雙孢蘑菇菌種生產規范與技術要點

周林，郭尚，蕭晉川，趙照林，吳風明，郭宵飛，劉曉鋼

(山西省農業科學院食用菌研究所，太原030031)

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雙孢蘑菇菌種生產規范與技術要點

周林，郭尚，蕭晉川，趙照林，吳風明，郭宵飛，劉曉鋼

(山西省農業科學院食用菌研究所，太原030031)

食用菌產業大發展，菌種是非常重要的關鍵，起著巨大的作用。介紹了雙孢蘑菇菌種生產基本流程和操作技術，分析了菌種生產過程中的重點技術特點，推薦了雙孢蘑菇菌種生產技術規程，供我國特別是山西的廣大雙孢蘑菇生產者和菌種生產者以及關聯業務人員參考應用。

雙孢蘑菇；菌種；菌種生產；生產技術規范

隨著我國經濟實力的大發展，工農業產量產值在世界中占有越來越重要的位置，我國的食用菌產業不斷擴大，生產總量達到3000萬t左右，在世界食用菌生產量中占據第一位[1]。食用菌生產量的增長，菌種作為生產資料是至關重要的。

雙孢蘑菇(Aagaricusbisporus)是主要的食用菌產品之一，微生物學分類隸屬擔子菌亞門(Basidiomycotina)、傘菌目(Agaricales)、蘑菇科(Agaricaceae)、蘑菇屬(Agaricus)的草腐菌，在全國乃至世界上都是占有重要地位的，對食用菌產業發展具有重大的影響。雙孢蘑菇的菌種生產是其雙孢蘑菇生產的重要環節，是生產量和產品質量的第一關鍵。菌種生產技術的要求和規范以及菌種產品的質量標準和檢驗，直接影響食用菌的生產和產品質量。為了實現雙孢蘑菇菌種生產的技術規范化，質量標準化，推進我國特別是山西食用菌產業走向現代化，維護菌種生產者、經營者和使用者的合法權益，根據我國國家機關，質量管理部門的有關標準，規范，我們系統地，精準地將雙孢蘑菇的菌種生產技術與質量管理標準總結出來，供廣大雙孢蘑菇企業，栽培農戶者，菌種生產者以及管理者參考應用。本文系統地介紹雙孢蘑菇菌種生產規范與技術要點。

1　我國雙孢蘑菇及其菌種生產的標準規范介紹

我國各級政府以及食用菌管理部門都非常重視食用菌產業的發展和產品質量，制定了很多相關的法規標準，技術規范等，監查管理有關食用菌產業的生產、流通、加工、銷售各個環節。雙孢蘑菇也有很多相應的國家標準，行業標準以及各省的地方標準和企業標準。我們在制定本技術規范時也參照了很多國家有關標準和雙孢蘑菇的有關技術標準，如《中華人民共和國種子法》[2]；《食用菌菌種管理辦法》[3]；《GB/T12728-2006 食用菌術語》[4]；《GB/T 23190-2008雙孢蘑菇》[5]；《NY/T 528-2010食用菌菌種生產技術規程》[6]；《NY/T 1846-2010食用菌菌種檢驗規程》[7]；《NY/T 1731-2009食用菌菌種良好作業規范》[8]；《GB/T 19171-2003 雙孢蘑菇菌種》[9]；《GB/T 7096-2003 食用菌衛生標準》[10]；《GB/191-1990包裝儲運圖示標準》[11]《GB4789.28-2013》[12]等。在本論文中引用的有關上述標準中的條文，凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單(不包括勘誤內容)或改訂版，均不適用本規程。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本規程。

2　菌種生產包含的內容與菌種生產的流程

菌種生產所包含的內容一般是菌種生產制作涉及到的，生產條件，設備，人員，技術，操作，質量檢驗，入庫，運輸，儲藏等全過程。

菌種生產的流程包括，生產場地選擇—環境水源整備—廠區布局與廠房設置—設備與設施—生產原料儲備—衛生檢驗與消毒—培養基制成—分裝—滅菌—冷卻—接種—培養(檢驗)—成品—檢驗合格—入庫管理。

3　菌種生產場(機關，企業)的責任與義務

菌種場生產食用菌菌種必須經過國家有關管理部門審批合格，持有生產食用菌菌種的資質證明。

生產或出售菌種的企業或科研單位，對所生產的菌種以及出售的菌種質量負有責任，并有義務將所生產的菌種的使用方法和注意事項向菌種使用者說明。

4　雙孢蘑菇菌種生產技術與工程管理

4.1菌種生產的產品保證與質量管理檢驗

產品保證主要是指保證提供經過質量檢驗合格的具有良好農業生產性能的菌種產品，以及保證所提供的菌種產品出現質量問題時要承擔責任。

菌種質量管理與檢驗是菌種生產單位的重要環節，必須配備專門機構，專業專職技術人員，有職有權，有責任有擔當，制定嚴格的質量管理與檢驗制度，監督全生產單位堅決執行，行之有效。菌種質量管理檢驗主要包括廠區環境衛生安全—水源及廠房衛生檢驗—生產原料檢驗—生產工序檢驗—菌種質量檢驗—菌種生產單位審核—菌種檔案。

4.2生產技術人員與質量管理人員

菌種生產人員和菌種質量檢驗人員必須經過省級人民政府農業主管部門考核合格，并持有上崗證明。

菌種生產單位要建立菌種生產技術人員和質量管理人員的培養計劃，并按計劃認真培訓所有從業人員。新員工上崗前要接受食用菌生產技術以及菌種生產技術，質量檢驗等教育和培訓，并在以后的每一年都進行新技術培訓進修。

4.3生產條件與設備

4.3.1生產條件

場地選擇：生產雙孢蘑菇菌種的廠址要選擇地勢高、干燥、通風良好、排水暢通、交通方便的地方。

環境衛生要求：廠區周圍300m內不允許存在有禽畜舍，垃圾糞便堆積點，污水廢水廢渣點等污染源。50m內不允許有食用菌生產場地，以及農貿市場。廠區布局與廠房設置：如表1所示。

表1　雙孢蘑菇菌種生產廠區布局與廠房設置

4.3.2生產設備與設施，如表2所示

表2　菌種生產常用設備與設施

4.4生產原料與菌種

4.4.1用于雙孢蘑菇菌種生產的原料主要是農作物谷粒及農副產品的廢棄下腳料如稻稈、麥稈、棉籽皮等，還有其他生物制劑如酵母粉、蛋白胨等。另外還要添加一些化學藥品如硫酸鎂、磷酸二氫鉀等。

4.4.2菌種以及種源的確認。菌種的引種來源要確實可靠，一般應從國家正式科研機關，或具有菌種出售資質的菌種生產單位。要有正式的菌種質量保證書。引種的菌種質量檢驗及種性鑒定是保證菌種生產質量的第一關健。在菌種生產開始時，要對菌種的質量和種性做正規的栽培試驗。

4.5生產技術與良好操作

4.5.1培養原料來源及成分確認。用于雙孢蘑菇菌種生產的原料主要是農作物谷粒及農副產品的廢棄下腳料如稻稈，麥稈，棉籽皮等，這些原料的作物生產地以及作物的品種不同，其下腳料的物質成分含量也不盡相同，有的作物下腳料可能會含有重金屬污染，以及農藥殘留，會影響到雙孢蘑菇菌種的質量。因此在擴繁菌種時要進行確認。應確認農作物下腳料的原產地，作物種類及品中，農藥使用情況并進行登記記錄。

4.5.2培養基配制與分裝

4.5.2.1母種培養基。一般使用馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基(PDA)，也可以使用綜合馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基(CPDA)，嚴格掌握pH值。

4.5.2.2原種與栽培種培養基。雙孢蘑菇原種和栽培種的生產培養基，可根據當地的原料資源、農作物生產情況以及農藥使用狀況選用合適的原材料，可以選擇以下的培養基配方，注意調配pH值。

腐熟麥稈或稻稈(干)77%，腐熟牛糞粉(干)20%,石膏粉1%,碳酸鈣2%,含水量62%±1%,pH7.5。

腐熟棉籽殼(干)97%，石膏粉1%,碳酸鈣2%,含水量55%±1%, pH7.5。

谷粒(小麥，谷子，玉米，高粱)98%，石膏粉2%,含水量50%±1%, pH7.5。

4.5.2.3培養基分裝。母種培養基的分裝量掌握在試管長度的1/4～1/5，滅菌后擺放成的斜面頂端距試管口不少于50mm。原種和栽培種培養基裝至距瓶(袋)口不少于50mm，滅菌后不少于45mm。

4.5.3滅菌及滅菌效果檢查。母種的培養基配制分裝后應立即滅菌;原種和栽培種培養基配制后應在4h內滅菌。母種培養基滅菌0.11～0.12MPa,30min，原種和栽培種培養基滅菌應使用0.14～0.15MPa,2.5h(參照NY/T528-2010[6])。

雙孢蘑菇的菌種培養基滅菌應使用高壓滅菌，不宜使用常壓法。滅菌后藥進行滅菌效果檢查。母種培養基可直接放入28℃恒溫培養，原種和栽培種培養基可先取一點培養基接入PDA培養基中，置于28℃恒溫培養，48h后檢查有無微生物長出，判斷培養基滅菌是否合格。

4.5.4冷卻。冷卻室在使用前要進行清潔和消毒處理。將滅菌后的原種瓶(袋)或栽培種瓶(袋)放置在冷卻室中自然冷卻到料溫降至適宜溫度。

4.5.5接種

4.5.5.1接種室(箱)的清潔滅菌處理。接種室為專門接種用，室內要求清潔無菌，在搬入接種物和被接種物前要衛生清潔處理，然后進行消毒處理。接種超凈臺(接種箱)藥用藥物消毒(75%酒精)并用紫外燈照射。

4.5.5.2接種物的滅菌。接種用培養基可以先放入培養室與培養室一起消毒滅菌。菌種在放入超凈臺里時，要進行表面消毒滅菌。

4.5.5.3接種操作。在無菌室(箱)或凈化工作臺上嚴格按無菌操作接種。接種的品接要單品種操作，中間不得更換品種。一個品種操作完成后，再換另一品種。無論是接種母種還是原種、栽培種，接種時都應從開口處一點接種，避免打孔多點接種。

4.5.5.4接種完成后及時貼好標簽、標志，按照品質管理要求，記錄品種，接種時間等必要信息

4.5.5.5接種室(箱)后處理。接種室每次使用后，要及時清理清潔，排除廢氣，清除廢物，臺面要用75%酒精或新潔爾滅溶液擦拭消毒。

4.5.6培養

4.5.6.1培養室滅菌處理。在使用培養室的前兩天，采用藥物消毒和紫外線消毒。

4.5.6.2培養條件。雙孢蘑菇的菌種培養條件應保持適宜的溫度24℃±1℃，保持空氣相對濕度在75%以下，要求通風良好，避免直射陽光。

4.5.6.3培養期的檢查。各級菌種培養期間應定期檢查，按照本標準的要求以及制種單位的管理制度進行檢查，及時揀出不合格菌種，并做好檢驗記錄作為菌種質量管理檔案資料。

4.5.7成品檢驗。培養結束后進行產品的最終檢驗。貼好標簽、標志、接種日期、培養日數等，做好登記。

4.5.8入庫管理。入庫之前應確認產品質量合格，并做好入庫登記。

母種一般在5℃±1℃冰箱中貯存，保藏期不超過90天。原種應盡快使用，在5℃±1℃下貯存，保藏期不得超過40天。短期儲藏可在溫度24℃±1℃、清潔、通風、干燥(相對濕度70%～75%)、避光的室內存放，但不應超出10天。栽培種應盡快使用，在溫度24℃±1℃、清潔、通風、干燥(相對濕度70%～75%)、避光的室內存放谷粒種不超過10天，其余培養基的栽培種不超過20天。在5℃±1℃下可貯存90天。

[1]張俊飚，李波. 對我國食用菌產業發展的現狀與政策思考 [J].華中農業大學學報(社會科學版)，2012(5)：13-21.

[2]中華人民共和國種子法.

[3]中國農業部.食用菌菌種管理辦法(農業部令2015年第1號修訂) [EB/OL].http://www.moa.gov.cn，20150506-4581023.htm，2015-05-06.

[4]GB/T12728-2006, 食用菌術語[S].北京：中國標準出版社，2007.

[5]GB/T 23190-2008，雙孢蘑菇[S]. 北京：中國標準出版社，2008.

[6]NY/T 528-2010,食用菌菌種生產技術規程[S]. 北京：中國標準出版社，2010.

[7]NY/T 1846-2010,食用菌菌種檢驗規程[S]. 北京：中國標準出版社，2010.

[8]NY/T 1731-2009,食用菌菌種良好作業規范[S]. 北京：中國標準出版社，2009.

[9]GB/T 19171-2003,雙孢蘑菇菌種[S]. 北京：中國標準出版社，2003.

[10]GB/T 7096-2003,食用菌衛生標準[S]. 北京：中國標準出版社，2003.

[11]GB/191-1990,包裝儲運圖示標志[S].北京:中國標準出版社，1990.

[12]GB4789.28-2013,食品微生物學檢驗培養基和試劑的質量要求[S].北京:中國質檢出版社，2014.

Practice and Technology Point for Agaricus bisporus Spawn Production

Zhou Lin, Guo Shang, Xiao Jinchuan, Zhao Zhaolin,Wu Fengming,Guo Xiaofei, Liu Xiaogang

(Shanxi Provincial Academy of Agricultural Sciences, Institute of Edible Fungi, Taiyuan 030031)

The spawn is very important for development of edible fungus industry.This paper introduces the basic process and operation technology ofAgaricusbisporusspawn production, and analyses key technology in the process of producing.It is recommended that the technical specification ofAgaricusbisporusspawn production, and offers reference for the large number ofAgaricusbisporusproducer and the related service personnel.

Agaricusbisporus;Spawn; Spawn production; Technical specification for production

2016-06-12

2014年度山西省煤基重點科技攻關項目(FT2014-03)子項目“食用菌產品質量保證體系構建與研究”的階段性研究成果

周林(1958-)，男，博士，主要從事食用菌資源及菌根食用菌共生機理研究，食用菌生產技術與產品質量保證體系研究，E-mail：nkysyj301@126.com。

S646.1+1

B

DOI.:10.13268/j.cnki.fbsic.2016.05.017