肝細胞生長因子、堿性成纖維細胞生長因子及血管源性生長因子在成人煙霧病不同階段的變化

吳凌峰 曹文鋒 屈新輝 任 玥 張昆南 吳曉牧,.江西省人民醫院神經內科，江西南昌 330006；江西省神經病學研究所，江西南昌 330006

肝細胞生長因子、堿性成纖維細胞生長因子及血管源性生長因子在成人煙霧病不同階段的變化

吳凌峰1曹文鋒1屈新輝1任 玥2張昆南1吳曉牧1,2
1.江西省人民醫院神經內科，江西南昌 330006；2江西省神經病學研究所，江西南昌 330006

目的 探討成人煙霧病不同階段中肝細胞生長因子（HGF）、堿性成纖維細胞生長因子（b-FGF）及血管源性生長因子（VEGF）的變化。 方法 回顧性分析2013年11月～2014年12月江西省人民醫院（以下簡稱“我院”）神經內科住院的行全腦血管造影檢查確診為煙霧病的41例患者臨床資料，根據Suzuki分期，8例患者為早期（Suzuki分期1～2期），17例為中期（Suzuki分期3～4期），16例為晚期（Suzuki分期5～6期），同時選擇在我院診治的40例腦動脈粥樣硬化患者為陽性對照，另選擇我院20例健康體檢者為正常對照。采用酶聯免疫吸附法（ELISA法）檢測上述人群血清中HGF、b-FGF及VEGF濃度。 結果 煙霧病早、中、晚期患者的HGF與動脈粥樣硬化患者、健康人比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。煙霧病晚期患者b-FGF與動脈粥樣硬化患者、健康人比較，差異有統計學意義（P＜0.05）煙霧病早期患者VEGF與動脈粥樣硬化患者、健康人比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。 結論 煙霧病的發生發展過程HGF、b-FGF及VEGF均有參與，但三者作用并不相同，HGF可能在煙霧病整個發生發展過程中均發揮作用，而b-FGF可能在煙霧病晚期發生發展中發揮了作用，VEGF則可能在煙霧病早期發生發展中發揮了作用。

煙霧?。桓渭毎L因子；堿性成纖維細胞生長因子；血管源性生長因子

側支循環是近年來國內外研究的熱點問題［1-2］，通過側支循環，可以維持病變血管的遠端血液供應，從而避免出現腦梗死，當側支循環好時，預后較好。故其在缺血性腦血管病的發生、發展、治療、預后中都起到了十分關鍵的作用，更為重要方面其還是一條可干預的途徑［3］。因此需要加強側支循環建立的基礎和臨床方面的研究，從而為缺血性腦血管病的治療開啟新的方向。煙霧病是一種以雙側頸內動脈末端及大腦前、中動脈起始部狹窄或閉塞，并在顱底有異常增生血管網的腦血管病［4］，其突出特征之一便是出現顱外向顱內代償的側支循環和新生的毛細血管網，其分別代表次級及三級側支循環。隨著病情的發展，新生的毛細血管網會發生不斷地變化，呈現出增生、旺盛及衰減的過程，而次級側支循環也會逐漸建立并起主要代償供血作用，是目前研究側支循環變化最好的途徑［5］。目前很多國內外研究已提示多種細胞因子在煙霧病患者中表達明顯增加［6-9］，其中，肝細胞生長因子（HGF）、堿性成纖維細胞生長因子（b-FGF）及血管源性生長因子（VEGF）最具有代表性［10］，但煙霧病毛細血管網的增生、旺盛和衰減的具體過程及次級側支循環變化與上述細胞因子的相關性尚不清楚，本研究探討HGF、b-FGF、VEGF）在成人煙霧病不同階段的變化，現報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2013年11月～2014年12月江西省人民醫院（以下簡稱“我院”）神經內科住院的行全腦血管造影檢查確診為煙霧病的41例患者臨床資料，其中男15例，女26例，平均年齡為（51.34±8.71）歲，上述患者行相關檢查排除相關疾病，同時行全腦血管造影檢查確診為煙霧病，影像學評判標準選擇Suzuki分期，2位神經內科醫師分別單獨進行判定，8例患者為早期（Suzuki分期1～2期），17例為中期（Suzuki分期3～4期），16例為晚期（Suzuki分期5～6期）。同時選擇在我院診治40例腦動脈粥樣硬化患者為陽性對照，另選擇我院20例健康體檢者為正常對照。所選健康對照人員均為血象、血生化、常規心電圖、胸片、腹部B超、經顱多普勒超聲檢查等上述檢查項目正常的健康成人。

煙霧病診斷標準：①頸內動脈（internal carotid artery，ICA）末端和/或大腦中動脈（middle cerebral artery，MCA）、大腦前動脈（anterior cerebral artery，ACA）起始端狹窄或閉塞；②其顱底可見煙霧狀異常血管網；③病變為雙側性。

腦動脈粥樣硬化診斷標準：①全腦血管檢查發現血管管腔有狹窄；②排外肌纖維發育不良等其他原因所致血管管腔變化。

煙霧病Suzuki分期的標準［11］：第1期，雙側頸內動脈末端分叉處狹窄。第2期，頸內動脈末端分叉處狹窄，ACA和MCA起始部狹窄并分支擴張，顱底有煙霧血管形成，但無顱外至顱內側支循環形成。第3期，ACA和MCA主要分支閉塞，煙霧血管非常明顯，形成煙霧血管團，但大腦后動脈（PCA）或后交通不受影響，仍無顱外至顱內側支循環形成。第4期，顱底煙霧狀血管開始減少，ICA閉塞已經發展到與后交通動脈的聯合處。從顱外到顱內的側支循環逐漸形成，或有異常增生的新生血管吻合支。第5期，從ICA發出的全部主要動脈完全閉塞，煙霧血管比第4期更少，從顱外到顱內的側支供血進一步增多。第6期，煙霧狀血管完全消失，ICA主干閉塞，僅見到從顱外進入顱內的側支循環。

1.2 檢測方法

煙霧病和動脈粥樣硬化組在入院后第2天，正常對照組在當天即采取空腹靜脈血6 mL，常溫放置30 min，以3000 r/min離心15 min，取血清并將其置于-70℃冰箱備檢。各組血清中HGF、b-FGF及VEGF濃度均采用酶聯免疫吸附法（ELISA法）檢測。檢測試劑盒采用武漢博士德生物工程有限公司，檢測步驟嚴格按操作說明書進行。

1.3 統計學方法

采用統計軟件SPSS 13.0對數據進行分析，正態分布計量資料以均數±標準差（±s）表示，兩組間比較采用t檢驗；多組間比較采用方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗。計數資料以率表示，采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 煙霧病患者、腦動脈粥樣硬化患者、健康人一般資料比較

煙霧病患者、腦動脈粥樣硬化患者、健康人的一般資料，煙霧病患者、腦動脈粥樣硬化患者危險因素比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

表1 煙霧病患者、動脈粥樣硬化患者、健康人一般資料比較［n（%）］

2.2 煙霧病患者、動脈粥樣硬化患者、健康人血清中HGF、b-FGF、VEGF比較

煙霧病早期、中期、晚期患者的HGF與動脈粥樣硬化患者、健康人比較，差異有統計學意義（P＜0.05），煙霧病早期、中期、晚期患者之間HGF相比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。煙霧病晚期患者b-FGF與其他各組比較，表達最為明顯，差異有統計學意義（P＜0.05），其余各組間b-FGF差異無統計學意義（P＞0.05）。煙霧病早期患者VEGF與其它各組比較，表達最為明顯，差異有統計學意義（P＜0.05），其余各組比較差異無統計學意義（P＞0.05）。見表2。

表2 煙霧病患者、動脈粥樣硬化患者、健康人血清中HGF、b-FGF、VEGF比較（ng/mL，±s）

表2 煙霧病患者、動脈粥樣硬化患者、健康人血清中HGF、b-FGF、VEGF比較（ng/mL，±s）

疾病 例數 HGF b-FGF VEGF煙霧病煙霧病早期煙霧病中期煙霧病晚期動脈粥樣硬化健康人41 8 17 16 40 20 4.65±0.86 4.75±0.98 4.52±0.81 4.74±0.91 4.08±0.43 4.02±0.33 0.22±0.10 0.16±0.03 0.18±0.09 0.30±0.11 0.19±0.03 0.17±0.05 0.51±0.05 0.76±0.14 0.47±0.04 0.42±0.04 0.49±0.38 0.46±0.07

3 討論

根據國內外相關研究報道［6-9］，HGF、b-FGF、VEGF均在煙霧病患者病變處的頸內動脈顱內段及其分支血管中層和增厚的內膜中廣泛表達，另外在患者腦脊液中檢測含量明顯增高，而正常對照組則未發現，表明這些相關病變組織中含有上述細胞因子，提示與煙霧病的發生發展有關。

煙霧病的病變血管不同于動脈粥樣硬化病變，其以內膜增厚為主要表現，從而造成了血管管腔變細、狹窄，直至閉塞，同時周圍逐漸出現新生毛細血管網，上述病理過程均與血管內皮細胞增生有相關性［12］。隨著病程的進展，新生毛細血管會逐漸衰減，而次級側支循環則起主要代償供血作用，根據這些影像學變化可行Suzuki分期，8例早期，17例中期，16例晚期，分別代表了不同的次級和三級側支循環變化階段。

HGF是一種很強的促血管再生因子［13-14］，它不僅促進血管的生成，而且可調節內皮細胞的生長、運動。本實驗揭示血清中HGF濃度在煙霧病各個階段均有明顯的升高，既使煙霧病后期毛細血管網減少時，HGF濃度仍未下降，提示其從始至終一直參與新生毛細血管網及次級側支循環的形成，可能是一種主要的促側支循環開放的細胞因子。

b-FGF在體內分布很廣，可誘導內皮細胞的遷移和增殖，并促進內皮細胞的黏附和形成血管腔［15］，臨床試驗也進一步證明其具有強大的血管再生作用［16］。本研究發現煙霧病晚期患者血清中b-FGF含量明顯增加，此時煙霧病變的血管閉塞達到最高峰，而新生毛細血管網已處于衰減期，但第二級側支循環逐漸出現并起主要作用，故推測其在煙霧病側支循環變化的后期病變中發揮了重要作用。

VEGF是一種血管生長因子，主要作用不但可刺激血管內皮細胞增生，調節細胞的生長，而且還可促進血管形成［17-19］，臨床試驗顯示通過特異性VEGF納米抗體能抑制血管的生長，反證其具有促進血管再生作用［20］。本研究提示煙霧病早期組血清中VEGF含量明顯增加，此時煙霧病患者病變血管尚處于病變早期，新生毛細血管處于增生期，推測其在煙霧病的側支循環早期的變化發揮了重要作用。

綜上所述，根據影像學分期和上述結果，HGF、b-FGF、VEGF均與煙霧病的側支循環變化發展有關，但HGF可能參與了煙霧病新生毛細血管網和次級側支循環建立的整個病變過程，煙霧病晚期次級側支循環增加時FGF可能起了作用，而煙霧病早期毛細血管網增殖過程中VEGF可能發揮了作用。由于本研究采用了血清學檢測，而非患者直接病變組織，另外所選擇樣本量少，有可能造成實驗的偏倚，今后將在需要進一步擴大樣本量進行研究。

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Changes of HGF，FGF and VEGF in different pathological stages of adult moyamoya disease

WU Lingfeng1CAO Wenfeng1QU Xinhui1REN Yue2ZHANG Kunnan1WU Xiaomu1,2
1.Department of Neurology，People's Hospital of Jiangxi Province，Jiangxi Province，Nanchang 330006，China；2.Institute of Neurology of Jiangxi Province，Jiangxi Province，Nanchang 330006，China

［Abtract］Objective To investigate the changes of hepatocyte growth factor（HGF），basic fibroblast growth factor（b-FGF）and blood vessels origin of growth factor（VEGF）in the different pathological stages of adult moyamoya disease （MMD）.Methods The clinical data of 41 patients with MMD were retrospectively analyzed from November 2013 to December 2014 in the People's Hospital of Jiangxi Province，all patients received examinations of Digital Subtraction Angiography，according to Suzuki diagnostic criteria，8 patients were early stage（Suzuki 1-2 stage），17 cases were middle stage（Suzuki 3-4 stage），16 cases were late stage（Suzuki 5-6 stage）.At same time，40 patients with cerebral atherosclerosis were selected as positive control，and 20 normal people were selected as normal control.HGF，b-FGF and VEGF concentration in serum measured by using enzyme-linked immunosorbent（ELISA）.Results HGF in the early，middle and late stage of MMD patients were compared to atherosclerosis patients and healthy persons，the differences were statistically significant （P＜0.05）.b-FGF in the late stage of MMD were compared with atherosclerosis patients and healthy persons，the differences were statistically significant（P＜0.05）.VEGF in the early stage of MMD were compared with atherosclerosis patients and healthy persons，the differences were statistically significant（P＜0.05）.Conclusion HGF，b-FGF and VEGF are involved in the development process of MMD，HGF may play a role in the whole development process in MMD，b-FGF may play a role at the late MMD developing，and VEGF may play a role in early development in MMD.

Moyamoya disease；Hepatocyte growth factor；Basic fibroblast growth factor；Blood vessels origin of growth factor

R743.3

A

1673-7210（2016）06（a）-0046-04

2016-03-01本文編輯：蘇 暢）

江西省衛生廳科技計劃（20141016）。

吳凌峰（1972-），男，博士，主任醫師；研究方向：腦血管病基礎與臨床研究。

吳曉牧（1958-），男，博士，主任醫師，教授，博士研究生導師；研究方向：腦血管病和神經免疫。