HPLC測(cè)定天地從容酒中松果菊苷的含量

周海燕，田壯，李聰，郭凱，肖蘇萍

(1.中國(guó)中藥公司，北京 100195；2.國(guó)藥控股北京有限公司，北京 100077)

·健康產(chǎn)業(yè)·

HPLC測(cè)定天地從容酒中松果菊苷的含量

周海燕1*，田壯1，李聰2，郭凱1，肖蘇萍1

(1.中國(guó)中藥公司，北京100195；2.國(guó)藥控股北京有限公司，北京100077)

目的：建立天地從容酒的質(zhì)量控制方法。方法：采用HPLC法，以C18為色譜柱，流動(dòng)相為甲醇-0.1%甲酸，梯度洗脫；體積流量為1.0mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)為330nm；柱溫為35℃。結(jié)果：松果菊苷在0.0255～0.612mg·mL-1范圍內(nèi)，峰面積與進(jìn)樣量呈良好的線(xiàn)性關(guān)系，r=0.9999；平均回收率為100.59%，相對(duì)應(yīng)的RSD為1.90%；該方法精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性均良好，RSD均小于2.1%。結(jié)論：該法簡(jiǎn)便準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，靈敏度高，可用于天地從容酒中松果菊苷含量的質(zhì)量控制。

HPLC；松果菊苷；天地從容酒

天地從容酒是中國(guó)中藥公司的自主研發(fā)產(chǎn)品，選用管花肉蓯蓉、西洋參、枸杞子、黃精、紅花為原料，以清香型白酒為酒基，經(jīng)滲漉法提取、調(diào)配、靜置、低溫陳釀、微孔過(guò)濾、灌裝等主要工藝加工制成的保健酒。經(jīng)動(dòng)物功能試驗(yàn)證明，具有緩解體力疲勞的保健功能。主要原料管花肉蓯蓉，具有補(bǔ)腎陽(yáng)、益精血、潤(rùn)腸通便的功效，開(kāi)始收載于2005年版《中國(guó)藥典》作為肉蓯蓉正品使用[1]。管花肉蓯蓉分布于新疆南疆，資源比較豐富，易人工種植，目前已成為市場(chǎng)上肉蓯蓉的主流品種；作為藥食兩用品在新疆南疆地區(qū)使用具有悠久歷史，尤其是作為補(bǔ)腎壯陽(yáng)藥應(yīng)用十分廣泛，在傳統(tǒng)滋補(bǔ)方中出現(xiàn)的頻率僅次于人參，被稱(chēng)為“沙漠人參”[2]。肉蓯蓉的主要活性成分是苯乙醇苷類(lèi)化合物，而松果菊苷(echinacoside，ECH)在此類(lèi)化合物中含量最大[2-4]。研究表明，ECH具有較好的神經(jīng)保護(hù)的作用，有抗衰老、提高記憶力、調(diào)控細(xì)胞凋亡等功效，并兼有抗炎、抗菌、抗病毒、抗腫瘤、保護(hù)肝臟、提高免疫的作用[5-6]。本文選擇管花肉蓯蓉中的松果菊苷作為含量測(cè)定的指標(biāo)成分，建立高效液相色譜法監(jiān)控保健酒質(zhì)量的方法，為天地從容酒的質(zhì)量控制及保健酒研發(fā)提供參考。

1 儀器與試藥

1.1儀器

高效液相色譜儀(waters2695，美國(guó))；二極管陣列檢測(cè)器(waters2998PDA，美國(guó))；TB-215D電子分析天平(美國(guó)丹佛)。

1.2試藥

天地從容酒(批號(hào)分別為20140201、20140202、20140203)；松果菊苷對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)111670-201304)。甲醇為色譜純(美國(guó)，fisher公司)，其他試劑均為分析純，水為純凈水。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)[7]

色譜柱：C18色譜柱(AgilentZORBAXSBC18250mm×4.6mm，5μm)；流動(dòng)相：以甲醇為流動(dòng)相A，以0.1%甲酸溶液為流動(dòng)相B，按表1中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；流速：1.0mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：330nm；柱溫：35℃；進(jìn)樣量：10μL。理論板數(shù)按松果菊苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。

表1 流動(dòng)相梯度洗脫比例

2.2對(duì)照品溶液的制備

取松果菊苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加50%甲醇制成每1mL含0.51mg的溶液。

2.3供試品溶液的制備

精密量取天地從容酒5mL，置50mL棕色容量瓶，加入50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.4陰性樣品溶液的制備

按本品處方比例稱(chēng)取除肉蓯蓉外的其余中藥適量，依照制備工藝制成缺肉蓯蓉的陰性樣品，按2.3方法制備陰性樣品溶液。

2.5線(xiàn)性關(guān)系考察

取松果菊苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加50%甲醇分別稀釋成濃度為0.0255、0.051、0.102、0.204、0.306、0.408、0.51、0.612mg·mL-1，搖勻。分別精密吸取上述溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定峰面積，以松果菊苷峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)(X)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得松果菊苷回歸方程為Y=13007779X-210261，r=0.9999。結(jié)果表明，松果菊苷在0.0255～0.612mg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。

2.6專(zhuān)屬性試驗(yàn)

分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液各10μL，注入液相色譜儀，按2.1色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖。在此色譜條件下松果菊苷與其他峰達(dá)到基線(xiàn)分離，陰性對(duì)照溶液沒(méi)有干擾，專(zhuān)屬性強(qiáng)。對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液色譜圖見(jiàn)圖1-3。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)品松果菊苷色譜圖

圖2 樣品中松果菊苷色譜圖

圖3 陰性對(duì)照溶液色譜圖

2.7精密度試驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液10μL(批號(hào)：20140201)，按2.1項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算峰面積的RSD值為1.59%，表明精密度良好。

2.8穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液10μL(批號(hào)：20140201)，分別在制備后第0、3、6、9、12、18、32h進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算峰面積的RSD值為1.41%，表明供試品溶液在32h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)供試品(批號(hào)：20140201)，按2.3方法平行制備6份供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。松果菊苷峰面積的RSD值為2.01%，表明本方法重復(fù)性良好。

2.10加樣回收試驗(yàn)

精密量取已知含量的同一批號(hào)供試品(批號(hào)：20140201)6份，每份2.5mL，分別精密加入一定量的松果菊苷對(duì)照品溶液。按2.3方法操作，分別吸取供試品溶液各10μL，按2.1色譜條件測(cè)定松果菊苷的含量，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 松果菊苷加樣回收試驗(yàn)

2.11樣品測(cè)定

取天地從容酒樣品3批，分別按2.3項(xiàng)下制備供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，每個(gè)批號(hào)平行3份，每次進(jìn)樣2次。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 天地從容酒3批的檢測(cè)結(jié)果

3 討論

松果菊苷是苯乙醇苷類(lèi)化合物，極性較大，易溶于強(qiáng)極性溶劑，本文考察了水、乙醇和50%甲醇3種溶劑對(duì)松果菊苷的提取效果。結(jié)果表明50%的甲醇提取效果最好，指標(biāo)成分含量最高。

通過(guò)全波長(zhǎng)掃面法發(fā)現(xiàn)，其最大吸收波長(zhǎng)為330nm，這和《中國(guó)藥典》2015年版一部“肉蓯蓉”含量測(cè)定項(xiàng)下的一致，故其為本法的檢測(cè)波長(zhǎng)。

本研究建立了HPLC測(cè)定天地從容酒中松果菊苷的含量。方法學(xué)考察結(jié)果表明，本方法專(zhuān)屬性強(qiáng)、精密度高、重復(fù)性好、簡(jiǎn)單易行，可用于控制保健酒中松果菊苷的質(zhì)量檢測(cè)。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：90.

[2] 宋海龍，賈曉光，謝海輝.管花肉蓯蓉化學(xué)成分研究進(jìn)展[J].新疆中醫(yī)藥，2010，28(1)：76-78.

[3] 蔡鴻，鮑忠，姜勇，等.不同產(chǎn)地管花肉蓯蓉中有效成分的定量分析[J].中草藥，2007，38(3)：452-455.

[4] 劉泰然，趙海燕，羅仁才.高效液相色譜法測(cè)定保健食品中松果菊苷[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2012，22(10)：2328-2332.

[5] 魏麗麗，陳紅，姜勇，等.高效液相色譜測(cè)定松果菊苷在腦缺血大鼠血漿和腦組織中的濃度[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2011，27(5)：737-738.

[6] 張英濤，王弘，劉文芝，等.松果菊屬藥用植物的應(yīng)用基礎(chǔ)研究[J].北京大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2004，36(1)：90-93.

[7] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：135.

DeterminationofEchinacosideinTiandicongrongSpiritbyHPLC

ZHOUHaiyan1*，TIANZhuang1，LICong2，GUOKai1，XIAOSuping1

(1.ChinaNationalTraditionalChineseMedicineCorp.，Beijing100195，China；2.SinopharmGroupBeijingCo.，Ltd.，Beijing100077，China)

Objective：To establish a method for quality control of Tiandicongrong Spirit.Methods：HPLC was performed on C18column at35℃ with detection wavelength at330nm，using methanol-0.1% methane acid as mobile phase at a flow rate of1.0mL·min-1.Results：A good linear relationship is obtained between0.0255mg·mL-1to0.612mg·mL-1of echinacoside (r=0.9999).The recovery is100.59%(RSD=1.90%).Conclusion：A reversed-phase high performance liquid chromatographic method，which is relatively simple，rapid and effective for echinacoside determination in Tiandicongrong Spirit，has been developed.With this method，the peak of echinacoside could be separated completely from other interfering components in the spirit.

HPLC；echinacoside；Tiandicongrong Spirit

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.9.028

2016-07-05)

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周海燕，副主任藥師；研究方向：中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)和新產(chǎn)品開(kāi)發(fā)；E-mail：zhouhaiyan@sinopharm.com