水中糞大腸菌群檢測方法的研究

張綺純，劉森林，李 燕，林建華

(廣東省深圳市龍崗區環境監測站，廣東 深圳 518172)

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水中糞大腸菌群檢測方法的研究

張綺純，劉森林，李 燕，林建華

(廣東省深圳市龍崗區環境監測站，廣東 深圳 518172)

運用多管發酵法和濾膜法對水庫水、自來水、井水糞大腸菌群進行了檢測，結果表明：多管發酵法檢測水樣，過程耗時費力。濾膜法檢測水樣，過程快速簡便。兩種方法所得檢測結果具有可比性，準確可靠。

糞大腸菌群；多管發酵法；濾膜法；比較研究

1　引言

糞大腸菌群系指在44 ℃下能生長并發酵乳糖產酸產氣的一組微生物。2001年國家衛生部在《生活飲用水衛生標準》的基礎上，重新修定頒布了《生活飲用水衛生規范》，新增加了糞大腸菌群為常規必檢項目。主要以該菌群的檢出情況來表示檢樣中是否有有機物污染。糞大腸菌群數的高低也預示了其對人體健康危害性的大小。

2　材料與方法

2.1材料

乳糖蛋白胨培養基、EC肉湯培養基、M-FC培養基、MilliflexPlusPump過濾器、MILLIPORE濾膜0.45 μm、滅菌蒸餾水、超凈工作臺、高壓蒸汽滅菌器，恒溫培養箱，恒溫水浴箱，移液管、酒精燈、發酵管。采集的水庫水、自來水、井水放入冰箱保存，5 h內送達實驗室檢測。

2.2方法

2.2.1多管發酵法

多管發酵法檢測糞大腸菌群是指將待測水樣按照3個不同的接種量，接種于乳糖蛋白胨培養液中培養，每個接種量5支發酵管，分為初發酵和復發酵兩步進行。

初發酵試驗：將水樣充分混勻，水庫水、自來水、井水樣接種量分別是10 mL，1 mL和10-1mL，再分別接種到接種體積為10 mL盛有3倍濃度的乳糖蛋白胨培養液的發酵管中，接種量體積為1 mL或少于1 mL接種到普通濃度的乳糖蛋白胨培養液中，每個接種量樣品各接種5只發酵管。將上述發酵管放入37±0.5 ℃培養箱中培養 24±2 h。若培養液由原來的紫色變為黃色，則證明產酸；若小倒管產生氣泡，則說明產氣，對各個管產酸產氣陽性情況做好記錄。

復發酵試驗: 將初發酵試驗陽性發酵管搖勻，用 3 mm接種環將培養物轉接至EC培養液內。在44.5±0.5 ℃水浴中培養24±2 h，(水浴箱的水面應高于試管中培養基液面)，接種后所有EC培養液發酵管比需在30 min內放進水浴箱中，培養后立即觀察，發酵管產氣證實為糞大腸菌群陽性。

糞大腸菌結果，根據不同接種量發酵管所出現陽性管數，從糞大腸菌群數測定方法中的糞大腸菌群( MPN ) 檢數表中查得相應的MPN指數，按糞大腸菌群計算方法計算每升水中糞大腸菌群的MPN值。

2.2.2濾膜法

用經過火焰消毒并冷卻的鑷子夾取一張過濾膜放在沙濾頭上，注意濾膜網格朝上，再取出無菌的漏斗安裝到底座上，從漏斗的上邊緣按下漏斗使之牢靠的套在底座上。分別取水庫水、自來水、井水樣100 mL，50 mL和10 mL，將樣品溶液倒入漏斗中，水樣倒入后，按下Start鍵，設備即開始抽濾，過濾完成后，按下Start鍵自動進入Dry out(抽干)模式。該步驟完成后，取下濾杯，按下撥動桿，用滅過菌的鑷子夾住濾膜邊緣，將濾膜小心取下來，貼放在M-FC培養基內。

將培養皿緊密蓋好后，在44.5±0.5 ℃ 恒溫箱中培養 2 4±2 h。糞大腸菌群菌落在M-FC培養基上呈藍色或藍綠色，其他非糞大腸菌群菌落呈灰色、淡黃色或無色。計數呈藍或藍綠色的菌落，每1 L水樣中的糞大腸菌群數公式：

糞大腸菌群菌落數(L)=濾膜上生長的糞大腸菌群數×1000/ 濾過的樣品量(mL) 。

3　結果與分析

3.1精密度和準確度分析

精密度和準確度是可信性的基礎。多管發酵法對不同水樣中糞大腸菌群測定，不同水樣相對標準偏差在0.0%-5.3%之間，屬正常范圍之內。使用埃希氏大腸桿菌(Escherichia coli)進行加標回收測定實驗，回收率在85%-115%之間，表明準確度和精確度滿足分析方法的要求。多管發酵法精密度及準確度、濾膜法精密度及準確度的實驗結果見表1、表2。

表1　多管發酵法精密度及準確度實驗結果

表2　濾膜法精密度及準確度實驗結果

4　結論

(1)多管發酵法檢測不受濁度和濃度的影響適用于任何條件水樣的檢測，重復間穩定性好，準確度、精密度和可信度高。但操作繁瑣，工作量大，發酵時間長，初發酵和復發酵至少需要72 h。

(2)濾膜法檢測較清潔的水樣，再現性較好，準確度、精密度較高，精確快速提高工作效率是未來環境水質監測的發展方向。

(3)新檢測技術的應用普及，不僅與操作技術的簡易程度和精確度有關，也與檢測設備和試劑的費用高低、對環境的影響等方面有關。隨著分子生物學的發展及原理的運用，酶底物法、聚合酶鏈式反應技術、熒光原位雜交技術、自動化檢測方法等檢測技術將在未來結合傳統的多管發酵法、濾膜法等傳統方法，以提高監測能力。

[1]國家環境保護總局.水質糞大腸菌群的測定:HJ/T347-2007[S].北京：中國環境出版社,2007.

[2] 國家環境保護總局《水和廢水監測分析方法》編委會.水和廢水監測分析方法[M].北京：中國環境科學出版社，2002(10):704～705

[3]中國環境監測總站《環境水質監測質量保證手冊》編寫組.環境水質監測質量保證手冊[M].北京：化學工業出版社，1994(8).

Research on Method of Detecting Fecal Coliform in Water

Zhang Qichun, Liu Senlin, Li Yan, Lin Jianhua

(LonggangDistrictEnvironmentalMonitoringStation,Shenzhen,Guangdong518172,China)

The multiple tube fermentation and membrane filter technique were used to detect the fecal coliform in the reservoir water, tap water and well water，and the testing results showed that: when we used multiple tube fermentation method to test water samples, the process was time-consuming. When we detected water samples using the membrane method, the process was quick and easy. The test results obtained from the two methods were comparable, accurate and reliable.

fecal coliform; multi-tube fermentation method; filter method; comparative study

2016-08-07

張綺純(1977—)，女，工程師，主要從事環境監測工作。

X832

A

1674-9944(2016)16-0109-02