青龍衣提取物的抗真菌和抗腫瘤活性研究

段燕玲,魏曉璐,任先偉,劉　麗,馮　悅,夏雪山

(昆明理工大學 生命科學與技術學院,云南昆明 650500)

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青龍衣提取物的抗真菌和抗腫瘤活性研究

段燕玲,魏曉璐,任先偉,劉麗*,馮悅,夏雪山

(昆明理工大學 生命科學與技術學院,云南昆明 650500)

將青龍衣乙醇提取物用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇四種不同極性的有機溶劑依次萃取,以4種玉米主要病原真菌和2種腫瘤細胞對青龍衣提取物進行抗真菌和抗腫瘤活性研究。結果表明:乙醇提取物及其不同極性萃取相對供試病原真菌和腫瘤細胞均有一定的抑制作用。其中青龍衣乙醇提取物對玉米穗腐菌、玉米黑粉菌、玉米彎孢菌和玉米紋枯菌等真菌的抑菌率分別為92.5%、86.0%、83.2%、50.0%,乙酸乙酯萃取相的抑菌效果最好,其EC50分別為7.354、9.546、10.341和96.532 mg/mL;MTT比色法實驗表明:不同萃取相對Hela細胞和Huh7.5.1細胞的抑制呈現劑量-效應關系,其中石油醚萃取相對兩種細胞的抑制效果最明顯,其對Hela和Huh7.5.1細胞的IC50分別為124.99 μg/mL和45.33 μg/mL,并可誘導Huh7.5.1細胞凋亡。說明青龍衣提取物對玉米穗腐菌、玉米黑粉菌、玉米彎孢菌、玉米紋枯菌和Hela細胞、Huh7.5.1細胞均有抑制作用,具有劑量依賴性。

青龍衣提取物,抑菌活性,抗腫瘤活性

青龍衣是核桃殼外部一層厚厚的未成熟綠色果皮[1],據《本草綱目》記載,青龍衣具有良好的止痛功效。早在20世紀50年代期間,我國民間就用青龍衣泡酒劑治療胃痛、痛經、癌癥痛等,用來代替阿片酊、嗎啡等止痛藥。現代化學和藥理學研究證明,青龍衣中主要是胡桃醌、黃酮類、鞣花酸和核桃多糖等有效活性成分發(fā)揮藥理作用,其中胡桃醌在青龍衣中發(fā)揮著主要的毒性作用,具有顯著的抑菌和抗癌作用[2-5]。

玉米穗腐菌、玉米黑粉菌、玉米彎孢菌和玉米紋枯菌都是玉米易染的主要病原真菌[6-9],常導致玉米發(fā)生嚴重的真菌病害,對玉米的產量和品質產生嚴重影響,防治玉米病害是當前農業(yè)生產亟待解決的問題。惡性腫瘤對人類健康的影響是當今醫(yī)學界的一大難題,其造成的死亡率是城市人口死亡率的1/4,從各種植物中開發(fā)出新型有效的抗腫瘤藥物是國內外科學家的重要任務。青龍衣作為核桃產業(yè)的副產品,大量被丟棄在田間地頭,造成了嚴重的資源浪費,如何充分發(fā)揮其藥效,將其運用于農業(yè)生產和醫(yī)藥行業(yè),是目前國內外研究的熱點。

本研究用乙醇對青龍衣中的活性物質進行初提取,并用4種不同極性有機溶劑對醇提物進行萃取,以4種玉米病原真菌和2種腫瘤細胞對青龍衣提取物進行抑菌抗腫瘤活性研究,為青龍衣的綜合開發(fā)利用提供理論依據。

1　材料與方法

1.1材料與儀器

青龍衣采自云南臨滄核桃產區(qū),清洗自然晾干后,粉碎過100目篩,密封儲存?zhèn)溆谩?/p>

DMEM培養(yǎng)液、胎牛血清(FBS)GIBCO公司;胰蛋白酶Invitrogen公司;青鏈霉素、溴化四氮唑藍(MTT)Sigma公司;羥基喜樹堿(HCPT)哈爾濱圣泰藥業(yè)公司;十二甲基亞砜(DMSO) Amresco公司,分析純;乙醇、石油醚、正丁醇、乙酸乙酯、丙酮、氯仿等試劑均為分析純天津博迪化工有限公司。

供試玉米病原真菌 玉米紋枯菌RhizotoniasolaniKuhn、玉米黑粉菌Ustilagomaydis、玉米彎孢菌Curvularialunata、玉米穗腐菌Fusariumgraminearum由云南農業(yè)大學提供。

供試細胞株人肝癌細胞Huh7.5.1,人宮頸癌細胞Hela來源于昆明理工大學分子病毒學課題組。

培養(yǎng)基真菌用馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA培養(yǎng)基),細胞用DMEM培養(yǎng)液。

Q-250B粉碎機廣州市旭朗機械設備有限公司;RE1002旋轉蒸發(fā)儀、RE300B高壓真空泵、RE1002旋轉蒸發(fā)儀水浴槽上海科升儀器有限公司;XFH-40CA高溫高壓滅菌鍋湟中東山建材開發(fā)有限公司;HH-1恒溫水浴鍋常州賽普實驗儀器廠;TS-100C恒溫搖床金壇市精達儀器制造有限公司;MJ-160B-II型真菌培養(yǎng)箱上海博泰實驗設備有限公司;LRH-70F恒溫生化培養(yǎng)、AllEGRA X-15R高速冷凍離心機河南兄弟儀器設備有限公司;BHC-1300IIB2超凈工作臺蘇州蘇潔凈化設備公司;DW-86l828超低溫冰箱蘇州柏兆科學儀器有限公司;Scientz-18SN冷凍干燥機上海市茸研儀器有限公司;BC-J160SCO2恒溫恒濕細胞培養(yǎng)箱上海博迅實業(yè)有限公司;Leica倒置熒光顯微鏡河北光學儀器制造有限公司;BECKMAN Avanti J-26XP高速冷凍離心機貝克曼庫爾特商貿(中國)有限公司;Bio-Rad680酶標儀上海麥莎生物科技有限公司。

1.2實驗方法

1.2.1青龍衣提取物制備采用目前大多數相關研究所采用的有機提取法和不同極性有機溶劑萃取法,用85%的乙醇作為提取溶劑,將青龍衣干粉按照1∶5的質量(g)體積(mL)比于37 ℃150 r/min搖床浸提4次,合并濾液減壓濃縮成浸膏。取部分浸膏用50%丙酮溶液配制成濃度500 mg/mL的待測液。將剩余部分浸膏用水溶解,依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇按1∶1的體積比各萃取3次,合并萃取液減壓濃縮得各萃取相的浸膏,用50%丙酮溶液分別溶解配制成100 mg/mL的待測液,再稀釋為不同濃度的待測液。

1.2.2抑制活性檢測

1.2.2.1不同萃取相待測液對4種玉米病原真菌的抑制作用病原真菌抑制實驗采用菌絲生長速率法[10]。將待測液100 μL與800 μL無菌水混勻后加入9 cm培養(yǎng)皿中,加入10 mL PDA培養(yǎng)基,混勻、冷卻凝固,制成帶毒培養(yǎng)基。陰性對照為相應濃度的溶劑,陽性培養(yǎng)基含50 mg/mL的放線菌酮。對照及每個濃度的處理設3個重復。待平板凝固后,接入生長一致的菌餅(Φ=9 mm),于30 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3 d,用十字交叉法測量菌落直徑,然后按下式計算生長抑制率[11]。

純生長量=菌落平均直徑-菌餅直徑

抑菌率(%)=[(對照純生長量-處理純生長量)/對照純生長量]×100

1.2.2.2乙酸乙酯萃取相對4種玉米病原真菌生長抑制作用的毒性測定將篩選出的有機萃取相配制成不同濃度的供試液,以四種病原真菌為供試菌,測定其對菌絲生長的抑制率。參照機率值換算表,將菌絲生長抑制率換算成機率值。將不同濃度的對數值作為橫坐標,將抑菌機率值作為縱坐標,應用最小二乘法計算最佳有機萃取相的毒力回歸方程以及半數效應濃度(EC50)。

使用Excel工具作圖,用SPSS統計學軟件對實驗數據進行Duncan多重差異分析,采用Finney 機率分析法進行毒力回歸分析。

1.2.2.3MTT法篩選青龍衣各萃取相的抗腫瘤活性取對數生長期的細胞,用0.25%胰酶消化,800 r/mim離心5 min,血球計數板計數后,調整細胞濃度為1×105cells/mL,以每孔100 μL的接種量接種于96孔板中。在37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12 h后,加入用無血清培養(yǎng)基梯度稀釋的6個濃度的青龍衣萃取物100 μL/孔,使每孔終體積為200 μL。每一濃度做三個重復,同時設細胞對照組(不含藥物)、藥物顏色對照(不含細胞)。對于Hela細胞,孔中最終藥物濃度為300、60、12、2.4、0.48、0.098 μg/mL;對于Huh7.5.1細胞,孔中最終藥物濃度為300、150、75、37.5、18.75、9.375 μg/mL,陽性藥HCPT的濃度分別為0.01、0.1、l、10、100 μg/mL。將96孔板置于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72 h后,于實驗孔中加入20 μL的5 mg/mL MTT溶液,37 ℃、5% CO2繼續(xù)培養(yǎng)4 h。使用針頭注射器小心吸棄上清,每孔加入150 μL DMSO,在微型振蕩器上振蕩10 min后,用酶標儀測定OD 490 nm值,并按下式計算生長抑制率,軟件Graphpad Prism 5計算藥物半抑制濃度(IC50)。

細胞生長抑制率(%)=[1-(實驗孔OD值/對照組OD值)]×100

1.2.2.4Hoechst 33342染色觀察凋亡細胞形態(tài)將對數生長期的細胞按1×105cells/mL的密度、每孔100 μL的接種量接種于96孔板中,在37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12 h后,加入供試藥物繼續(xù)培養(yǎng)72 h。細胞固定化后,依次加入100 μL的1×Apollo染色反應液,避光、室溫脫色搖床孵育30 min,棄反應液;100 μL滲透劑(0.5% TritonX-100的PBS)脫色搖床清洗3次,每次10 min,棄滲透劑;100 μL甲醇清洗2次,每次5 min;PBS清洗5 min。加入100 μL 1×Hoeches 33342反應液,室溫孵育30 min,棄染色反應液,每孔每次加入100 μL PBS清洗3次,于熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。

表1　青龍衣乙醇提取物對4種玉米病原真菌的抑制效果

2　結果與分析

2.1青龍衣乙醇提取物對4種玉米病原真菌的抑制作用

在供試濃度為干樣500 mg/mL時,青龍衣乙醇提取物對4種供試玉米病原真菌都具有不同程度的抑制作用(表1),對玉米穗腐菌、玉米黑粉菌和玉米彎孢菌3種真菌有較好的抑制效果,抑菌率均在80%以上。其中對玉米穗腐菌的抑制效果最好,抑菌率為92.5%,對玉米黑粉菌和玉米彎孢菌的抑制作用次之,抑菌率分別為86.0%和83.2%,對玉米紋枯菌抑制效果最差,抑制率為50.0%。青龍衣乙醇提取物不僅對玉米病原真菌表現出良好的抑制效果,丁存寶[12]等人也研究證實,青龍衣提取物對酵母菌等真菌有抑制效果,表明它在抑菌防腐劑領域有巨大的開發(fā)利用潛力。

2.2青龍衣乙醇提取物不同極性萃取相對4種玉米病原真菌的抑制作用

不同極性萃取相對4種玉米病原真菌的抑制效果見圖1,各萃取相對4種病原真菌均有一定的抑制作用。對玉米穗腐菌、玉米紋枯菌、玉米黑粉菌的抑制作用大小依次為:乙酸乙酯相>石油醚相>氯仿相>正丁醇相,對玉米彎孢菌的抑制作用大小為乙酸乙酯相>氯仿相>正丁醇相>石油醚相,各相對4種真菌的抑制效果與供試相濃度呈正相關。各萃取相對不同病原真菌的抑制效果作用不同,有一定的選擇性。50 mg/mL時濃度時,乙酸乙酯相對4種病原真菌均有較好的抑制作用,抑制率依次為90.24%、87.19%、46.32%、83.94%;石油醚相對玉米穗腐菌的抑制效果最好,抑制率達88.77%;氯仿相、正丁醇相對玉米彎孢菌表現出最佳抑制效果,抑制率分別達到88.12%和64.15%。

青龍衣醇提物各萃取相的抑菌效果顯著大于醇提物的抑菌效果,說明經過不同極性有機溶劑萃取后,有抑菌活性的物質得以富集在不同極性部位,為分離純化相應的活性物質奠定了理論基礎。經過四種不同極性有機溶劑萃取得到的各相對不同植物病原菌的抑制效果有較大的差異,可能是因為不同植物病原菌生長所需的生長要素以及代謝方式不同,不同極性萃取液中有生物活性的化學成分也可能存在差異。

圖1　不同萃取相對4種病原真菌的抑制效果Fig.1　Antifungal activities for differentextract against 4 corn pathogenic fungi注:A、B、C、D依次代表不同萃取相對玉米穗腐菌、玉米彎孢菌、玉米紋枯菌、玉米黑粉菌的抑制效果。

2.3乙酸乙酯萃取相對4種玉米病原真菌的抑制作用

從圖1可以看出,不同濃度乙酸乙酯萃取相的處理對玉米穗腐菌、玉米彎孢菌和玉米黑粉菌3種菌在所有處理濃度的抑制率差異為極顯著,對玉米紋枯菌在3.125 mg/mL和6.25 mg/mL的抑制率差異不顯著。

各濃度乙酸乙酯相對玉米彎孢菌和玉米黑粉菌的抑制效果不相上下,對玉米紋枯菌的抑制率不到50%,均小于其他3種菌,說明玉米紋枯菌為最耐藥菌。在6.25 mg/mL以上各濃度作用下,對4種菌的抑制作用由大到小依次為:玉米穗腐菌>玉米黑粉菌和玉米彎孢菌>玉米紋枯菌;6.25 mg/mL濃度作用下,對玉米穗腐菌、玉米黑粉菌和玉米彎孢菌的抑制效果相當,幾乎沒有差別,均強于玉米紋枯菌;而3.125 mg/mL濃度作用下卻是對玉米黑粉菌的抑制作用大于其他3種菌。所以乙酸乙酯萃取相在6.25 mg/mL以上的濃度時對各菌發(fā)揮較強的抑菌作用。

從表2可以看出,乙酸乙酯萃取相對4種玉米病原真菌都有較好的毒力,其EC50為7.35～96.53 mg/mL。其對玉米穗腐菌、玉米黑粉菌和玉米彎孢菌具有較好的抑制效果,EC50分別為7.354、9.546和10.341 mg/mL,對玉米紋枯菌抑制效果最差,EC50為96.532 mg/mL。

表2　乙酸乙酯萃取相對4種玉米病原真菌菌絲生長抑制作用的毒力測定結果

青龍衣乙醇提取物乙酸乙酯萃取相的抑制效果優(yōu)于石油醚、氯仿和正丁醇萃取相,說明對供試真菌起抑制作用的活性部位主要集中在偏中等極性的部位中。有學者從青龍衣醇提物的乙酸乙酯相中分離得到黃酮類化合物、酚類化合物和鄰苯二甲酸酯類化合物,這些化合物對以上4種玉米病原真菌的抑制效果如何,有待深入研究。

2.4青龍衣各萃取相對Hela和Huh7.5.1細胞的抑制作用

青龍衣各萃取相對人宮頸癌細胞Hela的抑制作用如圖2,隨作用濃度的升高抑制率逐漸變大,呈現出劑量-效應關系。在2.4～300 μg/mL濃度時,各萃取相的抗腫瘤作用由大到小依次為:石油醚>氯仿>乙酸乙酯>正丁醇;在0.098、0.48 μg/mL濃度時,各萃取相的抗腫瘤作用由大到小依次為:氯仿>石油醚>乙酸乙酯>正丁醇。300 μg/mL濃度時,除正丁醇萃取相外,其他三相的抑制率均達到50%以上;60 μg/mL濃度時,僅石油醚萃取相的抑制率在50%以上;0.098～12 μg/mL濃度間,各萃取相的抑制效果相當處于20%～30%之間。綜合分析,石油醚萃取相為四相中抑制效果最好。

圖2　青龍衣各萃取相對Hela細胞的生長抑制作用Fig.2　The growth inhibition of Hela cells by all the extraction

青龍衣各萃取相對人肺癌細胞Huh7.5.1的抑制作用如圖3,隨作用濃度的升高抑制率逐漸變大,呈現出劑量-效應關系。各萃取相的抗腫瘤作用由大到小依次為:石油醚>氯仿和乙酸乙酯>正丁醇。石油醚萃取相在37.5～300 μg/mL濃度之間顯示出顯著的抗腫瘤作用,其抑制率均大于50%,最高可達96.24%,而在低濃度9.375和18.75 μg/mL時抑制效果不佳;氯仿萃取相在150、300 μg/mL濃度時抑制效果非常明顯,抑制率分別為86.76%和86.96%,在75 μg/mL濃度時下降到16.3%,說明氯仿萃取相的最佳抑制濃度大于75 μg/mL。乙酸乙酯萃取相在150、300 μg/mL濃度時抑制效果良好,抑制率均在50%以上,分別為58.83%和91.15%,而在低濃度9.375～37.5 μg/mL之間時抑制效果不理想,抑制率均不到10%;正丁醇萃取相在高濃度300 μg/mL時抑制效果明顯,低濃度時幾乎無明顯的抗腫瘤作用。

圖3　青龍衣各萃取相對Huh7.5.1細胞的生長抑制作用Fig.3　The growth inhibition of Huh7.5.1cells by all the extraction

2.4.1青龍衣各萃取相對腫瘤細胞Hela和Huh7.5.1細胞的IC50通過對比表3中陽性對照HCPT和各萃取相對Hela和Huh7.5.1細胞的IC50值大小,可看出4種萃取相對Huh7.5.1細胞的IC50值均小于Hela細胞,表明Huh7.5.1細胞的生長更容易受到青龍衣各萃取相的影響;4種萃取相中石油醚萃取相的抗腫瘤效果最佳,對Hela和Huh7.5.1細胞的IC50值分別為124.99、45.33 μg/mL。石油醚相對Huh7.5.1細胞的抑制效果與HCPT的抑制效果相當,提示青龍衣在臨床抗腫瘤運用,尤其在對肝癌的治療方面,具有很大的開發(fā)利用價值。

表3　各萃取相對Hela和Huh7.5.1細胞的IC50

2.4.2Hoechst 33342染色觀察Huh7.5.1細胞形態(tài)Huh7.5.1細胞在不同濃度石油醚萃取相作用后,經染料Hoechst 33342染色得到的抑制效果如圖4。正常細胞表面光滑,發(fā)出均勻淡藍色熒光,染色質分布均勻;石油醚萃取相作用于Huh7.5.1細胞72 h后,隨著石油醚萃取相濃度的升高,Huh7.5.1細胞核或細胞質內出現強藍色致密的顆粒狀熒光,染色質蜷縮,細胞內的凋亡小體也逐漸增多,表明石油醚萃取相能夠誘導Huh7.5.1細胞凋亡。

圖4　Huh7.5.1在熒光檢測下的形態(tài)學特征(×400)Fig.4　Morphological appearance of Huh7.5.1 cells by fluorescence detection(×400)注:A～F分別為300、150、75、37.5、18.75、9.375μg/mL石油醚相,G為對照。

據文獻報道,大多數植物中的有效活性成分發(fā)揮抗腫瘤作用是通過誘導腫瘤細胞凋亡來完成的[13-14],本實驗結果也證實了這一點。也有研究表明青龍衣中主要起抗腫瘤作用的物質為胡桃醌,它通過誘導細胞凋亡來發(fā)揮抗癌活性,但對于胡桃醌誘導細胞凋亡的信號調控機制尚未得出一致結論[15-20]。

3　結論與討論

本研究中青龍衣乙醇提取物及石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取相對4種玉米主要病原真菌和2種腫瘤細胞有不同程度的抑制效果。醇提物對玉米穗腐菌的抑制效果最好,抑菌率為92.5%;醇提物的4種萃取相對4種植物病原真菌均有抑制作用。其中乙酸乙酯萃取相的抑制優(yōu)于其他3種萃取相,對玉米穗腐菌、玉米彎孢菌、玉米紋枯菌、玉米黑粉菌的EC50分別為7.354、10.341、96.532、9.546 mg/mL,對玉米穗腐菌的抑制效果最佳。在抗腫瘤效果研究中,石油醚相對Hela和Huh7.5.1細胞的抑制效果均最好,其IC50值分別為124.99、45.33 μg/mL。通過Hoechst 33342染色觀察Huh7.5.1細胞凋亡,隨著作用濃度的升高,Huh7.5.1細胞內的凋亡小體也逐漸增多,證實發(fā)揮青龍衣提取物的抗腫瘤作用是通過誘導腫瘤細胞凋亡來完成的。

青龍衣中存在著豐富的抑菌或殺菌活性物質。翟梅枝等人[21]對青龍衣乙醇提取物及其萃取相進行抑菌效果研究,表明乙醇提取物的乙酸乙酯萃取相的抑菌活性優(yōu)于石油醚相、氯仿相和正丁醇相,其對棉花立枯、小麥紋枯等菌的EC50值在5.6～10.3 mg/mL之間。本研究結果同其一致,乙醇提取物的乙酸乙酯萃取相亦表現出最佳的抑菌效果,有望進一步開發(fā)成無污染、高安全性、低殘留的生物農藥。

青龍衣乙醇提取物石油醚萃取相對兩種腫瘤細胞的抑制效果最好,且能誘導細胞凋亡,推測青龍衣中具有抗腫瘤活性的物質可能存在于低極性部位。近年來,有關應用青龍衣治療惡性腫瘤的臨床報道日漸增多,但是對青龍衣中具體化合物的細胞毒性及其作用機理研究較少。本實驗采用不同極性的有機溶劑提取青龍衣中的化合物并進行細胞毒性實驗,通過Hoechst 33342染色觀察細胞凋亡,為后期有針對性地分離有特定活性的物質和研究抗腫瘤作用機理打下基礎。

本實驗室前期研究表明[22],青龍衣醇提物和不同極性萃取物對金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌等7種臨床耐藥細菌具有良好的抑制效果。結合本實驗研究結果,表明青龍衣提取物對細菌和真菌均有較廣的抗菌譜,對腫瘤細胞也有不同程度的抑制作用,可見其在資源綜合利用及醫(yī)藥開發(fā)方面具有重要的意義。

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Antifungal and antitumor activity of walnut green husk’ extracts

DUAN Yan-ling,WEI Xiao-lu,REN Xian-wei,LIU Li*,FENG Yue,XIA Xue-shan

(Faculty of Life Science and Technology,Kunming University of Science and Technology,Kunming 650500,China)

The ethanol extracts of walnut green husk were further extracted with petroleum ether,chloroform,ethyl acetate and n-butanol. Antifungal and antitumor activity of the walnut green husk’different solvent extracts against 4 corn pathogenic fungi and 2 tumor cells were studied. The results showed that the ethanol extract from walnut green husk and different solvent extracts had certain inhibition on testing microbial. For the corn pathogenic fungi,the inhibition rate of ethanol extract toFusariumgraminearum,Curvularialunata,RhizotoniasolaniKuhnandUstilagomaydiswere 92.5%,86.0%,83.2%,50.0% respectively. The ethyl acetate extract had the best antimicrobiol activity among the different solvent extracts,which the EC50were 7.354,9.546,10.341,96.532 mg/mL. MTT assay showed that the different extracts inhibited the growth of Hela cells and Huh7.5.1 cells in a dose-dependent manner. The petroleum ether extract had the most obvious antitumor effect on testing cells,which the IC50were 124.99 μg/mL and 45.33 μg/mL,it could induce Huh7.5.1 cell’s apoptosis. The ethanol extracts of walnut green husk can inhibit Fusarium graminearum,Curvularialunata,RhizotoniasolaniKuhn,Ustilagomaydisand Hela cells,Huh7.5.1 cells in a dose-dependent manner.

walnut green husk extract;antimicrobial activity;antitumor activity

2016-01-12

段燕玲(1991-)，女，碩士研究生，主要從事藥物化學與生物技術方面的研究,E-mail:yanlingcoolgirl@126.com。

劉麗(1969-)，女，理學博士，教授，主要從事環(huán)境微生物方面的研究，E-mail:liuli2272@163.com。

國家科技支撐計劃項目(2011BAD46B00)。

TS201.3

A

1002-0306(2016)13-0077-06

10.13386/j.issn1002-0306.2016.13.007