艾納香提取前不同處理方法對左旋龍腦含量的影響△

王中洋，楊全，龐玉新，張影波，孫懂華

(1.廣東藥學院 中藥學院，廣東 廣州 510006；2.中國熱帶農業科學院 熱帶作物品種資源研究所/農業部華南作物基因資源與種質創制重點開放實驗室，海南 儋州 571737；3.海南省艾納香工程技術研究中心，海南 儋州 571737)

艾納香提取前不同處理方法對左旋龍腦含量的影響△

王中洋1，2，3，楊全1*，龐玉新2，3*，張影波2，3，孫懂華1，2，3

(1.廣東藥學院 中藥學院，廣東 廣州 510006；2.中國熱帶農業科學院 熱帶作物品種資源研究所/農業部華南作物基因資源與種質創制重點開放實驗室，海南 儋州 571737；3.海南省艾納香工程技術研究中心，海南 儋州 571737)

目的：研究艾納香提取前不同處理方法對艾納香中左旋龍腦含量的影響，確定合理有效的提取前處理方法。方法：以左旋龍腦為對照品，以水楊酸甲酯為內標物，采用氣相色譜法檢測不同蔭干時間、不同烘干溫度及優化潤濕處理方法的艾納香中左旋龍腦含量的變化。結果：常溫情況下左旋龍腦含量隨著干燥時間的增加而減少，新鮮樣品左旋龍腦含量以干重計為9.151 9 mg·g-1，常溫情況下左旋龍腦含量隨著干燥時間的增加而減少，24 h內減少最快；烘培溫度越高左旋龍腦損失越多，烘焙溫度超過50 ℃后損失加快，當烘焙溫度為30 ℃時含量以干重計為6.097 8 mg·g-1；料液比為1∶2、潤濕時間為20 min時樣品左旋龍腦含量最高，以干重計為4.798 3 mg·g-1。結論：艾納香鮮品左旋龍腦含量高；干燥溫度越低時間越短左旋龍腦損失越少；料液比為1∶2、潤濕時間為20 min時左旋龍腦含量最高。

艾納香；前處理；左旋龍腦；氣相色譜

艾納香為菊科艾納香屬植物艾納香Blumeabalsamifera(L.)DC.的新鮮或干燥地上部分，又名大風艾、冰片艾、大風葉、牛耳艾、娜龍(黎藥名)，主產于貴州、廣西、海南、廣東、云南和臺灣等省[1]。其中以貴州分布最為廣泛，是該地區的道地藥材之一。艾納香是獲取艾片(主要有效成分為左旋龍腦)的重要原料植物[2]。艾片為艾納香經水蒸氣蒸餾升華純化所得結晶。艾納香的提取加工主要是農戶式小生產，即便較大的生產廠家對艾納香提取前處理也沒有明確的研究[3]。實際生產中艾納香加工前處理方法主要包括新鮮樣品直接加工、蔭干后直接提取和蔭干樣品潤濕后再提取，但這幾種處理方法的優劣及每種方法的最佳條件沒有明確的研究。因此本研究對每種處理方法進行優化后，比較各種處理方法對艾納香中左旋龍腦含量影響的差異，以期對艾納香提取加工前處理方法提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器

7890A型GC儀(氫火焰離子化檢測器、G4513A型16位自動進樣器，美國Agilent公司)；KQ-500DB型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；CPA225D型十萬分之一電子分析天平(德國Sartorius公司)。

1.2 試劑

左旋龍腦對照品(阿法埃莎化學有限公司，批號：10147015，純度≥98%)；水楊酸甲酯(天津光復精細化工研究所，純度≥99.5%)；乙酸乙酯(色譜純，美國Fisher Scientific公司)；其余試劑均為分析純。

1.3 樣品

艾納香藥材于2015年5月采摘自農業部儋州熱帶藥用植物資源種質圃，經中國熱帶農業科學院龐玉新副研究員鑒定為菊科植物艾納香B.balsamifera(L.)DC.。

2 方法

2.1 材料處理

對于新采集的艾納香葉采取蔭干、烘箱烘干、蔭干后潤濕樣品等不同處理方法處理備用。

2.2 GC法檢測左旋龍腦

2.2.1 色譜條件 參考文獻[4-5]的方法檢測左旋龍腦色譜條件，HP-5石英毛細管色譜柱(30 mm×0.32 mm，0.25 μm)；以80 ℃為起始溫度，保持2 min，然后以5 ℃·min-1升溫至100 ℃，再以20 ℃·min-1升溫至200 ℃；進樣口溫度為220 ℃；氫火焰離子檢測器(FID)檢測器溫度為240 ℃；進樣量0.6 μL；分流比為9∶1。左旋龍腦對照品和艾納香供試品色譜圖見圖1。

注：1.左旋龍腦；2.水楊酸甲酯；A.水楊酸甲酯+對照品；B.供試品。圖1 左旋龍腦對照品和艾納香供試品色譜圖

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取左旋龍腦對照品適量，加乙酸乙酯溶解，置100 mL量瓶中，定容，搖勻，即得質量分數約為1.000 mg·g-1的對照品溶液。

2.2.3 內標溶液的制備 精密稱取水楊酸甲酯適量，加乙酸乙酯溶解，置100 mL量瓶中，定容，搖勻，即得質量分數約為1.000 mg·g-1的內標溶液。

2.2.4 供試品溶液的制備 參考文獻[6]的方法，分別稱取新鮮葉片約3 g，將其剪切為直徑1 mm的小段，置50 mL具塞錐形瓶中，精密移取乙酸乙酯25 mL，用封口膜封口，稱質量，超聲處理(功率：500 W，頻率：40 kHz)40 min，靜置。再次精密稱定，用相應溶劑補足減失的質量，過濾，搖勻后精密吸取2.0 mL，置10 mL量瓶中，加入內標溶液1.0 mL，加乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.5 線性關系考察 分別精密移取對照品溶液0.125、0.250、0.500、1.000、2.000 mL，置10 mL量瓶中，精密加入內標溶液1 mL，再加乙酸乙酯定容至刻度，搖勻，即得混合對照品溶液。精密吸取混合對照品溶液0.6 μL，按2.2.1色譜條件進樣測定。以對照品中左旋龍腦的質量濃度(X，mg·mL-1)為橫坐標，對照品與內標物的峰面積積分比值(Y)為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程。考察線性關系是否符合要求。

3 結果與分析

3.1 左旋龍腦檢測標準曲線

根據2.2項下檢測方法，對左旋龍腦對照品及提取液進行檢測，色譜圖見圖1。按2.2.1色譜條件測定峰面積積分值，以左旋龍腦質量濃度為橫坐標(X)，對照品左旋龍腦與內標物水楊酸甲酯的峰面積比為縱坐標(Y)繪制標準曲線，得到線性回歸方程：Y=15.407X-0.033 3，r=0.999 5，線性范圍為0.012 82～0.205 10 mg·mL-1。

3.2 不同處理方法對左旋龍腦含量的影響

3.2.1 蔭干時間對左旋龍腦含量的影響 樣品采集后蔭干處理，分別在第0、3、6、12、24、48、72、144、192 h按照2.2方法檢測艾納香葉片中左旋龍腦含量。結果見圖2。艾納香葉中左旋龍腦含量隨蔭干時間的增加而減少，且24 h內減少最快，144～192 h差異無統計學意義。

圖2 干燥時間對左旋龍腦含量影響

3.2.2 烘干溫度對艾納香中左旋龍腦含量的影響 將新鮮的樣品，分別在30、50、60、70、80、100 ℃下烘干，分別烘3 h，每個處理重復3次，采用2.2項下方法檢測艾納香葉中左旋龍腦含量。結果見圖3。艾納香葉中左旋龍腦含量隨干燥溫度的升高而減少，當溫度高于50 ℃時含量減少加快。因此在樣品干燥時應控制干燥溫度在50 ℃以下。

圖3 烘干溫度對左旋龍腦含量影響

3.2.3 蔭干后潤濕樣品對左旋龍腦含量的影響 潤濕加水量對左旋龍腦含量的影響：取蔭干7 d的樣品3.00 g，分別按照料液比1∶1、1∶3、1∶5、1∶7、1∶10加入蒸餾水，潤濕20 min，每個處理重復3次，按2.2項下方法檢測左旋龍腦含量。結果見圖4。結果顯示，加水量在1∶5時含量最高，但總體相差不大。

圖4 潤濕加水量對左旋龍腦含量的影響

潤濕時間對左旋龍腦含量的影響：取蔭干7 d的樣品3.00 g，按照1∶5的料液比加入蒸餾水，分別在第10、20、30、60、120 min取樣，每個處理重復3次，按2.2項下方法檢測左旋龍腦含量。結果見圖5，20 min后艾納香葉中左旋龍腦含量變化不大。

圖5 潤濕時間對左旋龍腦含量的影響

潤濕方法對左旋龍腦含量的影響：取蔭干7 d的樣品3.00 g，考察加水比例1∶3、1∶5、1∶7和潤濕時間10、20、30 min 交互優化，每個處理重復3次，按2.2項下方法檢測左旋龍腦含量。結果見表1，潤濕加水量為1∶5，潤濕時間為20 min時含量最高，比含量最低的處理組高出13.2%。

潤濕方法驗證：根據上述結果，取蔭干7 d的樣品3.00 g，取5份樣品按照1∶5料液比加水潤濕20 min，按2.2項下方法檢測左旋龍腦含量。結果見表2，樣品平均質量分數為4.798 3 mg·g-1，RSD值為1.9<2.0。因此，此法潤濕樣品與交互優化結果一致。

表1 潤濕方法交互實驗對左旋龍腦含量的影響

注：表中不同小寫字母代表組間差異有統計學意義。

表2 優化方法驗證結果分析

4 討論

龐玉新等[6]研究表明，艾納香蔭干前后左旋龍腦含量差異有統計學意義，蔭干后艾納香葉片中左旋龍腦含量較新鮮葉片下降33.64%。本實驗對艾納香的干燥溫度和時間及提取前潤濕處理方法進行考察及優化。結果顯示，艾納香葉中左旋龍腦含量隨蔭干時間的增加而減少，24 h內下降最快，144 h后基本穩定，艾納香樣品采收加工以鮮品最好，因此如不能及時加工則盡量在24 h內加工；艾納香葉片中左旋龍腦含量隨干燥溫度的升高而降低，且當溫度超過50 ℃后左旋龍腦損失加快，故烘干溫度越低越好。烘干效果雖較蔭干效果略好，但成本較高，因此如需干燥則可以考慮常溫蔭干。

在生產中會出現采集樣品不能及時提取加工的現象，由蔭干后潤濕加工方法進行優化的結果可知，樣品加水量1∶5，潤濕時間20 min時左旋龍腦含量最高，比最低含量高15%，但較干燥7 d的樣品左旋龍腦含量差異無統計學意義。而不同提取前處理方法對艾粉得率的影響仍需進一步研究。

[1] 官玲亮，龐玉新，王丹，等.中國民族特色藥材艾納香研究進展[J].植物遺傳資源學報，2012，13(4)：695-698.

[2] 黃衛東，呂武清.冰片的研究進展[J].中國藥業，2008，17(4)：64-66.

[3] 江興龍，潘俊鋒，等.貴州艾納香產地采收提取艾粉技術研究[J].生物質化學工程，2006，40(1)：17-20.

[4] 龐玉新，黃梅，等.黔瓊產艾納香中主要化學成分含量差異分析[J].廣東藥學院學報，2014，30(4)：448-452.

[5] 于福來，黃梅，等.栽培艾納香單株左旋龍腦和總黃酮含量變異分析[J].中國現代中藥，2014，16(8)：640-644.

[6] 龐玉新，胡雄飛，等.艾納香葉片干燥前后的左旋龍腦含量比較[J].中國藥房，2014，25(39)：3673-3675.

EffectofDifferentPretreatmentofBlumeabalsamiferaonContentofl-borneol

WANG Zhongyang1，2，3，YANGQuan1*，PANGYuxin2，3*，ZHANGYingbo2，3，SUNDonghua2，3

(1.SchoolofTraditionalChinese，GuangDongPharmaceuticalUniversity，Guangzhou510006，China；2.TropicalcropsGeneticResourcesInstitute，ChineseAcademyofTropicalAgriculturalSciences/KeyLaboratoryofCropGeneResourcesandGermplasmEnhancementinSouthernChina，Danzhou，Hainan571737，China；3.HainanProvincialEngineeringResearchCenterforBlumeabalsamifera，Danzhou，Hainan571737，China)

Objective：Study on the influence of different processing methods on the content of(l-borneol)inBlumeabalsamifera(L.)DC，to determine reasonable and effective extraction pretreatment methods.Methods：Thel-borneol as the standard，to Methylis salicylas as internal standard，using GC to detect the shadow of different time，different temperature drying of wet processing method and optimization einar centre-left spin borneol content changes.Results:L-borneol content in normal temperature decreases with the increase of drying time，Fresh samplesl-borneol content on a dry weight for 9.151 9 mg·g-1，normal temperaturel-borneol content with the increase of drying time and reduce，24 h in the fastest decline; Baking temperature higherl-borneol loss more，baking temperature more than 50 ℃ loss accelerated，when the baking temperature is 30 ℃content on a dry weight for 6.097 8 mg·g-1; Solid-liquid ratio of 1∶2，wetting time of 20 minl-borneol content in the highest dry weight 4.798 3 mg·g-1.Conclusion:Blumeabalsamiferafresh goodsl-borneol content high;Drying temperature，the lower the shorter the timel-borneol loss less; The ratio of material to liquid 1∶2，the wetting time of 20 min with the highest content ofl-borneol.

Blumeabalsamifera；pretreatment；l-borneol；GC

2015-09-16)

科技部科研院所技術開發研究專項(2013EG1343239)；貴州重大課題專項計劃(黔科合重大專項字[2013]6011號)

*

楊全，教授，研究方向：中藥資源；Email：yangquan7208@vip.163.com 龐玉新，副研究員，研究方向：南藥資源研究與開發；Tel：(0898)23300268，Email：blumeachina@126.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.3.022