一例綿羊肺腺瘤病毒感染的診斷

才格加（青海省貴南縣過馬營鎮獸醫站青海海南州813101）

一例綿羊肺腺瘤病毒感染的診斷

才格加
（青海省貴南縣過馬營鎮獸醫站青海海南州813101）

綿羊肺腺瘤病（Ovine pulmonary adenomatosis，OPA）是由綿羊肺腺瘤病毒（Jaagsiekte sheep retrovirus，JSRV）引起羊的一種慢性、接觸傳染性、肺臟腫瘤性疾病［1］。本病的潛伏期較長，以肺部發生腫瘤為特征，病羊表現消瘦，咳嗽，呼吸困難，肺部發生腫瘤，最終衰竭而死亡［2］。綿羊感染JSRV多散發，不同品種，年齡和性別的綿羊均發病，飼養密度大，通風不良等有利于疾病傳播。寒冷季節，疾病加重。本病呈世界范圍內流行，被世界動物衛生組織確定為B類疫病，在我國被農業部獸醫局列為三類動物傳染病，國內多呈散發性、地方性流行，近年來我國養羊密度集中地區均有該病發生和流行的報道［3-5］，嚴重威脅著我國養羊業的健康發展。本文對某規模羊場發生的一起綿羊肺腺瘤病毒感染病例進行診斷，通過對病羊臨床表現，剖檢和實驗室PCR診斷，確定該羊場發生綿羊肺腺瘤病毒感染。養殖單位通過采取對臨床發病羊全部隔離、淘汰，飼養用具及環境全面消毒，疫情得到有效控制。現將疾病的診斷過程介紹如下：

1　發病情況

2015年5月開始，該羊場1周歲左右小羊開始陸續發病，發病率達10%左右，病程較長，經咳嗽、氣喘、瘦弱、衰竭至死。羊場曾用青霉素、四環素類等多種藥物進行治療，均無顯著效果。同時調查發現該羊場所貯備飼草有霉變現象。

2　臨床特征

發病綿羊呼吸困難、鼻液粘稠、鼻孔流產卡他性分泌物、間斷啰咳嗽、支氣管“”音、病程長，低頭時由鼻孔流出大量液體、體型消瘦、貧血、食欲降低，最后極度消瘦死亡。

3　病理變化

剖檢可見病變主要表現于肺臟，整個肺臟的外觀顯著腫大、水腫，其體積可達正常肺臟的3倍以上，肺表面具有大量灰白色小結節、外觀圓形、質地堅實、小結節發生融合，形成大結節。通過臨床癥狀及病理剖檢觀察，高度懷疑為腫瘤病，送實驗室進行綿羊肺腺瘤病PCR檢測。

4　PCR檢測

取病死羊肺臟病變組織加入滅菌生理鹽水后勻漿，-20℃反復凍融3次，10 000 r/min離心5min，吸取上清液按病毒基因組DNA試劑盒（購自北京百泰克生物技術有限公司）說明書提取病死羊組織病料的基因組DNA。根據參考文獻［6］中的方法合成綿羊肺腺瘤病1對檢測引物（上游引物序列：5'-CTGGGAGCTCTTTGGCAAAAGCCAAAGCC-3'，下游引物序列：5'-CCTGCCGCGACCAGCACAAACAAGAG-3'）。以提取的DNA為模板，參照參考文獻［6］中的PCR反應體系和PCR擴增程序進行PCR擴增，PCR擴增產物經1.5%瓊脂糖凝膠電泳觀察可見在位于約367 bp處具有特異性擴增條帶（見圖1），其片段大小與羅軍榮等［6］的報道完全一致。

圖1　PCR擴增結果M:DL 2000Marker；1:病料PCR擴增產物；2:水對照

5　基因序列鑒定結果

將PCR擴增產物利用膠回收試劑盒回收純化后，送生工生物工程（上海）股份有限公司測序，將測序結果與GenBank中登錄的序列比對分析顯示，PCR擴增產物的基因序列與登錄號為AF105220的綿羊肺腺瘤病毒基因組序列同源性最高，為99.46 %。表明所擴增序列為綿羊肺腺瘤病毒特異性序列。

6　綜合診斷結果

結合臨床發病情況、臨床特征、病理變化等臨床診斷結果以及PCR檢測、序列鑒定等實驗室診斷結果綜合判定此次病例由綿羊肺腺瘤感染所致。

7　小結與討論

綿羊肺腺瘤病的分布廣泛，在世界范圍內都有發病報道，本病有傳染性，死亡率很高，給養羊業帶來嚴重經濟損失，引起獸醫界越來越廣泛的關注。本病主要感染綿羊，山羊有一定抵抗力，感染疾病后最主要特征是在肺部形成腫瘤。綿羊肺腺瘤病毒感染后潛伏期很長，如果發生細菌病混合感染可加快疾病發生和死亡。對于綿羊肺腺瘤病的診斷方法，由于綿羊肺腺瘤病毒在體外培養沒有適宜的細胞系，因此本病不能通過病毒分離的方法診斷。綿羊肺腺瘤病毒感染后在綿羊體內不產生抗體，因此本病不能通過血清學方法檢測。故本病的診斷主要通過分子生物學方法進行確診，分子生物學檢測方法中PCR方法是目前實驗室疾病檢測最簡單、最有效的主要方法，發生自然感染的病例，潛伏期較長，PCR方法可以用于疾病的早期診斷。目前，綿羊肺腺瘤病毒感染的診斷主要通過臨床癥狀、病理剖檢和實驗室PCR檢測。故本病例綜合采用臨床發病情況、臨床特征、病理變化觀察以及PCR檢測、序列鑒定方法對此次病例進行綜合診斷，診斷結果應具有十分高的準確性和可靠性。（編輯：段勇）

［1］朱福余，于立新，么宏強，等.綿羊肺腺瘤病毒檢測方法的研究進展［J］.中國畜牧獸醫，2014，41（4）:236-241.

［2］楊素芳，梁田，趙慶亮，等.新疆綿羊肺腺瘤病理學診斷與全基因組序列分析［J］.病毒學報，2015，31（3）:217-225.

［3］王林，韋海濤，李志軍，等.北京地區綿羊肺腺瘤病的病理學及PCR診斷［J］.中國獸醫雜志，2014，50（5）:22-24.

［4］楊素芳，司俊強，鄭啟偉，等.新疆部分地區綿羊肺腺瘤病流行病學調查［J］.石河子大學學報（自然科學版），2015，33（5）:46-51.

［5］劉暢，李磊，于立新，等.綿羊肺腺瘤病毒內蒙古分離株前病毒全基因組克隆及序列分析［J］.病毒學報，2014，30（5）:508-513.

［6］羅軍榮，劉霄卉，余群英，等.綿羊肺腺瘤病特異性PCR及套式PCR診斷方法的建立［J］.病毒學報，2009，25（2）: 125-130.

10.3969/j.issn.1008-4754.2016.8.027

才格加（1971-），男，藏族，青海人，專科，畜牧師，研究方向：動物疫病防治與檢疫。