受體酪氨酸激酶EphB6蛋白在結直腸癌中表達及臨床意義

陳昌浩，孫岳軍,王建東

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·論著·

受體酪氨酸激酶EphB6蛋白在結直腸癌中表達及臨床意義

陳昌浩1，孫岳軍2,王建東3

目的探索促紅細胞生成素產生肝細胞激酶受體B6(EphB6)蛋白在結直腸癌中表達及其臨床意義。 方法采用免疫組織化學染色方法檢測一組結直腸癌組織中EphB6蛋白表達，分析其與臨床病理指標以及患者總生存時間之間的關系。結果正常黏膜組織EphB6蛋白陽性表達率為75.0%(93/124)，腺瘤型息肉為73.7%(42/57)，結直腸癌組織中為54.0%(67/124)， EphB6在結直腸癌中的表達顯著低于腺瘤和正常黏膜(P<0.05)。EphB6蛋白在癌組織中表達與腫瘤分化(P<0.01)、淋巴結轉移(P<0.01)和Dukes分期(P<0.01)有關；但與結直腸癌患者的年齡、性別和部位無關。EphB6低表達患者比高表達患者預后差(P<0.05)。結論EphB6 在結直腸癌發生、發展和預后中可能具有抑癌基因的作用，可能成為一種新的腫瘤預后和治療靶點。

受體酪氨酸激酶；肝細胞激酶受體B6；結直腸癌

促紅細胞生成素產生肝細胞激酶受體(erythropoietin producing hepatocyte kinase，Eph)是受體酪氨酸激酶(receptor tyrosine kinase, RTK)，包括EphAs和EphBs受體，和EphrinAs和EphrinBs配體。Eph及其Ephrin之間傳遞信號在胚胎發育，特別是神經軸突導向和血管生成等方面發揮著重要功能[1-5]。Eph受體及其配體在多種惡性腫瘤中表現為表達異常，與腫瘤發生、發展、侵襲、和轉移過程密切相關[6-8]。與其他Eph基因不同，EphB6在其酪氨酸激酶活性區發生了幾個氨基酸的改變，導致與ATP結合障礙并失去酪氨酸激酶活性[9-10]。不同研究小組對EphB6在多種腫瘤中的表達及作用開展了研究。Gu 等[11]檢測了一組卵巢漿液性腫瘤中EphB6蛋白的表達，他們發現EphB6在正常輸卵管和良性卵巢腫瘤中100%表達，78%的交界性腫瘤中表達，18%的漿液性癌中表達。EphB6表達水平與分級和TNM分期相關，EphB6低表達或丟失 的患者存活時間降低。Dong等[12]研究了EphB6在舌鱗狀細胞癌中的表達及其臨床意義。本文利用免疫組織化學染色檢測了一組結直腸癌標本，探索EphB6的表達及其臨床病理指標的相關性。

A：顯示癌組織與癌旁正常組織交界處，癌組織呈實性片狀分布;B：顯示EphB6蛋白在正常黏膜腺腔的高爾基體分泌部著色，EphB6在腫瘤組織的表達較正常組織中下調;C：顯示結腸腺瘤型息肉伴低級別上皮內瘤變;D：顯示EphB6蛋白在結直腸腺瘤和正常黏膜腺腔的高爾基體分泌部中均著色(放大倍數×200，A、C為HE染色，B、D為Envision法)圖1　EphB6蛋白在結直腸癌、良性病變和正常組織中的表達

1　材料與方法

1.1組織標本本研究所用石蠟標本為東南大學附屬第二人民醫院和江陰市人民醫院病理科存檔病例，所取標本均獲得患者知情同意，并獲得醫院倫理委員會批準。收集124例結直腸癌、57例腺瘤型息肉(2005年8月-2012年7月)的石蠟組織標本，結直腸癌病例中女54例，男70例，中位年齡56歲(36～82歲)，選取了不同分化腫瘤(高分化癌19例，中分化癌79例，低分化癌26例)。另外還選取了良性息肉57例，中位年齡58歲(31～74歲)，包括低級別上皮內瘤變45例，高級別上皮內瘤變12例。

1.2方法兔抗人EphB6抗體購自美國ABGENT公司，稀釋度為1∶500；二抗和DAB顯色試劑盒采用福州邁新公司產品。4微米組織切片，脫臘、水化后，高壓抗原修復，應用3% H2O2修復內源性過氧化物酶。 Envision法檢測組織EphB6蛋白表達，用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替EphB6一抗做陰性對照，按照試劑盒說明書嚴格操作。

1.3結果判斷高倍鏡下分析10個視野(×400)，每個高倍鏡視野分析計數100個腫瘤細胞。本實驗采用半定量計分方法，即陽性細胞百分數+染色強度：陽性細胞數<5%為0分，5%～25%為1分，26～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分；無著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，深黃色為3分。最終結果：0分為缺失表達，1～2分為低表達，缺失表達和低表達為陰性；3～4分為中表達，5～7分為高表達，中表達和高表達為陽性表達。

1.4隨訪中位隨訪時間為7 個月，79例結直腸癌獲得有效隨訪資料，隨訪期間，57例(72.1%)死亡(38例死于復發)。隨訪從手術之日開始，失訪、死于其他疾病或者在隨訪截至時仍存活視為截尾數據。總生存期(overall survival, OS)定義為從初次治療開始至死亡或隨訪終點時間。

1.5統計學處理采用SSPS 17.0 軟件對數據進行統計學分析，計數資料組間比較采用χ2檢驗，生存率采用Kaplan-Meier法計算，Log-rank檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2　結　果

2.1EphB6在腸正常黏膜、腺瘤和結直腸癌組織中的表達免疫組化示EphB6陽性染色主要表現為為高爾基體分泌部著色(圖1)。EphB6蛋白在正常黏膜、腺瘤和癌組織中陽性表達率分別為75.0% (93/124)、73.7% (42/57)和54.0% (67/124)。結直腸癌癌組織中EphB6蛋白的表達明低于腺瘤型息肉和正常黏膜(P<0.05)。

2.2EphB6表達與臨床病理指標之間的關系應用統計學工具分析EphB6蛋白表達與結直腸癌患者臨床病理多項參數之間的關系，見表1。

表1　EphB6蛋白在結直腸癌中的表達與

2.3EphB6表達與患者預后的關系進一步分析EphB6表達水平與患者的預后關系，EphB6表達患者的平均生存期分別為53.8個月；低表達患者的平均生存期為83.3個月，兩組5年總生存率分別為63.2%和83.2%。統計學分析發現EphB6低表達的患者較EphB6高表達的患者生存時間短(圖2)

圖2　EphB6表達與患者生存

Kaplan-Meier曲線為結直腸癌患者的生存分析，EphB6蛋白低表達患者較高表達患者預后差，具有統計學差異(P<0.05)。

3　討　論

結直腸癌是全球危害健康最常見惡性腫瘤，發病率為全部癌癥的第三位。雖然在結直腸癌治療方面已取得重大進步，但目前臨床治療手段包括手術、化療、放療和靶向治療等對晚期轉移結直腸癌的效果并未發生根本性改善。研究結直腸癌的分子機制，早期發現腫瘤和進行個體化治療，改善治療策略，對提高患者的生存率具有重要意義[13]。

本研究利用特異性多克隆抗體進行免疫化學染色，檢測了一組結直腸癌、腺瘤及正常黏膜組織中EphB6蛋白的表達情況，分析EphB6蛋白表達與患者臨床病理指標和生存時間之間的關系，為臨床評估疾病進展及判斷預后提供線索。本研究揭示了EphB6蛋白表達與臨床病理指標相關，即EphB6蛋白在結直腸癌中表達與分化程度、淋巴結轉移和Dukes分期有關，具有統計學意義(P<0.01)；但尚未發現其表達下調與年齡、性別、腫瘤浸潤深度、部位存在相關性。這結果提示EphB6蛋白可能對結直腸癌的分化、轉移和生長浸潤產生影響，與腫瘤進展相關。本研究通過統計學分析EphB6蛋白表達與結直腸癌患者的生存時間，發現EphB6低表達組平均生存時間明顯低于高表達組患者。我們推測EphB6基因有望評估結直腸癌患者預后的重要指標之一。

因此，本研究結果提示EphB6蛋白表達水平下調可能參與了良性腺瘤向結直腸癌的轉變過程，即該基因蛋白可能參與了結直腸癌的早期發生和腫瘤的進展過程。 EphB6蛋白表達與腫瘤分化和淋巴結轉移有關，提示該蛋白可能具有抑制腫瘤細胞發生浸潤和轉移。雖然本研究提示EphB6基因在結直腸癌的進展過程中可能發揮一定抑制作用，但其表達的調控機制和腫瘤抑制作用仍有待下一步深入研究。我們相信對EphB6在結直腸癌中的深入研究，可能為此疾病的風險評估及患者預后評價提供新的實驗室指標。

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(本文編輯：黃攸生；英文編輯：王建東)

Clinical significance of decreased expression of EphB6 receptor tyrosine kinase in colorectal carcinoma

CHEN Chang-hao1, SUN Yue-jun2, WANG Jian-dong3.

1.TheSecondAffiliatedHospitalofSoutheastUniversity,Nanjing,Jiangsu210003,China; 2.JiangyinPeoples’Hospital,Jiangyin,Jiangsu214400,China; 3.NanjingGeneralHospital,Nanjing,Jiangsu210002,China

ObjectiveTo explore the clinical significance of decreased expression of EphB6 receptor tyrosine kinase in colorectal carcinoma. MethodsA set of colorectal carcinoma samples was detected the expression of EphB6 by using immunohistochemical staining. The relationship between the expression of EphB6 and clinicopathological parameters and survival was analyzed. ResultsThe EphB6 expression was detected in normal mucosa (75.0%, 93/124), adenoma (73.7%, 42/57), colorectal carcinoma (54.0%, 67/124). The expression level of EphB6 was significantly decreased in colorectal cancer compared with adenoma and normal mucosa (P<0.05). The decreased expression of EphB6 was significantly associated with differentiation (P<0.01), lymph node metastasis(P<0.01) and Dukes stage (P<0.01). There was no significant difference between the expression of EphB6 and age, sex, and tumor location. The patients with decreased expression of EphB6 had a poor survival (P<0.05). ConclusionEphB6 may have a tumor suppressor role in colorectal carcinoma and may be a new target for therapy.

receptor tyrosine kinase; EphB6; colorectal carcinoma

國家自然基金(81371611)

1. 210003江蘇南京，東南大學附屬第二醫院肝膽外科；2. 214400江蘇江陰， 江陰市人民醫院病理科；3. 210002江蘇南京，南京軍區南京總醫院病理科

王建東，E-mail: jd_wang@outlook.com

R365；R735.37

A

10.3969/j.issn.1672-271X.2016.04.003

2016-06-22；

2016-07-06)

引用格式：陳昌浩，孫岳軍,王建東.受體酪氨酸激酶EphB6蛋白在結直腸癌中表達及臨床意義[J].東南國防醫藥，2016,18(4):346-348.