茉莉花窨制前后總黃酮含量的測定*

代容春，林榮華

（福建師范大學生命科學學院，福建 福州 350108）

茉莉花窨制前后總黃酮含量的測定*

代容春，林榮華

（福建師范大學生命科學學院，福建 福州 350108）

以正交試驗法優化后的超聲波提取工藝提取總黃酮，聚酰胺吸附提純，蘆丁為標準品，用分光光度法于510nm處測定了茉莉花窨制前后的總黃酮含量。結果表明：蘆丁濃度在10.0～50.0mg .L-1內線性關系良好，回歸方程為y=0.0101x+0.0047，相關系數R2=0.9991，平均回收率為100.43%（RSD=4.397%）。窨制前的茉莉花總黃酮含量為2.806%，窨制后的茉莉花總黃酮含量為2.656%；差異顯著性分析可知，2個樣品總黃酮含量差異不顯著。研究結果可為利用茉莉花渣生產黃酮類藥用成分提供科學根據。

茉莉花；窨制；總黃酮；含量測定；正交試驗

茉莉(Jasminum sambac(L.)Ait)為木犀科多年生常綠灌木，多分布于熱帶、亞熱帶和溫帶地區，我國以江蘇、浙江、福建、臺灣、廣東、四川、云南等地分布最為廣泛[1]。茉莉的根、葉、花均有藥用價值。根有麻醉、止痛之功效，可以用于治療失眠、頭痛、齲齒、跌打損傷；葉用于治療外感發熱、腹脹腹瀉；花可用于治療腹脹腹瀉、結膜炎、皮炎、瘡毒等[2-4]。關于茉莉的藥用成分多數研究者認為主要為黃酮類與多糖類化合物，韋英亮等的初步研究也表明，從茉莉花渣中所提取的黃酮化合物對某些人類腫瘤細胞在體外試驗時表現出一定的細胞毒性 [5-6]。

茉莉花是我國具有相當經濟價值的重要花卉，大量栽培主要用于采摘茉莉花以窨制茉莉花茶或加工成價值昂貴的天然香精。目前，我國茉莉花茶年產量穩定在11～12萬t之間，由此產生了大量的茉莉花渣[7]。茉莉花渣是茉莉花苞經過花茶窨制后的廢棄物，是茉莉花茶加工過程中主要的下腳料，在此過程中有20%～25%的芳香油物質被茶葉吸收，其它化學成分的變化尚未見詳細報道。本研究采用超聲波提取法提取總黃酮，比色法測定茉莉花窨制前后總黃酮含量的變化，為合理利用茉莉花渣，實現廢物循環利用和農業的可持續發展打下基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

蘆?。篊27H30O16·3H2O，相對分子質量為664.57，上海試劑二廠生產。聚酰胺粉：80～100目，以70%乙醇預處理。

窨制前的茉莉花（樣品I）和窨制后的茉莉花（樣品II），由福州春倫茶業有限公司提供。樣品處理方法為自然晾干，80℃恒溫干燥2 h后粉碎過篩。

1.2 儀器

UV-1100型紫外可見分光光度計（上海美譜達儀器有限公司）、RE-52CS型旋轉蒸發儀（上海亞榮生化儀器廠）、數控超聲波清洗器KQ3200-DV（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 超聲波提取工藝的優化

以窨制前的茉莉花為材料，在單因素試驗的基礎上，選用正交表L9（34）對超聲波提取工藝的4個主要因素（溫度、時間、乙醇濃度、料液比）進行正交實驗，各因素的水平表見表1。

表1 正交試驗因素水平表

1.3.2 總黃酮的提取及純化

稱取過60目篩的樣品干燥粉末10 g，按表1正交試驗結果獲得的最佳超聲波提取工藝提取總黃酮，過濾后濾渣重復提取1次。合并濾液，減壓濃縮至適量，以石油醚反復萃取脫脂，棄去醚層。濾液進一步濃縮至浸膏狀，用70%乙醇溶解并定容至100ml。

準確吸取提取液5ml，加200mg聚酰胺粉攪勻，轉移到裝有400mg聚酰胺粉的砂芯層析柱中，用乙醇梯度洗脫，洗脫順序為35%乙醇（20ml）→55%乙醇（20ml）→75%乙醇（20ml）→95%乙醇（20ml）→無水乙醇（20ml）。收集各級洗脫液，合并濃縮，用70%乙醇定容至100ml，備測。

1.3.3 最大吸收波長的選擇

以NaNO2、Al(NO3)3、NaOH為顯色劑，分別作樣品I、樣品II提取液以及蘆丁標準品的吸收曲線，三者均在510nm處有一強吸收，因此選擇510nm為測定波長。

1.3.4 蘆丁濃度與吸光度的關系確定

精密稱取蘆丁標樣10mg（80℃干燥至恒重），用70%乙醇溶解，然后轉移至100ml容量瓶中，70%乙醇定容，搖勻，即得0.1mg .mL-1的蘆丁標液。分別取0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml蘆丁標液于6個10ml容量瓶中，各加70%乙醇使成5ml，加入5%NaNO2溶液0.3ml搖勻，放置6min后，加10%Al(NO3)3溶液0.3ml，搖勻放置6min后加入1 mol .L-1NaOH溶液4ml，再加蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，放置15min后于510nm波長處測定OD值，以蘆丁空白為參比，繪制標準曲線。

1.3.5 總黃酮含量的測定

分別吸取樣品I和樣品II提取液1.0ml于10ml容量瓶中，按標準蘆丁—吸光度測定法，以樣液空白參比，于510nm波長下測定OD值，通過標準曲線計算各樣液總黃酮含量，最后換算成各樣品的總黃酮含量百分率，即得率（以蘆丁計）。

2 結果與分析

2.1 標準曲線的制作

以OD值為縱坐標，蘆丁標準品含量（mg.L-1）為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程為y=0.0101x+0.0047,相關系數R2=0.9991，表明蘆丁濃度在10.0～50.0mg.L-1具有良好的線性關系，見表2。

表2 蘆丁標準曲線

表3 正交實驗結果表

表4 茉莉花窨制前后總黃酮含量測定結果（按蘆丁計算）

表5 加標回收試驗結果

2.2 超聲波提取工藝的優化

以總黃酮得率為指標，L9（34）正交試驗結果見表3。由正交試驗結果可以看出，6號樣品總黃酮的得率最高，為2.850%。極差分析可知，各因素對總黃酮提取得率影響的大小順序為：A>B>D>C。試驗較優條件為A2B3C1D2，即茉莉花總黃酮超聲波提取的最佳工藝為溫度55℃、時間90min、乙醇濃度70%、料液比1:15。

2.3 總黃酮含量的測定

2個樣品總黃酮含量測定結果見表4。窨制前的茉莉花總黃酮含量為2.806%；窨制后的茉莉花總黃酮含量為2.656%。經LSD檢驗進行差異顯著性分析可知，2個樣品總黃酮含量差異不顯著（P=0.05）。

2.4 顯色穩定性試驗

各樣品提取液及蘆丁標準品顯色反應較穩定。在45min內每隔15min測定其吸光度，吸光度值均未發生改變。

2.5 加標回收試驗

稱取以上樣品6份，分別添加質量濃度為0.1mg.mL-1的蘆丁標樣3.9ml，按前述操作進行提取、層析、測定。以加標測得量減去原樣含量，除以加標量，計算回收率，其結果見表5。平均回收率為100.43%，標準差為4.416%，相對標準差為4.397%。

3 討論

早期茉莉花渣無有效的利用途徑，除了少量用做豬飼料外，有的被排放江河，有的長期堆放后腐敗，造成資源的極大浪費和環境的污染[8]。研究以正交試驗法優化后的超聲波提取工藝提取總黃酮，利用聚酰胺吸附提純與常用的硝酸鋁顯色法相結合，測定茉莉花窨制前后的總黃酮含量。結果表明，窨制前的茉莉花總黃酮含量為2.806%，窨制后的茉莉花總黃酮含量為2.656%，二者差異不顯著。黃酮類化合物具有抗癌、抗腫瘤、抗心腦血管疾病、抗炎鎮痛、免疫調節、降血糖、治療骨質疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗輻射等作用[9-14]。鑒于窨制后的茉莉花渣資源豐富，黃酮含量較高，藥用價值大，作者認為可以大力開發利用其黃酮類藥用成分，為利用茉莉花渣生產黃酮類藥用成分提供科學依據。

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10.3969/j.issn.1007-550X.2016.08.001

Q946

A

1007-550X（2016）08-0038-04

福建省教育廳資助項目(編號：JA13072)。

2016-06-19

代容春(1973-)，女，福建仙游人，副教授，碩士，主要從事植物生理學和植物細胞工程研究。