柚皮素對(duì)人胃癌SGC-7901細(xì)胞株增殖和轉(zhuǎn)移能力的影響

賈　淼， 師阿盟， 史海濤， 王　燕， 董　蕾， 郭曉燕

(西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院消化內(nèi)科，陜西省胃腸動(dòng)力疾病研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，陜西省胃腸疾病臨床研究中心，西安　710004；*通訊作者，E-mail:shihaitao7@163.com)

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柚皮素對(duì)人胃癌SGC-7901細(xì)胞株增殖和轉(zhuǎn)移能力的影響

賈淼， 師阿盟， 史海濤*， 王燕， 董蕾， 郭曉燕

(西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院消化內(nèi)科，陜西省胃腸動(dòng)力疾病研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，陜西省胃腸疾病臨床研究中心，西安710004；*通訊作者，E-mail:shihaitao7@163.com)

目的探討柚皮素對(duì)人胃癌SGC-7901細(xì)胞增殖、黏附、侵襲及遷移能力的影響。 方法選用不同濃度柚皮素(100,200,400 μmol/L)干預(yù)人胃癌細(xì)胞株SGC-7901，并設(shè)立對(duì)照組(未經(jīng)柚皮素處理)，采用MTT 法檢測(cè)細(xì)胞增殖及黏附能力；采用Transwell小室檢測(cè)細(xì)胞侵襲及遷移能力；采用real-time PCR及Western blot檢測(cè)基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)mRNA及蛋白表達(dá)變化。結(jié)果① 柚皮素干預(yù)胃癌細(xì)胞24 h后，增殖能力無(wú)明顯變化；而干預(yù)48 h及72 h后，胃癌細(xì)胞增殖能力明顯降低(P<0.05)。② 200及400 μmol/L柚皮素可明顯降低胃癌細(xì)胞的黏附、侵襲及遷移能力(P<0.05)，而100 μmol/L柚皮素僅能降低胃癌細(xì)胞的遷移能力(P<0.05)，但對(duì)黏附及侵襲能力無(wú)明顯影響。③ 柚皮素可明顯降低胃癌細(xì)胞內(nèi)MMP-2及MMP-9的表達(dá)(P<0.05)，但對(duì)VEGF的表達(dá)無(wú)明顯影響。結(jié)論柚皮素可抑制胃癌細(xì)胞的增殖、黏附、侵襲及遷移能力，這可能與其下調(diào)MMP-2及MMP-9表達(dá)有關(guān)。

柚皮素；胃癌；SGC-7901細(xì)胞；細(xì)胞增殖；細(xì)胞轉(zhuǎn)移

胃癌是消化系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性腫瘤，在所有惡性腫瘤死亡率中排名第二。胃癌的臨床癥狀缺乏特異性，因此發(fā)現(xiàn)時(shí)多已進(jìn)入中晚期。中晚期胃癌的手術(shù)效果欠佳，而化療因其較大的毒副作用導(dǎo)致患者不能耐受，新近研究的生物治療亦因價(jià)格昂貴以及效果不明確等原因限制了其廣泛應(yīng)用[1]。隨著中藥現(xiàn)代化、藥理分析技術(shù)及分子生物技術(shù)的發(fā)展，中藥以及各種植物成分在腫瘤治療中的作用逐漸受到重視[2]。柚皮素(naringenin)是存在于植物中的一種黃酮類化合物，研究表明其具有抗炎、抗氧化、降脂及抗癌活性[3-7]。關(guān)于其抗癌作用，有研究報(bào)道其可通過(guò)增強(qiáng)免疫系統(tǒng)對(duì)癌細(xì)胞的殺傷作用來(lái)發(fā)揮抗癌能力，但又有研究發(fā)現(xiàn)柚皮素可直接發(fā)揮抗癌作用，這在肝癌[7]、胰腺癌[8]、結(jié)腸癌[9]、肺癌[10]、乳腺癌[11]等腫瘤中已有相關(guān)研究，但其對(duì)胃癌細(xì)胞的作用尚不十分清楚。研究發(fā)現(xiàn)進(jìn)展期胃癌治療效果欠佳的原因之一便是腫瘤轉(zhuǎn)移，許多患者并非死于原發(fā)灶而是死于轉(zhuǎn)移灶[1]。因此，本實(shí)驗(yàn)旨在探討柚皮素對(duì)人胃癌SGC-7901細(xì)胞增殖及轉(zhuǎn)移能力的影響，為其臨床應(yīng)用提供理論及實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1　材料與方法

1.1細(xì)胞株及主要試劑

人胃癌SGC-7901細(xì)胞株(購(gòu)自中科院上海細(xì)胞生物研究所)；柚皮素、MTT、DMSO(Sigma，美國(guó))；RPMI1640(Hyclone，美國(guó))；胎牛血清(浙江杭州天航生物科技有限公司)；Transwell小室、96孔板及24孔板(Costar，美國(guó))；基質(zhì)膠(Matrigel)(BD公司，美國(guó))；RNA提取試劑盒Fastgen200(上海飛捷生物技術(shù)有限公司)；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(Fermentas，美國(guó))；SYBR Premix Ex TaqTMⅡ(Takara生物工程有限公司)；總蛋白提取試劑盒(陜西先鋒生物有限公司，中國(guó))；兔抗人β-actin、MMP-2、MMP-9及VEGF多克隆抗體(Proteintech，美國(guó))；HRP標(biāo)記山羊抗兔IgG(Bioworld，美國(guó))。

1.2柚皮素的制備

柚皮素溶解于DMSO中，再用無(wú)血清的RPMI 1640稀釋為100,200,400 μmol/L。

1.3細(xì)胞培養(yǎng)及分組

人胃癌細(xì)胞SGC-7901于含10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中，置于37 ℃、含5% CO2飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，2-3 d后0.25%胰酶消化傳代，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分4組：對(duì)照組(未經(jīng)柚皮素處理)、實(shí)驗(yàn)組(柚皮素濃度分別為100，200，400 μmol/L)。

1.4細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)

人胃癌細(xì)胞SGC-7901胰酶消化后用含10%胎牛血清的RPMI1640調(diào)整細(xì)胞密度至3×104/ml，接種于96孔板，每孔200 μl，每組5個(gè)復(fù)孔，經(jīng)各組藥物干預(yù)，分別培養(yǎng)24，48，72 h后每孔加入MTT 20 μl，孵育4 h后棄去孔內(nèi)培養(yǎng)液，加150 μl DMSO置搖床上振蕩10 min，酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀490 nm處測(cè)量各孔的吸光度值(OD)。細(xì)胞增殖抑制率(%)=(陰性對(duì)照組OD值-柚皮素組OD值)/陰性對(duì)照組OD值×100%。

1.5細(xì)胞黏附實(shí)驗(yàn)

將基質(zhì)膠Matrigel用不含血清的冷RPMI1640按1∶5稀釋，96孔板中每孔100 μl，室溫干燥過(guò)夜。胃癌細(xì)胞經(jīng)柚皮素干預(yù)48 h后，接種于含Matrigel的96孔板中，每孔10 000個(gè)細(xì)胞，每組5個(gè)復(fù)孔，以培養(yǎng)液作為空白對(duì)照調(diào)零組，置于培養(yǎng)箱內(nèi)孵育。3 h后用PBS溶液沖洗，每孔加入MTT 20 μl，培養(yǎng)4 h后吸去孔內(nèi)培養(yǎng)液。每孔加入150 μl DMSO，置搖床上振蕩10 min。在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀490 nm處測(cè)量各孔的吸光度值(OD)。

1.6細(xì)胞侵襲及遷移實(shí)驗(yàn)

將基質(zhì)膠Matrigel用不含血清的冷RPMI1640按1∶5稀釋，取100 μl加到24孔Transwell上室中，室溫干燥過(guò)夜以重建基底膜。胃癌細(xì)胞經(jīng)柚皮素干預(yù)48 h后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，用含5%胎牛血清的RPMI1640調(diào)整細(xì)胞密度到1×105/ml。24孔板Transwell小室上室加200 μl細(xì)胞懸液，下室加600 μl含20%胎牛血清的RPMI1640作為趨化液，每組設(shè)3個(gè)小室。37 ℃培養(yǎng)箱孵育24 h后用棉簽擦去濾膜內(nèi)表面未穿過(guò)的細(xì)胞，外表面采用結(jié)晶紫染色，取5個(gè)視野(上、中、下、左、右)照相并計(jì)數(shù)，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)除不鋪Matrigel外，其余步驟同侵襲實(shí)驗(yàn)。1.7real time-PCR檢測(cè)MMP-2、MMP-9 及VEGF mRNA表達(dá)

柚皮素干預(yù)胃癌細(xì)胞48 h后，采用Fastgen試劑盒提取細(xì)胞總RNA。cDNA合成按照Fermentas逆轉(zhuǎn)錄試劑盒操作說(shuō)明提取。引物設(shè)計(jì)及合成以NCBI Genebank中提供的人類基因序列行MMP-2、MMP-9、VEGF、β-actin的引物設(shè)計(jì)，由Takara生物工程(大連)有限公司合成。MMP-2(NM_001302510.1)：上游5′-TTGGTGGGAACTCAGAAGG-3′，下游5′-CTTGCGGTCATCATCGTA-3′；MMP-9(NM_004994.2)：上游5′-TGACAGCGACAAGAAGTG-3′，下游5′-CAGTGAAGCGGTACATAGG-3′；VEGF(NM_001287044.1)：上游5′-CGGCGAAGAGAAGAGACACATTG-3′，下游5′-CGGGAAGGGAAGGGAAGGAC-3′；β-actin(NM_001101.3)：上游5′-ATCGTGCGTGACATTAAGGAGAAG-3′，下游5′-AGGAAGGAAGGCTGGAAGAGTG -3′。反應(yīng)體系包括模板cDNA 1 μl， 上游引物(10 μmol/L)1 μl，下游引物(10 μmol/L)1 μl，SYBR Premix Ex TaqTMⅡ 10 μl，ddH2O 7 μl，置于熒光定量PCR儀中進(jìn)行擴(kuò)增，反應(yīng)條件為：95 ℃ 3 min；95 ℃ 10 s；60 ℃ 30 s；共40個(gè)循環(huán)。PCR反應(yīng)結(jié)束后，將PCR反應(yīng)液溫度自60 ℃至95 ℃緩慢升溫，實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)SYBR GreenⅠ的熒光信號(hào)強(qiáng)度變化，獲取融解曲線，以確認(rèn)PCR反應(yīng)的特異性。目的基因相對(duì)表達(dá)水平參考文獻(xiàn)[11]為2-ΔΔCt= 2-(ΔCta-ΔCtb)，ΔCt=Ct目的基因-Ct內(nèi)參基因，a、b分別代表兩組樣本，其中a代表實(shí)驗(yàn)組，b代表對(duì)照組，Ct為根據(jù)擴(kuò)增曲線確定的擴(kuò)增循環(huán)數(shù)。

1.8Western blot檢測(cè)MMP-2、MMP-9及VEGF蛋白表達(dá)

藥物干預(yù)48 h后，按照總蛋白提取試劑盒提取細(xì)胞總蛋白，加上樣緩沖液，在聚丙稀酰胺凝膠中電泳，將蛋白電轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，5%脫脂奶粉封閉后分別與抗β-actin、抗MMP-2、抗MMP-9、抗VEGF多克隆抗體孵育，再與相應(yīng)的二抗反應(yīng)，陽(yáng)性條帶用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)。結(jié)果用Gel-pro分析軟件進(jìn)行分析，計(jì)算目的蛋白與相應(yīng)內(nèi)參的光密度比值。

1.9統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2　結(jié)果

2.1柚皮素對(duì)胃癌細(xì)胞增殖能力的影響

采用MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力，活細(xì)胞數(shù)目越少，OD值越小。由表1可以看出，與對(duì)照組相比，柚皮素干預(yù)胃癌細(xì)胞24 h后，SGC-7901細(xì)胞增殖無(wú)明顯變化；而柚皮素干預(yù)48 h和72 h后，100，200，400 μmol/L柚皮素均可明顯抑制胃癌細(xì)胞的增殖(P<0.05)，且隨著濃度的增加及干預(yù)時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞增殖抑制率亦明顯增加，其中400 μmol/L柚皮素干預(yù)胃癌細(xì)胞72 h后細(xì)胞增殖抑制率達(dá)35.3%。

2.2柚皮素對(duì)胃癌細(xì)胞黏附的影響

采用MTT法檢測(cè)黏附于96孔板內(nèi)Matrigel的細(xì)胞數(shù)，細(xì)胞數(shù)越少，OD值越小。由表2可以看出，與對(duì)照組相比，100 μmol/L柚皮素組OD值無(wú)明顯變化，而200，400 μmol/L柚皮素組OD值明顯減小，提示黏附于Matrigel的胃癌細(xì)胞數(shù)明顯減少(P<0.05)，表明柚皮素可降低胃癌細(xì)胞的黏附能力。

表1柚皮素對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞增殖能力的影響

Table 1Effect of naringenin on the proliferation capacities of gastric cancer SGC-7901 cells

時(shí)間對(duì)照組OD值100μmol/L柚皮素組200μmol/L柚皮素組400μmol/L柚皮素組OD值抑制率(%)OD值抑制率(%)OD值抑制率(%)24h0.486±0.0360.479±0.0310.20.457±0.0464.80.428±0.04010.948h0.681±0.0370.606±0.016*11.10.587±0.032*13.90.503±0.051*25.372h0.879±0.0430.749±0.032*14.80.654±0.039*25.60.569±0.051*35.3

與對(duì)照組比較，*P<0.05

2.3柚皮素對(duì)胃癌細(xì)胞侵襲能力的影響

采用Transwell小室檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力，胃癌細(xì)胞需水解Matrigel穿過(guò)基膜，穿過(guò)的細(xì)胞數(shù)越多，表明侵襲能力越強(qiáng)。由表2及圖1可以看出，與對(duì)照組比較，100 μmol/L柚皮素組細(xì)胞數(shù)無(wú)明顯變化，而200，400 μmol/L柚皮素組穿膜細(xì)胞數(shù)明顯減少 (P<0.05)，表明柚皮素可降低胃癌細(xì)胞的侵襲能力。

2.4柚皮素對(duì)胃癌細(xì)胞遷移能力的影響

采用不鋪Matrigel的Transwell小室檢測(cè)細(xì)胞遷移能力，穿過(guò)的細(xì)胞數(shù)越多，表明遷移能力越強(qiáng)。由表2及圖2可以看出，與對(duì)照組比較，100，200，400 μmol/L柚皮素組穿膜細(xì)胞數(shù)均明顯減少(P<0.05)，表明柚皮素可降低胃癌細(xì)胞的遷移能力。

表2柚皮素對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞黏附、侵襲及遷移能力的影響

Table 2Effect of naringenin on the adhesive, invasive and migratory capacities of gastric cancer SGC-7901 cells

組別黏附能力(OD值)侵襲能力(穿膜細(xì)胞數(shù),個(gè))遷移能力(穿膜細(xì)胞數(shù),個(gè))對(duì)照組0.539±0.016283.89±27.28332.78±20.55100μmol/L柚皮素0.503±0.031268.33±33.02282.89±42.31*200μmol/L柚皮素0.435±0.033*207.78±30.00*223.22±28.38*400μmol/L柚皮素0.408±0.042*121.22±24.94*145.56±27.30*

與對(duì)照組比較，*P<0.05

2.5柚皮素對(duì)胃癌細(xì)胞MMP-2、MMP-9 及VEGF表達(dá)的影響

采用real-time PCR及Western blot檢測(cè)柚皮素對(duì)胃癌細(xì)胞內(nèi)MMP-2、MMP-9 及VEGF mRNA及蛋白表達(dá)的影響，由圖3、4可以看出，與對(duì)照組相比，100,200,400 μmol/L柚皮素組胃癌細(xì)胞內(nèi)MMP-2的表達(dá)均明顯下降(P<0.05)，而MMP-9的表達(dá)僅在200及400μmol/L組明顯下降(P<0.05)，100 μmol/L柚皮素對(duì)MMP-9的表達(dá)無(wú)明顯影響。不同濃度的柚皮素對(duì)VEGF的表達(dá)均無(wú)明顯影響。

A.對(duì)照組　　　　　B.100 μmol/L柚皮素　　　C.200 μmol/L柚皮素　　D.400 μmol/L柚皮素　　　圖1　柚皮素對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞侵襲能力的影響(結(jié)晶紫染色，×200)Figure 1　Effect of naringenin on the invasive capacities of gastric cancer SGC-7901 cells (×200)

A.對(duì)照組　　　　　B.100 μmol/L柚皮素　　　C.200 μmol/L柚皮素　　D.400 μmol/L柚皮素　　　圖2　柚皮素對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞遷移能力的影響 (結(jié)晶紫染色，×200)Figure 2　Effect of naringenin on the migratory capacities of gastric cancer SGC-7901 cells (×200)

圖3　柚皮素對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞內(nèi)MMP-2、MMP-9及VEGF蛋白表達(dá)的影響Figure 3　Effect of naringenin on protein expression of MMP-2, MMP-9 and VEGF in gastric cancer SGC-7901 cells

圖4　柚皮素對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞內(nèi)MMP-2、MMP-9 及VEGF mRNA表達(dá)的影響Figure 4　Effect of naringenin on mRNA expression of MMP-2, MMP-9 and VEGF in gastric cancer SGC-7901 cells

3　討論

隨著中藥現(xiàn)代化研究的發(fā)展，人們逐漸認(rèn)識(shí)到中藥在腫瘤治療中的作用及機(jī)制。相比于西藥，中藥具有毒性低、價(jià)格便宜的優(yōu)勢(shì)，中藥及其具體成分抗癌作用的闡明也提示其在腫瘤預(yù)防中的重要性。中藥除了直接的抗癌作用如抑制細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞凋亡、抑制細(xì)胞轉(zhuǎn)移等，還可通過(guò)調(diào)節(jié)免疫間接發(fā)揮抗腫瘤作用[2]。柚皮素是柚皮甙的甙元，屬于二氫黃酮類化合物，研究發(fā)現(xiàn)其同時(shí)具備直接和間接抗癌作用。關(guān)于其抗癌機(jī)制，Arul等[7]發(fā)現(xiàn)柚皮素可通過(guò)阻斷細(xì)胞周期抑制細(xì)胞增殖，并誘導(dǎo)凋亡發(fā)揮抗肝癌作用。Lou等[8]發(fā)現(xiàn)柚皮素可通過(guò)抑制TGF-β誘導(dǎo)的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化以及降低MMP-2、MMP-9表達(dá)抑制胰腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。Li等[9]發(fā)現(xiàn)柚皮素可通過(guò)抑制COX-1的表達(dá)抑制結(jié)腸癌細(xì)胞生長(zhǎng)。Jin等[10]發(fā)現(xiàn)柚皮素可通過(guò)上調(diào)死亡受體5從而增加TRAIL誘導(dǎo)的肺癌細(xì)胞凋亡。Abaza等[11]發(fā)現(xiàn)柚皮素可通過(guò)阻斷細(xì)胞周期并調(diào)節(jié)Akt及NF-κB信號(hào)通路等抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖。綜上所述，柚皮素具有抗癌作用已經(jīng)被初步證實(shí)，但其對(duì)胃癌的作用尤其是胃癌轉(zhuǎn)移的影響及機(jī)制尚不十分清楚，本研究初步探討了柚皮素對(duì)胃癌細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移能力的影響及可能的分子機(jī)制。

腫瘤細(xì)胞的增殖與凋亡決定著癌癥的進(jìn)展，但其轉(zhuǎn)移能力無(wú)疑與疾病的預(yù)后密切相關(guān)，無(wú)論早期腫瘤還是進(jìn)展期腫瘤，控制轉(zhuǎn)移都顯得尤為重要。針對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制及抗轉(zhuǎn)移藥物的研究倍受關(guān)注。腫瘤轉(zhuǎn)移的基本過(guò)程包括原發(fā)腫瘤的增殖、腫瘤細(xì)胞的黏附、侵襲、遷移、新生血管、轉(zhuǎn)移癌灶的形成。腫瘤細(xì)胞不斷增殖導(dǎo)致組織內(nèi)部壓力增高，癌細(xì)胞間黏附降低，而與細(xì)胞外基質(zhì)間的黏附增加，并在各種水解酶的作用下降解細(xì)胞外基質(zhì)，然后向血管或淋巴管侵入，隨即穿出血管到達(dá)靶器官可形成微小轉(zhuǎn)移灶，新生血管的生成將使得轉(zhuǎn)移灶不斷增殖，當(dāng)增殖到一定大小又開(kāi)始向別處轉(zhuǎn)移[12]。由此可見(jiàn)，腫瘤細(xì)胞的增殖、黏附、侵襲、遷移及血管生成能力在腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程中具有重要的作用，也是許多抗腫瘤轉(zhuǎn)移藥物作用的靶點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)在體外采用基質(zhì)膠Matrigel模擬細(xì)胞外基質(zhì)，并結(jié)合Transwell小室模擬胃癌細(xì)胞的黏附、侵襲及遷移過(guò)程，結(jié)果提示柚皮素可明顯抑制胃癌轉(zhuǎn)移過(guò)程中的增殖、黏附、侵襲及遷移能力，表明柚皮素可能具有抗胃癌轉(zhuǎn)移的作用，但其機(jī)制如何，尚需進(jìn)一步研究。既往的研究發(fā)現(xiàn)在腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程中，基質(zhì)金屬酶(MMPs)起著至關(guān)重要的作用。MMPs是鋅離子依賴的內(nèi)分泌蛋白酶，主要參與細(xì)胞間黏附調(diào)節(jié)、細(xì)胞外基質(zhì)的降解和新血管的形成[13]。目前發(fā)現(xiàn)MMPs家族成員達(dá)20多種，其中MMP-2和MMP-9主要降解Ⅳ型膠原蛋白，在多種腫瘤組織包括胃癌中高表達(dá)，對(duì)腫瘤細(xì)胞的黏附、侵襲和遷移過(guò)程發(fā)揮著重要的作用[14,15]。VEGF是一種血管生成因子，可以通過(guò)促進(jìn)腫瘤血管生成和重建為腫瘤的生長(zhǎng)提供營(yíng)養(yǎng)，同時(shí)可以使血管通透性增加，為腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移提供有利的條件[16]。因此，本實(shí)驗(yàn)為明確柚皮素抑制胃癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的機(jī)制，進(jìn)一步研究了其對(duì)胃癌細(xì)胞內(nèi)MMP-2、MMP-9及VEGF的影響，結(jié)果提示柚皮素可明顯抑制胃癌細(xì)胞內(nèi)MMP-2及MMP-9的表達(dá)，但對(duì)VEGF的表達(dá)無(wú)明顯影響，提示柚皮素可能通過(guò)抑制MMP-2及MMP-9抑制胃癌細(xì)胞的黏附、侵襲及遷移，但卻對(duì)血管生成中最重要的因子VEGF表達(dá)無(wú)明顯影響，因此，柚皮素是否可影響胃癌的血管生成尚需進(jìn)一步更深入的研究。

綜上所述，本研究從胃癌轉(zhuǎn)移的過(guò)程入手，探討了柚皮素對(duì)胃癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力的影響及機(jī)制，結(jié)果表明柚皮素在體外可明顯抑制胃癌細(xì)胞的增殖、黏附、侵襲及遷移能力，并可降低胃癌細(xì)胞內(nèi)MMP-2及MMP-9的表達(dá)，但對(duì)VEGF的表達(dá)無(wú)明顯影響。本研究結(jié)果進(jìn)一步揭示了柚皮素的抗癌作用，尤其是其對(duì)胃癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力的抑制作用，從而為胃癌的綜合治療提供了新的方向。

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Effect of naringenin on the proliferative and metastatic capacities of human gastric cancer SGC-7901 cells

JIA Miao, SHI Ameng, SHI Haitao*, WANG Yan, DONG Lei, GUO Xiaoyan

(DepartmentofGastroenterology,SecondAffiliatedHospitalofXi’anJiaotongUniversity,ShaanxiKeyLaboratoryofGastrointestinalMotilityDisorders,ShaanxiClinicalResearchCenterofGastrointestinalDisease,Xi’an710004,China;*Correspondingauthor,E-mail:shihaitao7@163.com)

ObjectiveTo investigate the effect of naringenin on the proliferative, adhesive, invasive and migratory capacities of human gastric cancer SGC-7901 cells.MethodsSGC-7901 cells were treated with different concentrations of naringenin(0,100,200,400 μmol/L). Then the cell proliferative and adhesive capacities were measured by MTT assay, and the cell invasive and migratory capacities were determined by Transwell assay. The mRNA and protein expression levels of metalloproteinase-2(MMP-2), MMP-9 and vascular endothelial growth factor(VEGF) in gastric cancer cells were detected by real-time PCR and Western blot.Results①Naringenin had no effect on cell proliferation after 24 h treatment. However, the proliferative capacity of SGC-7901 cells was inhibited significantly when treated with naringenin for 48 h and 72 h(P<0.05). ②The 200 and 400 μmol/L naringenin significantly inhibited adhesive, invasive and migratory capacities of SGC-7901 cells(P<0.05). The 100 μmol/L naringenin only inhibited cell migratory capacity(P<0.05), but had no effect on adhesive and invasive capacities. ③Naringenin effectively down-regulated the mRNA and protein expression of MMP-2 and MMP-9(P<0.05), but had no effect on VEGF expression.ConclusionThese findings suggest that naringenin could inhibit the proliferative, adhesive, invasive and migratory capacities of SGC-7901 cellsinvitro, which may be related to the inhibition of the expression of MMP-2 and MMP-9.

naringenin;gastric cancer;SGC-7901 cell;cell proliferation;cell metastasis

國(guó)家星火計(jì)劃資助項(xiàng)目(2011GAB50001)

賈淼，女，1979-05生，本科，住院醫(yī)師，E-mail：xiaomao7954@sohu.com

2015-12-21

R735.2

A

1007-6611(2016)03-0218-06

10.13753/j.issn.1007-6611.2016.03.006