植物蛋白源抗氧化肽活性的評價方法及作用機制的研究進展

曹小舟,劉永祥,俞　凌,蘇安祥,沈新春

(南京財經(jīng)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院/江蘇省現(xiàn)代糧食流通與安全協(xié)同創(chuàng)新中心/江蘇高校糧油質(zhì)量安全控制及深加工重點實驗室,江蘇南京 210023)

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植物蛋白源抗氧化肽活性的評價方法及作用機制的研究進展

曹小舟,劉永祥,俞凌,蘇安祥,沈新春*

(南京財經(jīng)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院/江蘇省現(xiàn)代糧食流通與安全協(xié)同創(chuàng)新中心/江蘇高校糧油質(zhì)量安全控制及深加工重點實驗室,江蘇南京 210023)

植物蛋白源天然抗氧化肽由于具有良好的抗氧化性和較高的安全性,因而受到國內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注。本文綜述了植物蛋白源抗氧化肽抗氧化活性的評價方法和作用機制,為進一步開發(fā)制備植物蛋白源抗氧化活性肽提供研究借鑒。

植物蛋白源肽,抗氧化活性,評價方法,作用機制

抗氧化肽是指動物或植物蛋白經(jīng)過酶解和分離提取后得到,能夠抑制生物大分子過氧化或清除體內(nèi)自由基,具有一定抗氧化活性的肽段。與大分子的肽鏈蛋白質(zhì)相比,它可以顯示出更高的活性[1]。植物蛋白源抗氧化活性肽由于具有較強的抗氧化活性和較高的安全性,在抗氧化的基礎(chǔ)上可以保持原有的營養(yǎng)和功能特性,而且在不同的條件下可以保持較穩(wěn)定的活性。因此,在食品工業(yè)、飼料工業(yè)、化妝品工業(yè)和醫(yī)藥工業(yè)等眾多領(lǐng)域都展現(xiàn)出較高的行業(yè)應(yīng)用優(yōu)勢和廣泛應(yīng)用的潛在可能性,擁有非常廣闊的開發(fā)前景[2]。適當(dāng)?shù)臄z入抗氧化肽有助于清除機體過量的自由基,維持體內(nèi)的自由基平衡,提高機體對于疾病的抵抗能力,幫助機體延緩衰老。人工合成的一些抗氧化劑如BHT、BHA、PG、TBHQ等,它們作為一種添加劑被應(yīng)用于油脂及含油食品中,可以有效延緩或者阻止食品中蛋白質(zhì)變性或者油脂酸敗等,提高食品的穩(wěn)定性,但其對人體的脾、肝、肺存在某些安全危害[3];天然抗氧化劑如生育酚由于成本過高而存在應(yīng)用上的局限性。因此具有良好抗氧化性和較高安全性的植物蛋白源抗氧化肽是一個很好的選擇。目前,國內(nèi)外很多研究人員已從多種植物來源的蛋白質(zhì)中提取出了具有清除自由基、亞鐵離子螯合及抑制脂質(zhì)過氧化等具有抗氧化活性的肽類物質(zhì)[4-7]。它們能調(diào)整和改善人體的生理功能,達到預(yù)防和輔助治療糖尿病、肥胖癥和癌癥等慢性疾病的目的[8-9]。本文主要就植物蛋白源抗氧化肽活性的評價方法及其抗氧化機制進行了系統(tǒng)的綜述,以期為更好地評價和開發(fā)植物蛋白源抗氧化活性肽提供研究依據(jù)。

1　植物蛋白源肽的抗氧化活性評價方法

抗氧化肽的生產(chǎn)和來源方式主要分為以下三類:生物內(nèi)源性抗氧化肽、人工合成的抗氧化肽和酶解蛋白質(zhì)制備的抗氧化肽[10]。目前,制備抗氧化肽的方法主要有酸堿水解法、酶解法和發(fā)酵法[11],其中具有降解位點特異、快捷、可控、重復(fù)性高的酶解法[12]是最常用的方法。此外,酶解由于在比較溫和的條件下進行,可以很好的保存氨基酸的營養(yǎng)價值。因此,酶解蛋白質(zhì)制備抗氧化肽是目前抗氧化研究領(lǐng)域的一個熱點。隨著對抗氧化活性肽研究的不斷深入,目前已經(jīng)建立了多種評價抗氧化肽活性的方法。結(jié)合國內(nèi)外學(xué)者對于各類植物蛋白質(zhì)酶解產(chǎn)物以及多肽抗氧化性活性的研究,現(xiàn)有評價肽的抗氧化活性的常用方法主要有三類:體外化學(xué)法、細胞生物法、體內(nèi)動物實驗法。

1.1體外化學(xué)法

由于體外抗氧化活性測定方法操作簡便、高效低毒、便于重復(fù),該測定方法經(jīng)常作為體內(nèi)實驗的前期研究被廣泛使用。這種方法還可以分為兩大類:基于氫原子轉(zhuǎn)移(HAT)和電子轉(zhuǎn)移(ET)的反應(yīng)。

基于氫原子轉(zhuǎn)移的抗氧化性活性測定方法主要是通過動力學(xué)曲線來定量分析其抗氧化能力,側(cè)重于檢測抗氧化劑通過提供氫原子從而捕獲自由基的能力。反應(yīng)機制為:X·+AH→ XH+A·。在亞油酸體系中的抗氧化能力、氧自由基吸收能力(ORAC)、總自由基捕獲抗氧化參數(shù)(TRAP)等測定方法都屬于此類方法[13]。

基于電子轉(zhuǎn)移的抗氧化測定方法則是通過反應(yīng)物顏色的變化來反應(yīng)其抗氧化能力,側(cè)重于檢測抗氧化劑通過轉(zhuǎn)移電子達到還原一些組分的能力,這些組分包括羧基、自由基、金屬等[14]。反應(yīng)機制為:X·+AH → X-+AH+·。常見的方法有測定還原能力、測定羥自由基、超氧陰離子自由基、ABTS自由基、DPPH自由基的清除能力[13]。

1.2細胞生物法

部分體外化學(xué)法測定肽的抗氧化性是在非生理溫度和pH的條件下,然而生物體內(nèi)的氧化過程極其復(fù)雜,因而導(dǎo)致在采用體外化學(xué)法評價抗氧化肽活性時,顯示較高的抗氧化活性肽未必在生物體內(nèi)也能取得良好的抗氧化效果。因此,所測定的抗氧化肽在生物體中的應(yīng)用具有一定的局限性。細胞生物法可以提供吸收、新陳代謝等一系列生理功能的有效評價,已經(jīng)成為目前研究生物活性肽的抗氧化活性和抗氧化機制的主流趨勢。

Huang等[19]建立用H2O2誘導(dǎo)HepG2細胞氧化損傷模型,證實了甘薯蛋白SPD1可以通過減少HepG2細胞內(nèi)過氧化氫的產(chǎn)生來發(fā)揮抗氧化活性;魏穎等[20]用油酸誘導(dǎo)的HepG2細胞模型評價玉米低聚肽對脂肪累積的影響,發(fā)現(xiàn)玉米低聚肽富含小肽段組分,對肝細胞的脂肪累積和抗氧化具有較好的預(yù)防保護作用;Zheng等[21]研究了脫脂花生粕蛋白對處于H2O2誘導(dǎo)下的PC12細胞的保護能力,研究發(fā)現(xiàn)花生粕蛋白能夠提高細胞內(nèi)谷胱甘肽過氧化物酶和超氧化物歧化酶的活性,并且能夠抑制細胞內(nèi)脂質(zhì)的過氧化來發(fā)揮抗氧化作用,證明花生粕抗氧化肽可以提高細胞在過氧化氫條件下的存活率;Lu等[22]用DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)PC12細胞來測定抗氧化肽對處于過氧化氫環(huán)境下的PC12細胞的保護能力。研究發(fā)現(xiàn):通過堿性蛋白酶酶解大麻籽抗氧化肽得到的抗氧化肽序列HVRETALV,與空白對照組相比,當(dāng)其濃度為10 μg/mL時,細胞在過氧化氫環(huán)境下的存活率提高到了60%;梁盈等[23]通過H2O2誘導(dǎo)建立的HUVEC細胞氧化損傷模型,采用MTT和熒光顯微鏡觀察,從細胞水平深入研究大米抗氧化活性肽,發(fā)現(xiàn)大米活性肽對H2O2損傷的HUVEC有一定的保護作用;樊金娟等[24]以大鼠紅細胞為研究模型,證明了米糠抗氧化肽能抑制紅細胞及肝組織自氧化產(chǎn)生的MDA和由H2O2誘導(dǎo)產(chǎn)生的MDA,抑制率為41%～60%;而且能夠有效抑制血紅蛋白氧化反應(yīng)和紅細胞溶血,抑制率為50% 左右,表明米糠抗氧化肽對大鼠紅細胞和血紅蛋白的氧化損傷具有保護作用;Garcia等[25]建立以H2O2和t-BOOH為氧化誘導(dǎo)劑的Caco-2細胞為模型,從細胞水平上研究了大豆抗氧化肽對氧化應(yīng)激狀態(tài)下細胞的保護作用,發(fā)現(xiàn)大豆肽主要通過清除過多的ROS來發(fā)揮對氧化損傷細胞的保護作用。

細胞生物法通過吸收、新陳代謝等一系列生理功能既可以方便的得出抗氧化肽的生物活性和利用性,又能研究其作用機制,很好的彌補了體外化學(xué)法的局限性;同時也可以彌補體內(nèi)動物實驗法成本高、耗時長的缺陷。但在相關(guān)的研究中,經(jīng)常采用腫瘤細胞來構(gòu)建細胞氧化損傷模型。由于腫瘤細胞內(nèi)內(nèi)源性的活性氧含量較高,可能會對實驗結(jié)果造成一定的影響,不能真實反映活性肽的抗氧化機制。

1.3體內(nèi)動物實驗法

相比細胞生物法,體內(nèi)動物實驗法是建立在生理學(xué)、毒理學(xué)及病理學(xué)的基礎(chǔ)上,采用生化技術(shù)對實驗動物進行各項指標(biāo)測試,測定結(jié)果可以更加準(zhǔn)確有效的評價抗氧化肽在生物體內(nèi)的抗氧化作用。因此,很多研究學(xué)者也通常采用這種評價方法來檢驗抗氧化肽對蛋白質(zhì)和脂質(zhì)的保護作用。大鼠或者小鼠常被作為實驗的研究對象。通過建立有效的動物模型,測定血漿、腦、肝臟、心臟等組織的相關(guān)指標(biāo),如抗氧化酶(超氧化物歧化酶SOD、過氧化氫酶CAT、乳酸脫氫酶LDH、谷胱甘肽過氧化物酶GSH-Px等)的活性、脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙二醛MDA的含量,以進一步在生理代謝水平上驗證和評價抗氧化肽的抗氧化能力。

王莉娟等[26]用D-半乳糖建立小鼠衰老模型,給予不同濃度的大豆抗氧化肽進行灌胃處理,考察了大豆抗氧化肽對實驗小鼠腦指數(shù)、心指數(shù)、肝指數(shù)、脾指數(shù)、腎指數(shù)的變化。通過測定小鼠血清中MDA的含量,SOD的活力;小鼠腦、肝組織中MDA的含量,SOD、GSH-Px、CAT的活力,發(fā)現(xiàn)大豆抗氧化肽可以提高衰老小鼠血清中SOD活力、降低MDA含量;降低衰老小鼠肝、腦組織MDA含量;提高肝、腦組織SOD活力、GSH-Px、CAT活力。Yin等[27]發(fā)現(xiàn)用小麥抗氧化肽喂飼由非甾體抗炎藥(NSAIDs)誘導(dǎo)的大鼠胃組織損傷和氧化應(yīng)激模型時,能提高超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)的活性,降低非甾體抗炎藥誘發(fā)的胃上皮細胞變性、氧化應(yīng)激和NO的水平。黃慧明等[28]采用注射溴代苯的方法誘導(dǎo)建立過氧化肝組織損傷小鼠模型,通過測定模型小鼠肝組織和血中的脂質(zhì)過氧化物含量和過氧化物酶(超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過氧化物酶)的活性來鑒定蠶絲蛋白肽的抗氧化功能。結(jié)果表明,蠶絲蛋白肽具有明顯的抗氧化作用,其抗氧化作用途徑之一就是提高抗氧化酶活力,降低脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙二醛的含量。朱艷華等[29]通過測定由FeSO4與H2O2誘導(dǎo)大鼠肝勻漿產(chǎn)生的MDA的含量,發(fā)現(xiàn)玉米抗氧化肽能抑制自由基誘導(dǎo)的大鼠肝線粒體腫脹,使大鼠肝線粒體腫脹度低于對照組,且劑量關(guān)系明顯,表明其具有保護大鼠肝線粒體氧化損傷的作用。王才立等[30]通過D-半乳糖建立小白鼠氧化損傷模型,利用超濾和納濾技術(shù)對通過復(fù)合酶法制備的小麥胚芽多肽進行分級分段和純化后,得到的不同分子量的麥胚抗氧化肽進行體內(nèi)抗氧化活性的評價,實驗結(jié)果表明:小麥胚芽多肽能夠使小鼠血清和肝臟中SOD、GSH-Px以及T-AOC的指標(biāo)升高,降低小鼠血清和肝臟中脂質(zhì)過氧化物的MDA含量,具有良好的抗氧化活性。總體來說,隨著多肽質(zhì)量濃度的升高,抗氧化活性也隨之增強,分子量在2000 u以下的小麥胚芽多肽具有較強的抗氧化活性。

2　植物蛋白源肽抗氧化作用機制的研究

越來越多的研究表明,氧化應(yīng)激在多種疾病的發(fā)生和發(fā)展中都扮演著重要的角色。抗氧化肽雖然對多種疾病顯示出了一定的預(yù)防和輔助治療作用,但其抗氧化機制還有待深入研究。隨著人們對抗氧化活性肽研究的不斷深入,闡明其抗氧化作用機制也成為了亟需解決的問題。從目前的研究結(jié)果來看,主要從以下幾個方面對抗氧化肽發(fā)揮抗氧化作用的機制進行探討。

2.1抑制自由基機制

生理代謝過程中所產(chǎn)生的自由基在機體內(nèi)扮演著多種功能,如信號傳導(dǎo)、預(yù)防感染等[31-33]。然而機體內(nèi)過多的活性自由基反過來會導(dǎo)致正常的細胞組織出現(xiàn)損傷,引發(fā)動脈粥樣硬化、糖尿病及癌癥等多種疾病[34-35]。目前的研究普遍認為,抗氧化活性肽主要通過兩條途徑來清除自由基:一條是通過螯合金屬離子來降低Fenton反應(yīng)的速率,進而減少羥自由基的數(shù)量;另一條則是通過抗氧化活性肽的抽氫反應(yīng)生成穩(wěn)定的自由基,中斷自由基的鏈?zhǔn)椒磻?yīng)[36]。

Niranjan等[37]研究表明:當(dāng)植物抗氧化肽的N端為疏水性氨基酸,比如纈氨酸(Val)或者亮氨酸(Leu),其抗氧化活性較高,可能是由于疏水性氨基酸的作用讓抗氧化活性肽與脂肪酸之間的相互作用增強,導(dǎo)致抗氧化活性肽對自由基的捕捉能力增加。通過捕捉自由基反應(yīng)鏈的過氧化自由基,阻止或減弱自由基鏈反應(yīng)的進行。徐力[38]等通過堿性蛋白酶水解玉米蛋白得到的抗氧化肽序列Leu-Asp-Tyr-Glu,因為Tyr具有酚羥基結(jié)構(gòu),能提供質(zhì)子猝滅自由基,與Tyr鄰近的Asp和Glu的羧酸根具有吸電子作用,使Tyr酚羥基上氧電子云密度減弱,更有利于質(zhì)子的釋放,增強了Tyr的質(zhì)子供體效應(yīng)。此外,玉米抗氧化肽的N-端為疏水性氨基酸Leu,使抗氧化肽與脂肪酸的相互作用增強,提高了其對脂質(zhì)自由基的捕捉能力。

Nrf2-Keap1信號通路是機體抗氧化的重要途徑之一,Nrf2通過調(diào)節(jié)下游抗氧化酶基因的表達和GSH的合成清除機體中的自由基等活性氧,保證氧化還原系統(tǒng)平衡,防止DNA受到損傷[39-42]。郭鈺潔等[43]用鷹嘴豆生物活性肽處理由H2O2誘導(dǎo)的Caco-2細胞和HT-29細胞,發(fā)現(xiàn)Nrf2-Keap1信號通路中的Nrf2及下游的抗氧化酶NQO1、HO-1 和γ-GCS的mRNA表達量增多,Nrf2、NQO1、HO-1和γ-GCS的蛋白表達量也增多。其抗氧化機理可能是鷹嘴豆生物活性肽引起Nrf2與Keap1發(fā)生解離,Nrf2進入到細胞核,與ARE的特異識別位點GCTGAGTCA進行結(jié)合,啟動ARE調(diào)控的NQO1、HO-1和γ-GCS基因表達。NQO1表達量的增多可以維持內(nèi)源抗氧化物的還原性;HO-1表達量增多能夠產(chǎn)生更多的膽紅素,而膽紅素具有很強的抗氧化性;γ-GCS 能夠促進GSH的產(chǎn)生。在這些抗氧化酶的作用下,氧化應(yīng)激被抑制,多余的ROS得以清除,最終實現(xiàn)機體氧化還原狀態(tài)的平衡。

2.2抑制抗氧化防御系統(tǒng)機制

在正常條件下,生物機體會不斷的生成自由基,同時也存在著由內(nèi)源性抗氧化劑(谷胱甘肽等)和抗氧化酶(超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶和過氧化物酶等)組成的防御系統(tǒng),用于維持自由基的代謝平衡正常,使得機體內(nèi)自由基的產(chǎn)生與清除處于動態(tài)平衡狀態(tài)。然而,當(dāng)內(nèi)源性或外源性刺激促使機體內(nèi)自由基產(chǎn)生過多導(dǎo)致抗氧化酶活性降低時,就會對DNA、RNA、蛋白質(zhì)以及脂質(zhì)等造成過氧化損傷引起細胞功能障礙[44]。通過在體外建立細胞氧化損傷模型,測定抗氧化活性肽對細胞中CAT、GSH-Px等酶含量的變化情況,可以明確抗氧化活性肽保護細胞可以免受自由基的氧化損傷的機制。Zhu等[45]建立由H2O2誘導(dǎo)的PC12細胞模型,發(fā)現(xiàn)麥胚抗氧化肽通過提高PC12細胞的存活率和細胞內(nèi)CAT、SOD的水平,抑制線粒體膜電位的降低和細胞內(nèi)Ca2+的積累,可以有效抑制由氧化應(yīng)激造成的細胞損傷。范金波等[46]通過H2O2誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細胞損傷,發(fā)現(xiàn):絲膠抗氧化肽通過提高細胞中總抗氧化能力、SOD、CAT 和GSH-Px酶水平以及細胞的NO水平;來發(fā)揮其對細胞免受損傷的保護作用,而且存在劑量依賴關(guān)系。

2.3抑制脂質(zhì)過氧化機制

氧自由基反應(yīng)和脂質(zhì)過氧化反應(yīng)在機體的新陳代謝過程中扮演著極其重要的作用。在正常情況下,兩者處于協(xié)調(diào)與動態(tài)平衡狀態(tài),維持著體內(nèi)許多生理生化反應(yīng)和免疫反應(yīng)。但是,當(dāng)這種協(xié)調(diào)與動態(tài)平衡產(chǎn)生紊亂或者失調(diào)時,就會引起脂質(zhì)過氧化,形成脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物,如丙二醛(Malonaldehyde,MDA)和4-羥基壬烯酸(4-hydroxynonenal,HNE)等?？寡趸钚噪牡目寡趸钥梢酝ㄟ^測定脂質(zhì)過氧化而得到體現(xiàn)[47]。抑制脂質(zhì)過氧化的測定方法主要有硫代巴比妥酸法、共輒亞油酸體系測定法和電子自旋共振法[48-49],這三種方法均可用于檢測活性肽是否可抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng),從而進一步了解其抗氧化機制。Zhu[45]等發(fā)現(xiàn)小麥胚芽抗氧化肽能夠通過降低過氧化氫誘導(dǎo)的PC12細胞內(nèi)的MDA的作用,發(fā)揮其抗氧化作用。Xie[50]等建立小鼠肝損傷模型評價了決明子多肽的抗氧化活性,證明了其抗氧化機制與降低細胞內(nèi) MDA 的水平有關(guān)。林金鶯[51]等以火麻仁種仁為原料,通過分步酶解和枯草芽孢桿菌液體發(fā)酵兩種方法對火麻仁蛋白質(zhì)進行了水解,最后采用飛行離子色譜鑒定得到了具有很明顯抑制脂肪過氧化的能力的純化酶解多肽:Phe-Leu-Lys-Leu-Thr-Ala-Glu-Arg和純化發(fā)酵多肽:Arg-Ser-Arg-Lys-Gly-Phe-Glu-Trp-Leu-Arg-Val-Lys,其抗氧化機制主要是肽序列中的堿性氨基酸(賴氨酸和精氨酸)可與不飽和脂肪酸反應(yīng)生成鹽,從而可抑制不飽和脂肪酸的氧化反應(yīng)的發(fā)生。

3　展望

目前,盡管國內(nèi)外學(xué)者對于植物源抗氧化活性肽已經(jīng)做了很多的研究,越來越多的抗氧化活性肽序列片段被分離鑒定出來,但仍然有很多問題亟需解決:一些已發(fā)現(xiàn)的抗氧化活性肽序列,其活性僅僅只在體外實驗和細胞實驗中被證實,還缺乏通過動物模型進一步從機體內(nèi)進行更加深入的研究,在分子營養(yǎng)學(xué)水平上明確抗氧化肽在體內(nèi)的抗氧化作用機制,例如,通過哪種信號通道發(fā)揮其抗氧化作用等更深層次的作用機制;抗氧化肽的分離制備技術(shù)由于成本高、耗時耗力、而且蛋白回收率不高等缺點在一定程度上阻礙了抗氧化肽的商品化進程,探索新型快速并能大規(guī)模從植物源蛋白中制備抗氧化活性肽的方法迫在眉睫;針對新發(fā)現(xiàn)的抗氧化活性肽序列,還未能進一步進行構(gòu)效關(guān)系和分子修飾等方面的研究;抗氧化肽作為功能性食品或藥品,最終都要通過攝入體內(nèi)發(fā)揮其功效。從體外篩選出的抗氧化活性肽還需研究在消化過程中的降解規(guī)律以及其胃腸穩(wěn)定性是否遭到破壞。隨著研究的深入和生物技術(shù)的快速發(fā)展,這些問題都會被一一解決,從而為抗氧化活性肽的應(yīng)用打開更加廣闊的空間。

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Progress in evaluation methods and action mechanism of antioxidant activity for plant protein-derived peptides

CAO Xiao-zhou,LIU Yong-xiang,YU Ling,SU An-xiang,SHEN Xin-chun*

(College of Food Science and Engineering/Collaborative Innovation Center for Modern Grain Circulation and Safety/Key Laboratory of Grains and Oils Quality Control and Processing,Nanjing University of Finance and Economics,Nanjing 210023,China)

Natural,safe,and efficient antioxidant peptides derived from many plant proteins have received much attentions from researchers at home and abroad. The evaluation methods and the molecular mechanism of antioxidant activity for plant protein-derived peptides were summarized in the present review,which will shed some lights on the further development and utilization of antioxidant peptides derived from plant proteins.

plant protein-derived peptides;antioxidant activity;evaluation methods;mechanism

2015-12-16

曹小舟(1991-)，女，碩士研究生，研究方向：農(nóng)產(chǎn)品深加工與副產(chǎn)品綜合利用，E-mail：15951912672@163.com。

沈新春(1966-)，男，博士，教授，研究方向：農(nóng)產(chǎn)品深加工與副產(chǎn)品綜合利用、分子營養(yǎng)，E-mail：shenxinchun@njue.edu.cn。

國家自然科學(xué)基金項目(31271983)；江蘇省自然科學(xué)基金(BK20141484)；江蘇省高校自然科學(xué)研究重大項目(14KJA550002)；2015年度江蘇省高校優(yōu)秀科技創(chuàng)新團隊；江蘇高校優(yōu)勢學(xué)科建設(shè)工程資助項目。

TS210.9

A

1002-0306(2016)13-0355-06

10.13386/j.issn1002-0306.2016.13.065