HPLC法測定丹酚酸B中己內酰胺殘留

陳鴻楠　鄧　穎　郭秀娟　華國棟（北京中醫藥大學東方醫院藥學部　北京　100078）

HPLC法測定丹酚酸B中己內酰胺殘留

陳鴻楠鄧穎郭秀娟華國棟*（北京中醫藥大學東方醫院藥學部北京100078）

目的：建立丹酚酸B原料藥中己內酰胺殘留的測定方法。方法：采用高效液相色譜法測定。實驗儀器為：安捷倫1200型高效液相色譜儀，Agilent Zorbax SB-C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）。色譜條件：乙腈∶水=11∶89（v/v），等度洗脫；檢測波長210nm；流速1.0mL·min-1；柱溫25℃；進樣體積10μL。結果：己內酰胺同其他物質可以達到基線分離。測得己內酰胺在0.00123～0.0502g·L-1線性關系良好。己內酰胺平均回收率為100.28%，RSD為1.63%（n=9）。結論：該法操作簡便，重現性好，結果準確可靠，可以用于丹酚酸B原料藥中殘留己內酰胺的測定。為丹酚酸B質量控制提供了可靠的數據。

丹酚酸B原料藥 己內酰胺殘留 高效液相色譜法

丹酚酸B是唇形科植物丹參中的主要成分，具有對心肌缺血-再灌注損傷的保護、對心臟微血管內皮細胞的延遲保護、對動脈粥樣硬化及血栓防治功效、對腦缺血損傷的保護和抗衰老、抗腫瘤等多種藥理活性［1～2］。在制備丹酚酸B過程中主要使用了柱層析的方法，使用了聚酰胺填料進行純化。聚酰胺在聚合時仍有大量單體未參與反應，因此在柱層析過程中會有大量己內酰胺單體被洗脫進而進入產品，原料藥中可能有己內酰胺殘留。己內酰胺對人身體有不良作用［3］，因此在使用時需要控制己內酰胺殘留量。本文參考有關文獻［4］建立了高效液相色譜法對3批丹酚酸B存在的己內酰胺殘留進行測定，現報道如下。

1　儀器與試藥

1200型高效液相色譜儀，配有DAD檢測器、四元泵、自動進樣器，美國安捷倫公司；Zorbax SB-C18色譜柱（250mm× 4.6mm，5μm），美國安捷倫公司；Metter Toledo xS5分析天平。丹酚酸B（原料藥，純度大于98%，批號20130819、20131025、20131216，由北京康悅藥業有限公司提供）；乙腈、甲醇均為色譜純，純化水使用Milli-Q（美國Millipore公司）制備；己內酰胺為分析純，純度為99%，購自國藥集團化學試劑有限公司。

2　方法與結果

2.1色譜條件：乙腈∶水=11∶89（v/v），等度洗脫；檢測波長210nm；流速1.0mL·min-1；柱溫25℃；進樣體積10μL。

2.2對照溶液的配制

對照品儲備液的配制：精密稱定5.02mg己內酰胺，用甲醇溶解并定容至10mL，得己內酰胺對照品儲備液。

對照品工作液的配制：精密移取1mL儲備液定容至10mL即得含有己內酰胺50.2μg·mL-1的對照品工作溶液。

2.3供試品溶液的配制：精密稱定50.08mg丹酚酸B，用甲醇溶解并定容至10mL即得含有丹酚酸B 5.01g·L-1的溶液。

2.4系統適用性試驗：將“2.2”中對照品工作溶液和“2.3”中供試品溶液按“2.1”中色譜條件進行測定，記錄色譜圖，己內酰胺的分離度大于1.5，理論塔板數均大于2000。對照品和供試品色譜圖見圖1。

2.5線性：分別取“2.2”中儲備溶液1、0.5、0.25、0.1、0.05、0.025mL，分別用甲醇溶解并定容至10mL容量瓶中，按“2.1”中色譜條件進行測定。以己內酰胺的峰面積為縱坐標（Y），濃度為橫坐標（x），進行線性回歸。得到己內酰胺在1.23～50.2μg·mL-1的線性方程為：Y=10.3630x-0.1967（R2=0.9999）。

結果表明，在1.23～50.2μg·mL-1己內酰胺峰面積與濃度均呈良好的線性關系。

2.6回收率：精密稱取批號為20130819的供試品50mg置于10mL容量瓶中，再從“2.2”中對照品儲備液中分別精密量取0.8、1.0、1.2mL至容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，得低中高三個濃度的加樣回收測定溶液，按“2.1”中色譜條件每個濃度平行測定3次，測得己內酰胺回收率為100.28%，RSD為1.63% （n=9）。

2.7精密度：取“2.2”中對照品工作溶液，按“2.1”中色譜條件重復進樣測定6次，記錄色譜圖，得到己內酰胺峰面積RSD為0.29%。

2.8重復性：精密稱取批號為20130819的供試品50mg，按“2.3”中方法進行處理，共處理6份。分別按“2.1”中色譜條件進行測定，記錄色譜圖，使用“2.2”中工作溶液作為外標定量。測得己內酰胺的平均含量為0.11%，RSD為2.70%（n=6）。

2.9檢測限和定量限：精密吸取“2.5”中含有己內酰胺1.23μg· mL-1的溶液用甲醇逐級稀釋制成測定溶液。分別取各個溶液1mL，按“2.1”中條件檢測。

當信噪比為10∶1時樣品濃度為定量限，此時己內酰胺濃度為0.41μg·mL-1。當信噪比為3∶1時樣品濃度為檢測限，此時己內酰胺濃度為0.14μg·mL-1。

2.10樣品測定：取3批樣品各50mg，精密稱定，按“2.3”中供試品溶液制備項下方法進行處理，在“2.1”中色譜條件下進行測定，按照外標法計算各溶劑的含量，得批號為20130819、20131025、20131216 3批樣品中己內酰胺的含量分別為0.11%、0.08%、0.12%（n=3）。

3　討　論

3.1液相色譜條件的選擇和優化：經過篩選發現，丹酚酸B和己內酰胺在甲醇中均具有良好的溶解性，且丹酚酸B在甲醇中溶解速度較快，因此選擇甲醇作為溶劑。

前期分別考察了檢測波長分別為203nm、210nm、254nm下測定結果。發現在波長為210nm下己內酰胺具有最大吸收波長，信噪比最高，檢測效果最好。而在203nm下己內酰胺信噪比較低，在254nm己內酰胺吸收太弱，均不利于測定。因此選擇254nm作為檢測波長。

本品僅需要檢測己內酰胺殘留，己內酰胺同丹酚酸B極性差異較大，故選用等度洗脫法。經過條件和文獻查閱摸索，確定洗脫條件為乙腈∶水=11∶89（v/v）。

［1］杜冠華，張均田.丹參現代研究概況與進展（續一）［J］.醫藥導報，2004，23（6）：0355-0361.

［2］李認書，李永強.丹酚酸的研究進展［J］.時珍國醫國藥，2003，14 （6）：371-373.

［3］劉君動，葉正良，李德坤，等.丹參多酚酸中己內酰胺和低聚物的殘留測定［J］.中國實驗方劑學雜志，2012，18（5）：62-65.

［4］張琳，王民生.低濃度己內酰胺對作業工人健康影響的調查［J］.化工勞動保護（工業衛生與職業病分冊），1998，19（3）：98-101.

Determination of Residual Caprolactam in Salvianolic Acid B Bulk Drug by HPLC

Chen Hongnan Deng Ying Guo xiujuan Hua Guodong*（Dept.of Pharmacy，Dongfang Hospital of Beijing University of TCM，Beijing 100078，China）

Objective：To establish a method to determine residual caprolactam in Salvianolic acid B bulk drug.Methods：The HPLC was performed on a Agilent 1200 chromatographic instrument with Zorbax SB-C18column.The chromatographic condition was described as below：the mobile phase was acetonitrile-water=11∶89（v/v）at 1.0mL·min-1，the data was recorded at 210nm，the column was maintained at 25℃，the inject volume was 10μL.Result：Caprolactam can be separated completely with good linear relationship between 0.00123～0.0502g·L-1.The average recovery of caprolactam was 100.28%with RSD=1.63% （n=9）.Conclusion：This method is simple，reproducible and accurate enough for determination of residual caprolactam in salvianolic acid B bulk drug.

Salvianolic acid B bulk drug Residual caprolactam HPLC

R284.1

A

1672-8351（2016）02-0018-02