趕黃草袋泡茶中黃酮類成分的定量分析

楊玲霞，朱旭江，劉婷婷

(1.甘肅省藥品檢驗(yàn)研究院，甘肅 蘭州 730070；2.西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院 藥學(xué)部，陜西 西安 710065)

趕黃草袋泡茶中黃酮類成分的定量分析

楊玲霞1*，朱旭江1，劉婷婷2

(1.甘肅省藥品檢驗(yàn)研究院，甘肅 蘭州 730070；2.西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院 藥學(xué)部，陜西 西安 710065)

目的：測(cè)定趕黃草袋泡茶中黃酮類成分的含量。方法：采用HPLC法，色譜柱為Kromasil C18柱(250 mm×4.0 mm，5.0 μm)；流動(dòng)相為甲醇-0.1%磷酸溶液(50∶50)；檢測(cè)波長(zhǎng)為360 nm；流速為1.0 mL·min-1；進(jìn)樣量：10 μL。結(jié)果：槲皮素、山柰酚分別在0.203 6～2.036 0、0.043 2～0.432 0 μg具有良好線性關(guān)系，平均回收率分別為98.43%(RSD=1.75%)和97.61%(RSD=2.17%)。結(jié)論：該方法準(zhǔn)確、靈敏，可用于趕黃草袋泡茶中黃酮類成分槲皮素和山柰酚的含量測(cè)定。

趕黃草袋泡茶；槲皮素；山柰酚；高效液相色譜法

趕黃草始載于明代《救荒本草》，為虎耳草科(Saxifragaceae)扯根菜屬Penthorum植物扯根菜PenthorumchinensePursh的干燥地上部分。具有清熱解毒、活血散瘀、利水消腫、退黃、平肝的功能。由于趕黃草顯著的保肝作用，利用其開發(fā)的保健品趕黃草袋泡茶也越來(lái)越受到人們的認(rèn)可。近年來(lái)關(guān)于趕黃草的化學(xué)、藥理、臨床研究已取得一定進(jìn)展，其中黃酮類化合物為其主要活性成分[1-10]。但有關(guān)趕黃草及其制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)多局限于單一的槲皮素、沒(méi)食子酸等成分的測(cè)定[11-13]。本文首次采用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定了趕黃草袋泡茶中槲皮素和山柰酚的含量，為趕黃草及其保健制劑的內(nèi)在質(zhì)量控制提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC-2010A高效液相色譜儀(日本島津公司)；AE-240型電子天平(瑞士Mettler Toledo公司)。

1.2 試藥

槲皮素對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100081-200406，含量測(cè)定以93.3%計(jì))；趕黃草袋泡茶(古藺宏安藥業(yè)有限公司，規(guī)格：1.6 g/袋，批號(hào)：130304；四川省錦云堂中藥飲片有限公司，規(guī)格：2 g/袋，批號(hào)：130201；都江堰春盛中藥飲片有限公司，規(guī)格：3 g/袋，批號(hào)：121202)；甲醇為色譜純；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Kromasil C18柱(250 mm×4.0 mm，5.0 μm)；流動(dòng)相：甲醇-0.1%磷酸溶液(50∶50)；檢測(cè)波長(zhǎng)：360 nm；流速：1.0 mL·min-1；進(jìn)樣量：10 μL。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

分別精密稱取槲皮素10.18 mg、山柰酚2.16 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得對(duì)照品儲(chǔ)備溶液(槲皮素質(zhì)量濃度為203.6 μg·mL-1、山柰酚質(zhì)量濃度為43.2 μg·mL-1)。精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備溶液5 mL，加甲醇定容至10 mL，即得對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取趕黃草袋泡茶內(nèi)容物適量，精密稱取約0.5 g，精密加入甲醇-25%鹽酸溶液(4∶1)25 mL，稱定重量，加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用甲醇-25%鹽酸溶液(4∶1)補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，用0.46 μm的微孔濾膜濾過(guò)，即得。

2.4 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10 μL，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，色譜圖見圖1。結(jié)果表明，在此色譜條件下，槲皮素和山柰酚均與樣品中其他組分色譜峰基線分離，理論塔板數(shù)按槲皮素峰計(jì)算為8491，按山柰酚計(jì)算為5862。

注：A.槲皮素和山柰酚對(duì)照品色譜圖；B.供試品色譜圖；1.槲皮素；2.山柰酚。圖1 趕黃草袋泡茶高效液相色譜圖

2.5 線性關(guān)系的考察

將對(duì)照品儲(chǔ)備溶液分別稀釋成一系列濃度梯度的對(duì)照品溶液，用0.46 μm的微孔濾膜濾過(guò)，依次進(jìn)樣10 μL。以槲皮素、山柰酚峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，進(jìn)行回歸計(jì)算，槲皮素的回歸方程為Y=4 210 317X+3931，r=1.000 0，槲皮素在0.203 6～2.036 0 μg線性關(guān)系良好；山柰酚的回歸方程為Y=4 187 350X+28 868，r=0.999 8，山柰酚在0.043 2～0.432 0 μg線性關(guān)系良好。

2.6 精密度試驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液，按2.1色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次，每次10 μL，分別計(jì)算，得槲皮素峰面積的RSD為1.25%，山柰酚峰面積的RSD為1.64%。表明該方法精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性

精密吸取同一供試品溶液10 μL，分別于0、2、4、8、16、24 h注入液相色譜儀，測(cè)定槲皮素和山柰酚的峰面積，結(jié)果槲皮素峰面積的RSD為2.37%，山柰酚峰面積的RSD為2.16%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取同一樣品(批號(hào)：121202)6份，按照2.3項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按照2.1項(xiàng)下的色譜條件依次進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果槲皮素平均含量的RSD為1.79%，山柰酚平均含量的RSD為2.41%，表明本法重復(fù)性良好。

2.9 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量的趕黃草袋泡茶樣品(古藺宏安藥業(yè)有限公司，批號(hào)：130304，槲皮素和山柰酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為5.32、1.12 mg·g-1)6份，精密稱定，分別精密加入對(duì)照品溶液適量，按2.3項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，依法測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1～2。結(jié)果表明該方法準(zhǔn)確性良好。

2.10 樣品的含量測(cè)定

取趕黃草袋泡茶按2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，照2.1項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，進(jìn)樣10 μL，記錄色譜圖峰面積，以峰面積計(jì)算樣品中槲皮素和山柰酚的含量。結(jié)果見表3。

表1 槲皮素的加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

表2 山柰酚的加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

表3 樣品含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

3 討論

現(xiàn)代生活中，人們由于壓力比較大，常伴隨一些不良的生活習(xí)慣，長(zhǎng)期飲酒已被證實(shí)是損害肝臟的第一殺手。趕黃草具有顯著的保肝作用，以其為主要原料生產(chǎn)的袋泡茶日益受到人們的青睞。但趕黃草袋泡茶生產(chǎn)廠家多，規(guī)格不一，缺乏有效的含量控制指標(biāo)。所以制定趕黃草袋泡茶的含量控制方法具有很重要的意義。

含量測(cè)定結(jié)果表明，不同廠家生產(chǎn)的袋泡茶每g所含黃酮類成分含量接近，但考慮到包裝規(guī)格的差異較大，飲用的劑量會(huì)有較大的差異，應(yīng)對(duì)袋泡茶的規(guī)格、日服用量等進(jìn)行規(guī)范。

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DeterminationofFlavonoidConstituentinGanhuangcaoTeaBagbyHPLC

YANG Lingxia1*，ZHUXujiang1，LIUTingting2

(1.InstituteforDrugControlofGansuProvince；LanzhouGansu730070，China；2.TheMedicineDivisionofFirstAffiliatedHospitalofXi’anJiaotongUniversity，Xi’an710065，China)

Objective：To establish an HPLC method for the determination of quercetin and kaempferol in Ganhuangcao tea bag.Methods：The HPLC analysis was carried out on Kromasil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)with a mixture of methanol-0.1% phosphate(50∶50)as the mobile phase.The determination wavelength was set at 360nm with the flow rate of 1.0 mL·min-1.Results：The quercetin and kaempferol showed good linearity in the range of 0.2036 ～2.036 0 μg and 0.043 2～0.432 0 μg respectively.The average recovery rate of quercetin and kaempferol were 98.43%(RSD=1.75%)and 97.61%(RSD=2.17%)，respectively.Conclusion：The method is simple and accurate.It can be used for the content determination of quercetin and kaempferol in Ganhuangcao tea bag.

Ganhuangcao tea bag；quercetin；kaempferol；HPLC

2015-09-13)

*

楊玲霞，副主任藥師，研究方向：中藥化學(xué)、中藥分析、藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究；Tel:(0931)7822945,E-mail:yanglingxia@126.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.2.021