祁山藥醇提物提取工藝研究

侯志飛　張靜

【摘 要】目的：確定祁山藥醇提物的提取工藝。方法：采用正交法設計試驗，以皂苷提取率為指標，分別考察乙醇濃度、料液比、回流時間和回流次數四個因素的影響，對祁山藥醇提物的提取工藝進行優選。結果：最佳提取工藝為乙醇濃度80%、加醇量7倍、回流時間1.5h、回流2次。結論：對提取工藝進行驗證，工藝穩定可行。該工藝條件提取率高且穩定，為優化祁山藥醇提取工藝提供了科學依據。

【關鍵詞】祁山藥；醇提物；提取工藝；正交試驗

山藥原植物為薯蕷科植物薯蕷（Dioscorea opposita Thunb.），系多年生纏繞草質藤本，藥用其根莖，始載于《神農本草經》，列為上品。性味甘、平，歸脾、肺、腎經[1]，生用以補腎益精，益脾肺陰為主，補陰之力較強，多用于腎虛遺精、尿頻、肺虛喘咳、陰虛消渴等[2]。山藥在我國分布較為廣泛，根據產地不同，有懷山藥、淮山藥、祁山藥等。祁山藥是藥都安國“八大祁藥”之一，由于采用了頸尖采集、組培脫毒、品種選育、雜交育種和良種引進等生物技術，有效提高了中藥材的產量和品質，達到了中藥材有機產品認證標準，藥性強、口感好，在中藥材市場上有較強的競爭力。研究祁山藥的提取工藝對其產業開發和擴大藥源具有十分重要的意義，有助于提高中藥材的附加值。我國提取山藥的方法主要有微波輔助法、超聲輔助提取法等[3]。本研究從產業化考慮，以皂苷提取率為指標，采用回流提取法，用正交試驗優選祁山藥醇提物的提取工藝。

1 試藥和儀器

甲醇、乙醇（分析純，天津市康科德科技有限公司），香草醛、冰醋酸、高氯酸（分析純，天津市科密歐化學試劑有限公司）。祁山藥（購自河北省安國市藥材交易大廳，經鑒定為薯蕷科植物薯蕷Dioscorea opposita Thunb.的干燥根莖）；薯蕷皂苷元對照品（11539-200001，中國藥品生物制品檢定所）；SP-752型紫外可見分光光度計（上海光譜儀器有限公司）；JD110-4型電子天平（沈陽龍騰電子有限公司）；高速粉碎機。

2 方法和結果

2.1 溶液制備

2.1.1 制備對照品溶液

精密稱取薯蕷皂苷元對照品7.5mg，加甲醇定容至25mL得300μg/mL的對照品儲備液。分別移取薯蕷皂甙對照品儲備液1、2、3、4、5、6mL至10mL容量瓶中，加甲醇稀釋得濃度分別為30、60、90、120、150和180μg/mL的系列對照品溶液。

2.1.2 制備5%香草醛冰醋酸溶液

稱取1.0g香草醛，加20mL冰醋酸溶解。

2.2 薯蕷皂苷標準曲線制作

分別精密量取系列薯蕷皂甙對照液各1.0mL， 置于具塞試管內，使用氮吹儀揮干溶劑。然后向各試管中分別加5%香草醛冰醋酸溶液0.2mL和高氯酸0.8mL，混勻后加蓋密塞，在60℃恒溫水浴中反應15min，取出后立即以冰水冷卻。冷卻后，分別加入冰醋酸5.0mL，搖勻，靜置10min，用紫外可見分光光度計測定吸光度，測定波長為544nm。以吸光度A為縱坐標，薯蕷皂甙濃度C為橫坐標，進行線性回歸，得標準曲線回歸方程和相關系數分別為：A=0.0025C+0.0244，r=0.9921，在30-180μg/mL呈良好線性。

2.3 醇提工藝研究

2.3.1 試驗設計方案

在預實驗中分別以40%乙醇、50%乙醇、60%乙醇、70%乙醇、75%乙醇、80%乙醇、85%乙醇、90%乙醇、95%乙醇、無水乙醇等為提取溶劑進行提取。根據結果，以乙醇濃度（A）（70%、80%、95%）、料液比（B）（1：5，1：7，1：9）、回流時間（C）（0.5，1.0，1.5h）和回流次數（D）（1，2，3次）為考察因素，按L9（34）正交表設計正交試驗，實驗安排見表1。

2.3.2 實驗方法及結果

取干燥的祁山藥粉碎，過篩備用。分別取祁山藥藥材10g，按試驗設計方案進行回流提取，濾過，合并濾液，減壓濃縮回收溶劑得皂苷粗品。取皂苷粗品用甲醇溶解，定量轉移至50 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。精密吸取1 mL，置于具塞試管內，同2.2項下“使用氮吹儀…測定波長為544nm”操作步驟，測定后記錄吸光度值。通過回歸方程可計算得出樣品液的質量濃度C（μg/mL），根據藥材取樣量M（g），計算提取率。以提取率為指標，結果見表1。

表1 提取工藝L9（34）正交實驗統計表

F0.05（2，2）=19.00，F0.01（2，2）=99.00.

2.3.3 正交實驗結果分析

直觀分析及方差分析結果分別見表1。以提取率為評價指標，可見各因素對提取工藝影響為：乙醇濃度（A）>回流時間（C）>料液比（B）>回流次數（D），且A因素有顯著影響，最佳提取工藝為乙醇濃度為80%，加7倍醇，回流1.5h，回流3次。由于回流2次與回流3次差異不到，考慮到節約能源和時間、提高提取效率等方面，確定最佳提取工藝乙醇濃度為80%、加7倍醇、回流1.5h、回流2次。

2.3.4 工藝驗證

采用上述提取工藝，制備樣品液，進行重復驗證試驗，得到山藥皂苷平均提取率為0.1906%，表明提取率比較穩定，說明確定的最佳工藝是合理的。

3 小結和討論

3.1 對祁山藥水提物我們另做了工藝考察。本研究考察的是醇提工藝，若選用低濃度乙醇一些親水性物質會影響皂苷提取率，為提高醇溶成分的提取率，因此正交試驗中選擇70%、80%、95%的乙醇進行考察。

3.2 本研究所建立的以80%乙醇為溶劑的醇提法可較好地提取藥材的有效成分，更有助于藥效的充分發揮。

3.3 在實際生產中，可綜合考慮節約能源、時間等因素，來確定回流時間和次數。

3.4 本研究所建立的提取方法操作簡便，成本較低，易于生產。

【參考文獻】

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].一部，北京：化學工業出版社，2015：28.

[2]中藥名稱與應用手冊[M].河北省食品藥品監督管理局教育培訓中心，2014.

[3]李敏.山藥活性成分提取技術及藥理功能的研究進展[J].2013，44（7）：1184-1189.