XN-3000全自動血液分析儀檢測網織紅細胞的性能評價

周愛國　蘇 勇　陸奎英*

XN-3000全自動血液分析儀檢測網織紅細胞的性能評價

周愛國①蘇 勇①陸奎英①*

目的：評價Sysmex XN-3000全自動血液分析儀檢測全血中網織紅細胞（Ret）的性能。方法：隨機收集臨床檢測網織紅細胞的血標本96份，分別使用XN-3000全自動血液分析儀和人工顯微鏡法進行檢測，通過對兩種方法所測得的結果進行相關性分析，評價XN-3000全自動血液分析儀檢測血樣本中Ret的精密度、穩定性、線性范圍及攜帶污染率等，并與人工顯微鏡法做相關性分析。結果：XN-3000測定Ret的精密度、線性范圍及敏感性均在允許的范圍內，穩定性在4 ℃下48 h內Ret分析無顯著變化，變異系數（CV）＜1%，攜帶污染率為0.14%；XN-3000測定Ret的結果與人工顯微鏡法相關性良好（r=0.979）。結論：XN-3000測定Ret準確度高，重復性好，線性范圍能滿足臨床需求，攜帶污染率極低，且檢測快速簡便，與人工顯微鏡法相關性好，結果可靠，尤其適用于臨床大批量標本的檢測，是臨床測定Ret的理想分析裝置。

網織紅細胞；XN-3000全自動血液分析儀；檢測；性能評價

［First-author's address］ Department of Clinical Laboratory， Yangzhou First People’s Hospital， Yangzhou 225001，China.

網織紅細胞（Reticulocyte，Ret）是紅細胞的未成熟階段，是反映骨髓紅系造血功能以及判斷貧血和相關疾病療效的重要指標，其胞漿內含有少量核糖核酸（RNA），經煌焦油藍或新亞甲藍活體染色后呈淺藍或深藍色的網狀結構［1］。傳統的顯微鏡人工鏡檢法操作簡便，試劑成本低廉，目前仍然被廣泛應用于臨床，但其個體差異較大且難以標準化。

近年來，隨著高性能全自動血液分析儀的發展與應用，Ret的檢測進入了嶄新的階段，為Ret計數提供了更為先進的檢測方法和更多的檢測參數。為此，本研究對XN-3000全自動血液分析儀計數Ret的精密度、穩定性、線性范圍以及攜帶污染率等進行評價，并與人工鏡檢法作相關性分析。

①揚州市第一人民醫院檢驗科 江蘇 揚州 225001

1　資料與方法

1.1標本來源

收集揚州市第一人民醫院2016年1-5月住院患者檢測網織紅細胞的血常規標本（乙二胺四乙酸二鉀EDTA-K2抗凝）96份，2 h內檢測完畢。

1.2儀器與試劑

XN-3000全自動血細胞分析儀及原裝配套試劑、配套全血質控品（日本希森美康）；網織紅細胞染色液即煌焦油藍試劑（珠海貝索生物技術公司）；CX31-Olympus雙目顯微鏡（日本）。

表1　批內精密度測定結果±s）

表1　批內精密度測定結果±s）

注： 表中 IRF為未成熟網織紅細胞指數，LFR、MFR及HFR分別為低、中及高熒光強度網織紅細胞百分率。

項目高值CV值（%）中值CV值（%）低值CV值（%）Ret（%）6.28±0.293.921.63±0.145.160.56±0.034.32 Ret#（×109/L）282.2±6.934.7274.7±4.395.0319.9±1.034.06 IRF（%）37.5±2.014.9310.20±1.5910.9515.56±2.1910.21 LFR（%）69.9±3.863.9392.7±1.411.6983.2±2.132.81 MFR（%）17.5±1.033.676.4±1.3911.9212.3±1.8310.22 HFR（%）12.6±1.779.930.9±0.229.944.5±1.5319.60

1.3檢測原理及方法

XN-3000全自動血液分析儀檢測Ret的原理是使用稀釋液（CELLPACK DFL）和染色液（Fluorocell Ret）試劑進行核酸染色處理。經過試劑處理的樣本用流式細胞技術（flow cytometry，FCM）進行檢測。檢測出側向熒光和側向散射光的信息，并據此獲得Ret散射圖（如圖1所示）。

圖1　XN-3000全自動血液分析儀檢測Ret的散點圖

1.3.1精密度

（1）批內精密度：按CLSIEP5-A文件［2］要求，取高、中、低Ret值標本各1份，每份重復檢測10次，計算x-±s及變異系數（variation coefficient，CV）值（%）。

（2）批間精密度：每日對標準全血質控品測定1次，連續檢測20 d，計算x-±s及CV值。

1.3.2穩定性

取1份血標本，置4 ℃冰箱保存，并分別于0 h、l h、2 h、4 h、8 h、24 h、48 h以及72 h取出對其測定3次，取平均值。

1.3.3線性范圍

按CLSIEP6-A文件［3］要求，取1份Ret高值標本用生理鹽水對高值樣本分別用100%、50%、25%、12.5%及6.25%的濃度比例進行稀釋，每個濃度樣本測定3次，取平均值，并與每一稀釋度測得的Ret絕對值與Ret理論值進行比較，以Ret理論值為X軸，實測值為Y軸，求得回歸方程，驗證線性范圍。

1.3.4攜帶污染率

按CLSIEP10-A文件［4］要求，先用高濃度水平的高值標本（H1、H2和H3）連續測定3次，再檢測低濃度水平的低值標本（Ll、L2和L3）連續測定3次，按biouqnton方法［5］計算攜帶污染率，即為公式1：

攜帶污染率=（L1-L3）÷（H3-L3）×100% （1）

1.3.5相關性

將96份血標本分別用XN-3000全自動血細胞分析儀及人工鏡檢方法進行檢測。①儀器法：將采集的標本按儀器的操作規程，使用XN-3000全自動血細胞分析儀的自動進樣模式進行檢測；②人工鏡檢法：參照衛生部“全國臨床檢驗操作規程”，對標本進行煌焦油藍活體染色，用微量吸管取少量EDTA-K2抗凝血（約50 μL）與等量的煌焦油藍試劑于試管內混勻，室溫下放置20 min后，取一滴制成薄片，油鏡下計數1000個紅細胞內的Ret數。

1.4統計學方法

應用SPSS 18.0軟件對數據進行統計學分析，計量資料結果以均值±標準差（x-±s）表示，兩組比較采用t檢驗，采用相關分析，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1精密度

（1）批內精密度：XN-3000全自動血細胞分析儀測定的高、中、低值的批內精密度結果見表1。

（2）批間精密度：用全血質量控制品測定的批間精密度結果見表2。

表2　批間精密度測定結果±s）

表2　批間精密度測定結果±s）

項目測定值CV值（%）Ret（%）1.68±0.031.92 Ret#（×109/L）72.20±2.012.66 IRF（%）27.9±1.412.58 LFR（%）72.2±2.563.03 MFR（%）19.1±1.132.67 HFR（%）8.7±1.072.93

2.2穩定性

在冰箱4℃冷藏儲存條件下，測定0 h、1 h、2 h、4 h、8 h、24 h、48 h以及72 h均值分別為5.23%、5.28%、5.24%、5.19%、5.17%、5.12%、5.10%以及4.65%。Ret在48 h內測定CV值無明顯變化，CV ＜1%，但72 h稍有降低。

2.3線性范圍分析及攜帶污染率

（1）以Ret理論值（Ret絕對值）為X軸，實測值為Y軸，得出回歸方程為Y=0.992X+6.05，結果顯示線性良好。

（2）根據檢測結果計算出XN-3000攜帶污染率為0.14%。

2.4相關性

對96份血液標本用2種方法（儀器法、手工法）計數Ret，兩組數據經統計學分析，相關性良好，其比較結果差異無統計學意義（r=0.979，P＞0.05），見表3。

表3　儀器法和人工法計數Ret的結果比較

3　討論

Ret人工顯微鏡法是傳統的檢測方法，但該方法影響因素頗多，操作費時且誤差較大。本研究結果表明，XN-3000全自動血液分析儀檢測Ret的批內及批間變異系數（CV%）均在規定范圍內，表明儀器性能穩定，精密度高，標本在4 ℃保存48 h內Ret變化較小，72 h后有所降低，與文獻報道一致，表明穩定性良好［6-7］。本研究有著良好的線性，r值為0.998；攜帶污染率為0.14%，表明不同樣本間相互污染極少，幾乎可以忽略不計。XN-3000全自動血液分析儀與人工顯微鏡法計數Ret相比較，r=0.979，P＞0.05，2種方法測定結果差異無統計學意義，表明兩種方法的相關性良好，與文獻報道一致［8-9］。

Ret是未成熟的紅細胞，反映骨髓紅系造血功能以及判斷貧血和相關疾病療效的重要指標［10-14］。Ret人工鏡檢的方法是傳統的檢驗方法，其操作雖不復雜，但費時，特別是當今醫學飛速發展，人工鏡檢已不適合大批量的檢測；鏡檢雖能直觀細胞形態但個體差異較大，易受主觀影響，重復性差，結果準確性也容易受到計數細胞少、血涂片的厚薄、核糖核酸（RNA）染色效果及染色溫度、時間等的影響［15］。XN-3000全自動血液分析儀檢測Ret的原理是使用稀釋液（CELLPACK DFL）和染色液（Fluorocell RET）試劑進行核酸染色處理。經過試劑處理的樣本用流式細胞技術（FCM）進行檢測。檢測出側向熒光和側向散射光的信息，得到Ret絕對值、Ret百分比、高熒光強度Ret比率（high fluorescence ratio，HFR）、中熒光強度Ret比率（moderate fluorescence ratio，MFR）、低熒光強度Ret比率（low fluorescence ratio，LFR）以及未成熟網織紅細胞指數（immature reticulocyte fraction，IRF）等參數供臨床參考［16］。

4　結語

XN-3000全自動血液分析儀測定Ret與人工鏡檢染色法相比，具有快速簡便、重復性好及攜帶污染率低等優點，特別適合臨床大批量Ret標本的檢測。此外，XN-3000全自動血液分析儀還可提供多個Ret新參數供臨床參考，是臨床測定Ret的理想分析裝置。

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The performance evaluation of reticulocytes detected by XN-3000 automatic blood analyzer/

ZHOU Ai-guo， SU Yong， LU Kui-ying//
China Medical Equipment，2016，13（8）：38-41.

Objective： To evaluate the performance of reticulocyte （Ret） detected by Sysmex XN-3000 automatic blood analyzer. Methods： 96 blood samples were collected randomly in clinical detection of reticulocytes， and respectively were detected by XN-3000 automatic blood analyzer and microscopy. The precision， stability， linearity and carryover of Ret in blood samples detected by XN-3000 automatic blood analyzer were evaluated by the correlation analysis of the results from the two methods and the correlation analysis would be completed by microscopy. Results： precision，linear range and sensitivity of Ret measured by XN-3000 were within the allowable range. The stability did not change significantly below 4 ℃ within 48 h （CV＜1%）. The carryover rate was 0.14%. The results measured by XN-3000 were well compared with microscopy （r=0.979）. Conclusion： Sysmex XN-3000 automatic blood analyzer is applied to the clinical detection of large quantities of specimens and it is ideal for measuring Ret.

Reticulocytes； XN-3000 automatic blood analyzer； Detection； Performance evaluation

1672-8270（2016）08-0038-04 ［中圖分類號］R446.113

A

周愛國，男，（1973- ），本科學歷，副主任技師。揚州市第一人民醫院檢驗科，從事臨床檢驗工作。

10.3969/J.ISSN.1672-8270.2016.08.011

lukuiying1965@163.com

2016-04-01