左氧氟沙星和曲安奈德雙載藥眼用凝膠的制備Δ

樊蓮蓮，楊青青，徐翰林，張培雯，蘇文成，黃　亞，陳　宏

（1.德陽市人民醫(yī)院，四川德陽　618000；2.四川大學華西藥學院，成都　610041）

左氧氟沙星和曲安奈德雙載藥眼用凝膠的制備Δ

樊蓮蓮1＊，楊青青2，徐翰林2，張培雯1，蘇文成1，黃亞1，陳宏1

（1.德陽市人民醫(yī)院，四川德陽618000；2.四川大學華西藥學院，成都610041）

目的：制備左氧氟沙星和曲安奈德雙載藥眼用凝膠。方法：以鹽酸左氧氟沙星和醋酸曲安奈德為主藥、卡波姆940P為凝膠基質(zhì)、羥丙甲纖維素（HPMC K4M）為增黏劑，制備左氧氟沙星和曲安奈德雙載藥眼用凝膠。以凝膠的溶散時間為指標，采用單因素試驗篩選處方中卡波姆940P和HPMC K4M的濃度；測定所制雙載藥眼用凝膠的溶散時間、黏度和2種主藥的含量。結(jié)果：雙載藥眼用凝膠處方中卡波姆940P的濃度為0.4%、HPMC K4M的濃度為1.2%。所制雙載藥眼用凝膠的溶散時間不低于24 h，黏度為1 142.67 Pa·s；鹽酸左氧氟沙星含量占標示量的97.3%（RSD=0.84%，n=3），醋酸曲安奈德含量占標示量的92.97%（RSD= 1.32%，n=3）。結(jié)論：成功制得左氧氟沙星和曲安奈德雙載藥眼用凝膠。

左氧氟沙星；曲安奈德；眼用凝膠

隨著老齡化社會的到來，與年齡相關(guān)的白內(nèi)障疾病發(fā)病率也隨之增加。白內(nèi)障摘除聯(lián)合人工晶體植入術(shù)是目前治療白內(nèi)障最有效的手段，預計到2020年全國需要白內(nèi)障手術(shù)的老年患者將達到600萬。然而，因圍術(shù)期抗原刺激、手術(shù)應激、術(shù)后操作不當?shù)纫蛩匾鸬母腥炯胺歉腥拘匝装Y，嚴重者會導致視力下降，甚至失明［1-2］。因此，對于白內(nèi)障手術(shù)等眼科手術(shù)，圍術(shù)期預防性使用抗菌藥物及抗炎藥物顯得十分必要。

曲安奈德作為一種長效的糖皮質(zhì)激素，可緩解炎癥和早期毛細血管擴張，局部應用具有較強的抗炎、抗增生和抗過敏作用［3］。針對白內(nèi)障術(shù)后常見細菌，第三代喹諾酮類抗菌藥左氧氟沙星對革蘭陰性菌、部分革蘭陽性菌和厭氧菌有強大抗菌作用，且副作用發(fā)生率低，適用于各種感染性疾病的治療［4］。根據(jù)我國2015年《抗菌藥物臨床應用指導原則》，對眼科Ⅰ、Ⅱ類切口手術(shù)，例如白內(nèi)障、青光眼或角膜移植、淚囊手術(shù)、眼穿通傷等，明確規(guī)定只能局部滴眼液［5］。其主要原因為靜脈給藥到達眼部有效部位需通過血-房水屏障和血-視網(wǎng)膜屏障兩部分，使其無法發(fā)揮抗菌藥物的殺菌及抑菌效果［6］。目前市售的妥布霉素或左氧氟沙星滴眼液，滴入眼部易被眼淚稀釋流出、作用時間較短，無法保證對眼部局部細菌的殺菌及抑菌效果。因此本研究預設計一種眼用制劑左氧氟沙星和曲安奈德雙載藥眼用凝膠，以專門用于眼科Ⅰ、Ⅱ類手術(shù)局部感染的預防及治療。

1　材料

1.1儀器

pHS-3C酸度計（方舟科技有限公司）；MS分析天平（梅特勒-托利多有限公司）；DV-C數(shù)顯黏度計（Rrookfield博勒飛儀器有限公司）；Alltech2426-201梯度洗脫高效液相色譜儀（美國Alltech公司）。

1.2藥品與試劑

鹽酸左氧氟沙星原料藥（上虞京新藥業(yè)有限公司，批號：2010R005073，純度：99.4%）；醋酸曲安奈德原料藥（天津天藥藥業(yè)股份有限公司，批號：NTAC150101，純度：99.3%）；鹽酸左氧氟沙星對照品、醋酸曲安奈德對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：130455-201005、100125-201105，純度：98.6%、97.8%）；卡波姆940P（Lubrizol Advanced Materials Europe B.V. B.A，批號：0101616771）；羥丙甲纖維素（HPMC K4M，上海楷洋生物技術(shù)有限公司，批號：RF3327G310）；水為純化水，其余試劑均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1空白凝膠

2.1.1卡波姆940P濃度的篩選量取10 ml純化水，精密稱取適量卡波姆940P，均勻灑在液面上，溶脹過夜，稍加攪拌制得澄清溶液，分別制成濃度為0.2%、0.3%、0.4%、0.5%（g/ml，下同）的卡波姆940P溶液。記錄初始pH；用三乙醇胺調(diào)節(jié)pH 至4.0后，觀察性狀；再調(diào)節(jié)pH至7.4，觀察最終性狀，結(jié)果見表1。

表1　不同卡波姆940P濃度的空白凝膠性狀變化Tab 1　Characters change of blank gel with different concentration of carbopol-940P

由表1可知，卡波姆940P的濃度越大，初始pH越低，這是因為隨著卡波姆940濃度的增加，羧基的濃度也提高，從而電離出大量的H+，酸性增強。當卡波姆940P濃度為0.2%時，濃度過低，失去了pH的敏感性，無法形成凝膠，始終保持液態(tài)；當濃度為0.3%、0.4%、0.5%時，所制凝膠對pH敏感，調(diào)節(jié)pH 至4.0時為液態(tài)，pH為7.4時為凝膠。同時當卡波姆940P濃度為0.3%時，由于其用量較少，也減少了卡波姆自身的刺激性。因此，確定凝膠處方中卡波姆940P的較優(yōu)濃度為0.3%。

2.1.2HPMC K4M濃度的篩選 （1）量取10 ml純化水，加入0.03 g卡波姆940P，均勻灑在液面上。再精密稱取適量HPMC K4M，均勻灑在液面上，溶脹過夜，攪拌混合均勻。記錄初始pH，用三乙醇胺調(diào)節(jié)pH，記錄溶液無流動性時凝膠的pH及凝膠性狀，結(jié)果見表2。

表2　不同HPMC K4M濃度的空白凝膠性狀變化Tab 2　Characters change of blank gel with different comcentration of HPMC K4M

由表2可知，HPMC K4M的加入并不會明顯改變?nèi)芤旱某跏紁H。當HPMC K4M濃度達到1.5%時，增黏的效果過強，稍加改變pH，黏性就會變得很大；當HPMC K4M濃度為0.5%、1.0%時均可形成稠厚凝膠，且pH變化較小，均能符合要求。

（2）取5 ml小試管，加入2 ml現(xiàn)配的人工淚液（6.7 g氯化鈉、2.0 g碳酸氫鈉、0.08 g二水合氯化鈣，加至燒杯中，用純化水溶解后移至1 L量瓶中，加純化水定容，37℃下保溫）［7］，分別滴入約200 μl的空白凝膠A（0.3%卡波姆940P+0.5%HPMC K4M）和空白凝膠B（0.3%卡波姆940P+1.0%HPMC K4M），肉眼觀察凝膠的膠凝情況和溶散時間（以溶散時間為膠凝能力的指標）。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，空白凝膠A和空白凝膠B分別滴入人工淚液后，立即膠凝成橢圓狀的膠團，隨后膠團逐漸溶散，分散成溶液，溶散時間分別為3、4 h，表明后者具有更好的膠凝能力。由于眼部特殊的生理結(jié)構(gòu)和局部環(huán)境，為確保達到生理pH（7.2～7.4）時［8］，凝膠能具備較高的黏性及滯留時間，最終選擇HPMC K4M的濃度為1.0%。

2.2雙載藥眼用凝膠的制備與處方優(yōu)化

2.2.1雙載藥眼用凝膠的制備按“2.1”項下篩選的處方制備0.3%卡波姆940P和1.0%HPMC K4M溶液，先加入鹽酸左氧氟沙星，待其攪拌溶解后（溶液由透明變?yōu)辄S色），再加入醋酸曲安奈德，最后用三乙醇胺調(diào)節(jié)pH為4.8，即得雙載藥眼用凝膠。

2.2.2雙載藥眼用凝膠溶散時間的測定按“2.1.2”項下方法檢測雙載藥眼用凝膠滴入人工淚液后的溶散時間。結(jié)果雙載藥眼用凝膠溶液滴入人工淚液后立即形成凝膠，溶散時間為2 h，速度快于空白凝膠的溶散時間4 h，表明藥物對凝膠的pH和黏度有相當大的影響，需要對雙載藥眼用凝膠的處方作進一步優(yōu)化。

2.2.3處方優(yōu)化按“2.2.1”項下方法制備雙載藥眼用凝膠，照“2.1”項下優(yōu)化方法對卡波姆940P的濃度（0.3%、0.4%、0.5%）和HPMC K4M的濃度（1.0%、1.2%、1.4%）進行優(yōu)化。結(jié)果卡波姆940P濃度為0.4%時制備得到的雙載藥眼用凝膠具有較好的黏性和流動性，HPMC K4M濃度為1.2%時制備得到的雙載藥眼用凝膠具有較好的黏性和流動性，且在人工淚液中24 h內(nèi)未溶散，滿足本項目的設計要求。

2.2.4凝膠黏度的測定按“2.2.3”項下優(yōu)化的處方平行制備雙載藥眼用凝膠3批，加入至旋轉(zhuǎn)黏度計的轉(zhuǎn)筒內(nèi)，液面以剛好沒過懸吊式轉(zhuǎn)子的上部為準，水浴控溫至25℃，4號阻流棒以12 r/min的速度旋轉(zhuǎn)，記錄黏度。結(jié)果3批雙載藥眼用凝膠的黏度分別為1 142、1 146、1 140 Pa·s，滿足本研究的設計要求。

2.3含量測定[9]

2.3.1溶液的制備取鹽酸左氧氟沙星對照品適量，精密稱定，加0.1 mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋成0.12 mg/ml的溶液。取醋酸曲安奈德對照品適量，精密稱定，加甲醇溶解并定量稀釋成0.60 mg/ml的溶液；精密量取10 ml，置于50 ml量瓶中，用甲醇-水（60∶40）稀釋至刻度，搖勻。分別取醋酸曲安奈德對照品與鹽酸左氧氟沙星對照品適量，精密稱定，置于同一量瓶中，加入甲醇-0.1 mol/L鹽酸（40∶60）溶解并稀釋至刻度，即得每1 ml含0.12 mg醋酸曲安奈德與0.12 mg鹽酸左氧氟沙星的混合對照品溶液。

2.3.2色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗采用高效液相色譜法測定藥物濃度。色譜柱：Dikma Diamonsil?C18（150 mm×4.6 mm，5 μm），流動相：A相為三氟乙酸-乙腈-水（0.1∶10∶90，V/V/V），B相為乙腈-水（80∶20，V/V），梯度洗脫（0 min時85%A相，10～15 min時30%A相，15～30 min時85%A相），流速：1.0 ml/ min，柱溫：25℃，檢測波長：226 nm，進樣量：20 μl。在此色譜條件下，鹽酸左氧氟沙星的出峰時間約為5 min，醋酸曲安奈德的出峰時間約為17 min，二者的峰形良好，且分離度大于1.5，表明此檢測條件可同時測定鹽酸左氧氟沙星和醋酸曲安奈德含量。色譜圖見圖1。

2.3.3方法學考察按方法學考察相關(guān)方法進行試驗。以質(zhì)量濃度（c）為橫坐標、峰面積（A）為縱坐標進行線性回歸分析，結(jié)果左氧氟沙星的回歸方程為A=31 112c-3 873.7（r= 0.999 9），線性范圍為50～800 μg/ml；日內(nèi)RSD為1.66%～2.54%（n=5），日間RSD為1.39%～1.82%（n=5）；回收率為98.46%～101.15%（RSD為0.84%～1.41%，n=5）。曲安奈德的回歸方程為A=15 275c-4 320.5（r=0.999 9），線性范圍為30～600 μg/ml；日內(nèi)RSD為1.82%～2.36%（n=5），日間RSD 為1.39%～1.85%（n=5）；回收率為98.46%～101.78%（RSD 為0.89%～1.64%，n=5）。

2.3.4主藥含量的測定取雙載藥眼用凝膠適量（約相當于鹽酸左氧氟沙星30 mg、醋酸曲安奈德6 mg），精密稱定，置于50 ml量瓶中，加入適量甲醇-0.1 mol/L鹽酸（40∶60），超聲20 min使藥物溶解，用同一溶劑稀釋至刻度，搖勻，過濾（0.22 μm），取續(xù)濾液按“2.3.2”項下色譜條件進樣測定。另取醋酸曲安奈德與鹽酸左氧氟沙星的混合對照品溶液，同法測定。按外標法以峰面積計算凝膠中的藥物含量。結(jié)果雙載藥眼用凝膠中鹽酸左氧氟沙星的平均含量占標示量的97.3%，RSD為0.84%（n=3）；醋酸曲安奈德的平均含量占標示量的92.97%，RSD為1.32%（n=3）。

圖1　高效液相色譜圖Fig 1　HPLC chromatograms

3　討論

卡波姆又名聚羧乙烯，是一種高分子丙烯酸交聯(lián)聚合物，擁有良好的生物黏附性以及流變學的相關(guān)性質(zhì)，用于眼部給藥可延長藥物的作用時間，增加藥物的吸收利用度。根據(jù)聚合度的不同，卡波姆可分為多種規(guī)格，其中以934、940、941等應用最為廣泛［10］。由于卡波姆分子中含有大量的羧基，導致酸性比較強［11］，不容易被淚液迅速中和從而會對眼部組織產(chǎn)生刺激，單獨使用效果并不理想。降低卡波姆的用量，加入其他對溫度或者離子敏感的高分子聚合物，例如HPMC、甲基纖維素（MC）、泊洛沙姆，升高pH也會發(fā)生膠凝［8，12］。因此，為了降低凝膠基質(zhì)的酸性，減少卡波姆的用量，筆者選擇HPMC K4M作為增黏劑用于制備pH敏感型原位凝膠。

目前市售的妥布霉素或左氧氟沙星滴眼液，滴入眼部被眼淚稀釋流出、作用時間短，每4～6小時滴1次，藥物的有效濃度持續(xù)時間較短，無法保證對眼部局部細菌的殺菌及抑菌的效果［13］。本制劑采用卡波姆940P為凝膠基質(zhì)、HPMC K4M為增黏劑，通過考察雙載藥眼用凝膠在人工淚液中的溶散時間，最終確定卡波姆940P的濃度為0.4%、HPMC K4M的濃度為1.2%。采用此法制備的左氧氟沙星和曲安奈德雙載藥眼用凝膠注入式淚道凝膠，工藝簡單易行。本研究的左氧氟沙星［4］和曲安奈德［14］雙載藥眼用凝膠為pH敏感性的眼用制劑，由體外試驗結(jié)果推測，該眼用凝膠在體外為液體，當?shù)稳胙鄄繒r，眼睛pH的敏感性較強，在一定pH以上，凝膠能夠由液態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)榘牍虘B(tài)。采用液態(tài)形式給藥方便，使制劑易于覆蓋眼部作用部位；轉(zhuǎn)變?yōu)榘牍虘B(tài)后，在眼球表面形成保護薄膜，抗菌藥物能很好地發(fā)揮療效；也不影響日常工作，與傳統(tǒng)的凝膠相比，抗菌藥物可更好地發(fā)揮療效，可專門用于眼科Ⅰ、Ⅱ類手術(shù)局部感染的預防及治療［15］。本研究為下一步研究眼科手術(shù)后抗菌、抗炎藥物的研發(fā)奠定了基礎。

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（編輯：鄒麗娟）

Preparation of Levofloxacin and Triamcinolone Acetonide Double-loaded Ophthalmic Gel

FAN Lianlian1，YANG Qingqing2，XU Hanlin2，ZHANG Peiwen1，SU Wencheng1，HUANG Ya1，CHEN Hong1
（1. Deyang Municipal People's Hospital，Sichuan Deyang 618000，China；2.West China School of Pharmacy，Sichuan University，Chengdu 610041，China）

OBJECTIVE：To prepare Levofloxacin and triamcinolone acetonide double-loaded ophthalmic gel.METHODS：Using levofloxacin hydrochloride and triamcinolone acetonide as main components，carbopol-940P as base material，HPMC K4M as tackifier，Levofloxacin and triamcinolone acetonide double-loaded ophthalmic gel was prepared.Using dissolution time as index，the contents of carbopol-940P and HPMC K4M were determined by single factor test，and dissolution time，viscosity and the contents of 2 main components were also determined.RESULTS：The concentrations of carbopol-940P and HPMC K4M were 0.4% and 1.2%，separately.The dissolution time was more than 24 h and viscosity was 1 142.67 Pa·s.The content of levofloxacin hydrochloride was 97.3%of labelled amount（RSD=0.84%，n=3），and that of triamcinolone acetonide was 92.97%of labelled amount（RSD=1.32%，n=3）.CONCLUSIONS：Levofloxacin and triamcinolone acetonide double-loaded ophthalmic gel has been prepared successfully.

Levofloxacin；Triamcinolone acetonide；Ophthalmic gel

R943

A

1001-0408（2016）22-3125-03

10.6039/j.issn.1001-0408.2016.22.30

四川大學德陽校市科技合作專項資金計劃項目（No. HZYF-201406）

＊主管藥師。研究方向：臨床藥學、藥理學。電話：0838-2418451。E-mail：lianhuafll@163.com

2016-01-17

2016-03-25）