坎地沙坦酯氨氯地平片有關物質研究

張鵬威蘇文琴曾沖張麗（.海南醫學院藥學院，海南　海口 5799；.海口南陸醫藥科技有限公司，海南　海口　5700）

坎地沙坦酯氨氯地平片有關物質研究

張鵬威1蘇文琴1曾沖2張麗1
（1.海南醫學院藥學院，海南海口 571199；2.海口南陸醫藥科技有限公司，海南海口571100）

目的建立測定坎地沙坦酯氨氯地平片有關物質的測定方法。方法：采用Agilent C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱，以磷酸-三乙胺緩沖液（pH值5.0）為流動相A，乙腈為流動相B，梯度洗脫，檢測波長254 nm，流速1.0 mL·min-1。結果：已知雜質和降解的未知雜質與主藥分離良好，4批樣品檢測結果表明，總雜質均＜1.0%，單雜均符合質量標準。結論：所訂方法專屬性強，靈敏度高，重現性好，可以用于檢測本產品有關物質。

高效液相色譜法；坎地沙坦酯氨氯地平片；有關物質；降解產物

坎地沙坦酯是由日本武田公司開發，1998年首先在瑞典上市。它是二苯四咪唑類血管緊張素Ⅱ型受體（AT1）拮抗劑。苯磺酸氨氯地平是由美國輝瑞公司研制開發，1992年首次上市，為長效二氫吡啶類鈣離子拮抗劑。坎地沙坦酯和苯磺酸氨氯地平兩者均呈良好的抗高血壓效果，而兩者聯合用藥因不同作用機制，作用于不同位點，合用具有良好的協同效應，顯示比兩藥單用可產生更好的降血壓作用，并不增加不良反應發生率。對單藥不易控制的高血壓病患者，選擇聯合用藥能提高患者的血壓控制達標率，并有良好的安全性、依從性［1］。因此，日本武田公司開發了坎地沙坦酯氨氯地平片，并于2010年在日本首次上市。

對于坎地沙坦酯氨氯地平片有關物質目前已經有少量報道［2-3］，但依據最新的注冊標準，其研究均無法達到藥品注冊要求。因此本文參照坎地沙坦酯和苯磺酸氨氯地平在JP16、BP2013、USP35、EP7.8中相關標準，對本復方制劑的有關物質進行了研究并建立了測定方法［4-6］。

1　儀器與材料

安捷倫高效液相色譜儀（LC-2010）。

表1　分離度試驗結果

坎地沙坦酯（中國食品藥品檢定研究院，批號：100685-200401，含量：100.0%）；苯磺酸氨氯地平（中國藥品生物制品檢定所，批號：100374-200903，含量：99.9%）；坎地沙坦酯氨氯地平片（由海口南陸醫藥科技有限公司提供）；坎地沙坦酯雜質A，B，C，D，E，F均來自加拿大TorontoResearch Chemicals Inc；氨氯地平雜質來自加拿大Molcan Corporation；甲醇、乙腈（TEDIA，色譜純）；超純水（實驗室自制）。

圖1　已知雜質分離圖譜

2　試驗方法與結果

2.1溶液的制備

取本品細粉適量，精密稱定，加入乙腈-水（3：2）適量，超聲溶解5分鐘，并定量稀釋制成每1ml中含坎地沙坦酯1.5mg的溶液，濾過，取續濾液作為供試品溶液；精密量取1 ml至100 ml量瓶中，加乙腈-水（3：2）稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。分別取坎地沙坦酯、坎地沙坦酯雜質A、坎地沙坦酯雜質B、坎地沙坦酯雜質C、坎地沙坦酯雜質D、坎地沙坦酯雜質E、坎地沙坦酯雜質F、坎地沙坦酯雜質G、坎地沙坦酯雜質I、苯磺酸氨氯地平、氨氯地平雜質A、氨氯地平雜質B、氨氯地平雜質D、氨氯地平雜質E、氨氯地平雜質F、氨氯地平雜質G、氨氯地平雜質H加乙腈-水（3：2）溶解并定量稀釋制成坎地沙坦酯和坎地沙坦酯雜質約含450ug/mL及氨氯地平和氨氯地平雜質約含140 ug/ml溶液，搖勻，作為各雜質對照品儲備液。再分別取以上各對照品儲備液適量，分別配置成約含坎地沙坦酯和坎地沙坦酯雜質18ug/ml及氨氯地平和氨氯地平雜質約含5.6ug/ml的溶液，作為各組分定性溶液及其混合溶液。

2.2色譜條件

表2　檢測限定量限試驗結果

色譜柱：Agilent C18（4.6 mm×250mm，5μm），流動相：以磷酸-三乙胺緩沖液（取三乙胺4 ml，加水1000 ml溶解，用磷酸調節pH值至5.0）為流動相A，以乙腈為流動相B，線性梯度洗脫程序為：0 min（65%A）→15 min（65%A）→45 min（20%A）→68 min （20%A）→72 min（65%A）→90 min（65%A），流速：1.0 mL·min-1，柱溫35℃，檢測波長：254nm，進樣體積：20 μL。

2.3波長選擇

在EP7.3、USP36、BP2012及JP16中坎地沙坦酯的有關物質檢測波長為254，而在JP16中，苯磺酸氨氯地平的有關物質檢測波長為237。通過主藥及其已知雜質對照品的紫外光譜掃描試驗，坎地沙坦酯及其已知雜質在254nm波長處有較大吸收，氨氯地平及其降解雜質峰在254nm波長處有較大吸收，且峰型良好；而在237nm處，坎地沙坦酯峰型對稱性欠佳，故將本品有關物質檢查檢測波長確定為254nm。

2.4專屬性試驗

2.4.1已知雜質分離度

分別取各組分定性溶液和混合雜質溶液20 μl，注入HPLC測定。從試驗色譜圖可知主峰與各雜質分離均符合要求，結果見表1及圖1。

（1）有關物質檢測限與定量限

精密量取各組分定性溶液，逐步對倍稀釋，分別精密量取上述溶液份20 μl注入HPLC測定，直至樣品色譜峰低至噪音水平。結果見表2。

（2）線性關系試驗

取雜質對照品儲備液適量，加乙腈-水（3：2）稀釋制成一定濃度的溶液。分別精密量取上述溶液20 μl注入HPLC測定。以樣品色譜峰面積A與濃度c進行線性回歸。試驗結果見表3。

（3）破壞試驗

表3　線性試驗結果

取坎地沙坦酯氨氯地平片粉末（約含坎地沙坦酯30mg），置20ml量瓶中，分別加1 mol/L鹽酸溶液1 ml、1 mol/L氫氧化鈉溶液1 ml、3%的過氧化氫溶液1 ml、強光照射、沸水浴加熱破壞，中和后，加乙腈-水（3：2）稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為破壞溶液。對坎地沙坦酯原料藥、苯磺酸氨氯地平原料藥、坎地沙坦酯和苯磺酸氨氯地平混合原料以及混合空白輔料進行同法破壞。

試驗結果表明，本品在強光破壞試驗條件下無明顯變化，在氧化破壞、高溫破壞、強酸破壞、強堿破壞條件下有關物質均有所增加。在上述破壞試驗中，兩個主峰純度在各破壞條件下，純度因子均達到995以上，其主峰與降解產物的色譜峰均能分離，分離度均符合要求。結果見表4。

表4　破壞性試驗結果

（4）精密度試驗

取本品供試品溶液及其對照溶液，連續進樣9次。已知雜質峰面積、單個雜質峰面積及總雜質峰面積RSD值均小于2.0%，表明儀器進樣精密度良好。

表5　回收率試驗（n=9）

（5）溶液穩定性

取同一混合雜質溶液、供試品溶液，室溫放置，分別于0、80、160、240、320、400、480、560、640、720 min注入HPLC測定。結果表明各雜質峰在12 h內穩定，RSD＜2%，表明溶液室溫放置12 h穩定。

（6）回收率試驗

分別取雜質對照品溶液儲備液及片粉適量（約相當于30mg坎地沙坦酯），按2.1供試品溶液的制備方法處理，注入HPLC測定。結果見表5。

結果表明雜質回收率均小于10%，符合注冊要求。

（7）有關物質測定方法與結果

取本品的細粉適量，按2.1供試品溶液的制備方法處理，注入HPLC測定。供試品溶液色譜圖中如有雜質峰，以對照溶液的主峰面積計算單個最大雜質和各雜質總和。坎地沙坦酯雜質B雜質應不得大于0.8%，坎地沙坦酯雜質F雜質應不得大于0.5%，氨氯地平雜質D雜質應不得大于0.8%，其他單個雜質應不得大于0.5%，雜質總量應不得大于3.0%。分別測定4批樣品，結果見表6。

表6　有關物質測定結果

3　討論

坎地沙坦酯氨氯地平片屬于復方制劑，包含坎地沙坦酯和苯磺酸氨氯地平兩種成分，在BP2013、USP35、EP7.8等中均未收載，僅在JP16收載坎地沙坦酯氨氯地平片標準。但按當前藥品注冊標準，JP16標準不足以完成藥品注冊。我們開發了HPLC，該法分析時間適中，各已知雜質和破壞降解雜質與主成分之間分離度均符合要求。

根據參比制劑原質量標準僅測定3個已知雜質和總雜。因此本文參照JP16、BP2013、USP35、EP7.8中坎地沙坦酯和苯磺酸氨氯地平的有關物質測定方法和雜質類別，同時對多達15個已知雜質進行了研究，并根據穩定性試驗數據最終確定測定3個特性雜質和總雜質。結果表明該法專屬性強、靈敏度高，可以作為本品有關物質測定方法，確保產品質量。

［1］2003 World Health Organization（WHO）/International Society of Hypertension（ISH）statement on management of hypertension.http：//www.who.int/cardiovascular_diseases/guidelines/hypertension_guidelines.pdf？ua=1［EB/OL］2015-6-8.

［2］陳寧，毛柯，周衛，等.HPLC測定坎地沙坦酯氨氯地平片有關物質及降解產物.中國現代應用藥學.2014，31（4）：465-468.

［3］靳茂禮，姚振江，申磊，等.坎地沙坦酯氨氯地平片中降解產物的研究.中國藥業.2014，23（3）：29-30.

［4］Japanese Pharmacopoeia［S］.2014：2660-2664.

［5］EUROPEAN PHARMACOPOEIA 8.0［S］.2013：1754-1756.

［6］U.S.Pharmacopeia/National Formulary［S］.2012：20185-2188，2468-2469.