǎn)。本課題探討利用幾種常見(jiàn)酶直接對(duì)何首烏進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化，拓展轉(zhuǎn)化途徑，以期得到對(duì)何首烏有轉(zhuǎn)化作用的酶。

生物轉(zhuǎn)化；何首烏；酶

1　實(shí)驗(yàn)儀器及材料

1.1實(shí)驗(yàn)材料

何首烏產(chǎn)自云南省祿勸縣，經(jīng)云南中醫(yī)學(xué)院趙榮華教授鑒定為蓼科植物何首烏（Polygonum multiflorum Thunb.）的干燥根，打粉備用。

酶：纖維素酶、淀粉酶、蛋白酶、甘露聚糖酶、葡聚糖酶、木聚糖酶、果膠酶，均購(gòu)買自云南師范大學(xué)生化學(xué)院。

1.2實(shí)驗(yàn)儀器

ZHWY-MB型恒溫培養(yǎng)振蕩器（上海智誠(chéng)分析儀器制造有限公司）、artorius Bs224s電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）等。

2　實(shí)驗(yàn)方法

2.1何首烏水提物的制備［2］

分別稱取5g何首烏粉末，置于錐形瓶中，分別加入5倍量的水，超聲提取1h，超聲功率25kHz。提取完成后，將樣品分3組，第一組作為空白，第二組用濾紙過(guò)濾，第三組不過(guò)濾。

2.2酶解

每一種酶分別等量加入過(guò)濾（第二組）和未過(guò)濾（第三組）的何首烏提取液中，分別做3個(gè)水平，各組中加入情況見(jiàn)表1。

表1　各組實(shí)驗(yàn)酶的加入量和反應(yīng)條件情況表

各組分別按照表1所示溫度在搖床中酶解48h。

2.3利用TCL進(jìn)行酶解結(jié)果的檢測(cè)

依照2010年版《中華人民共和國(guó)藥典》（一部）薄層色譜法（附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，分別以乙酸乙酯：甲醇：甲酸=15：1：0.5、環(huán)己烷：乙酸乙酯：甲酸=2：1：0.2、氯仿：甲醇：甲酸=9：1：0.2為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，檢視。

3　實(shí)驗(yàn)結(jié)果

除了纖維素酶外，其他的各種酶對(duì)何首烏超聲水提物的化學(xué)成分沒(méi)有明顯的影響。

表2　纖維素酶對(duì)二苯乙烯苷的酶解條件

4　纖維素酶對(duì)二苯乙烯苷的生物轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)

在上面實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，我們篩選出纖維素酶，它對(duì)何首烏的化學(xué)成分有轉(zhuǎn)化作用，為了驗(yàn)證此結(jié)果，直接再用纖維素酶轉(zhuǎn)化何首烏的蒽醌類成分，以期得到同樣的結(jié)果。

實(shí)驗(yàn)方法：

稱取二苯乙烯苷結(jié)晶3份，每份0.9g，分別往其中加30mL超純水，各份處理過(guò)程如表2所示。

各組分別按照上表所示條件在搖床中酶解48h。

5　實(shí)驗(yàn)結(jié)果

按照表2處理完后，對(duì)各樣品進(jìn)行過(guò)濾，各吸取5μL，進(jìn)行薄層檢測(cè)，展開(kāi)劑為：乙酸乙酯：甲醇：甲酸=15：1：0.5。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖1。

從薄層上顯示，纖維素酶對(duì)二苯乙烯苷有一定的破壞作用。

［1］李丹，李曉磊，李榮和.纖維素酶水解大豆異黃酮糖苷混合物的抗氧化活性［J］.食品研究與開(kāi)發(fā)，2008，8（29）：1-4.

［2］腺知.利用微生物代謝酶轉(zhuǎn)化白藜蘆醇及大豆異黃酮的方法研究［J］.解放軍醫(yī)學(xué)雜志，2008，33（11）：1344.

Q-3

A

1674-6708（2016）166-0195-02

陳珍，楚雄醫(yī)藥高等專科學(xué)校藥學(xué)系。黃福榮，楚雄醫(yī)藥高等專科學(xué)校藥學(xué)系。馬春霓，楚雄醫(yī)藥高等專科學(xué)校藥學(xué)系。