急性腦梗死患者血清MMP-9和D-D水平變化及臨床意義

魏芳

急性腦梗死患者血清MMP-9和D-D水平變化及臨床意義

魏芳

目的 探討基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）、D-二聚體（D-D）在急性腦梗死患者血清中的變化情況及臨床意義。方法 選取2013 年12月至2015年3月間收治的60例急性腦梗死患者及60例健康體檢者為觀察對(duì)象，采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）和凝固法檢測(cè)外周血中MMP-9和D-D水平，同時(shí)采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血常規(guī)、總膽固醇（CHOL）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）、脂蛋白a（LPa）水平。結(jié)果 與正常對(duì)照組比較，急性腦梗死患者血清MMP-9、D-D、TG、HDL、LPa水平增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而白細(xì)胞總數(shù)（WBC）、血紅蛋白（HB）、CHOL、LDL水平差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；急性腦梗死患者不同頸動(dòng)脈狹窄患者血清的MMP-9和D-D水平差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。Spearmen相關(guān)性分析結(jié)果表明，血清MMP-9和D-D水平與急性腦梗頸動(dòng)脈狹窄程度正相關(guān)（r=0.421，P＜0.05）。MMP-9與腦梗死危險(xiǎn)因素中D-D、LPa呈正相關(guān)（r=0.2235，r=0.2290，P＜0.05），MMP-9與HDL呈負(fù)相關(guān)（r=-0.267，P＜0.05）；而MMP-9與其它危險(xiǎn)因素WBC、HB、CHOL、LDL均無(wú)相關(guān)性（P＞0.05）。結(jié)論 血清MMP-9和D-D水平與急性腦梗死的發(fā)生、發(fā)展以及頸動(dòng)脈的狹窄程度有密切的關(guān)系，兩者聯(lián)合檢測(cè)可以作為急性腦梗死早期診斷、預(yù)后判斷的靈敏指標(biāo)，為急性腦梗死的診斷、療效觀察和預(yù)后提供重要的檢驗(yàn)依據(jù)。

急性腦梗死 基質(zhì)金屬蛋白酶-9 D-二聚體 危險(xiǎn)因素

急性腦梗死（acute cerebral infarction，ACI）具有高發(fā)病率、高致殘率、高死亡率的特點(diǎn)［1，2］?；|(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）是一組主要參與細(xì)胞外基質(zhì)的降解與重構(gòu)的鋅、鈣依賴性肽鏈內(nèi)切酶［3］。依據(jù)作用底物以及片斷同源性的不同，MMP-9屬于MMPs家族中的明膠酶類，又稱明膠酶B。MMP-9被底物Ⅳ型膠原酶活化后，能分解基底膜的細(xì)胞外基質(zhì)蛋白，造成機(jī)體的局部炎癥反應(yīng)，從而導(dǎo)致血腦屏障通透性增加和動(dòng)脈粥樣斑塊分解，造成腦梗死的發(fā)生［4，5］。D-二聚體（D-dimer，D-D）是交聯(lián)纖維蛋白的穩(wěn)定而特異性的降解產(chǎn)物，其水平升高反映高凝狀態(tài)和纖溶亢進(jìn)［6］。研究表明，D-D可作為血栓形成、纖溶增強(qiáng)及溶栓治療有效敏感指標(biāo)之一［7，8］。本研究旨在探討血清MMP-9、D-D在腦梗死急性期的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律及上述兩個(gè)因子與腦梗死病灶體積的相關(guān)性，為腦梗死急性期的腦保護(hù)作用機(jī)制研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選取本院神經(jīng)內(nèi)科住院病房于2013 年12月至2015年3月間收治的60例急性腦梗死患者（觀察組），以及同期60例健康體檢者（對(duì)照組）為觀察對(duì)象。其中，觀察組男36例，女24例；年齡47～78歲，平均年齡（61.56±8.41）歲。對(duì)照組男32例，女28例；年齡46～76歲，平均年齡（62.18±9.12）歲。依據(jù)歐洲頸動(dòng)脈外科試驗(yàn)協(xié)作組（ECST）狹窄度［9］公式：［ECST狹窄度=（1-頸內(nèi)動(dòng)脈最窄處血流寬度/頸內(nèi)動(dòng)脈膨大處模擬內(nèi)徑）×100%］的結(jié)果，將頸內(nèi)動(dòng)脈狹窄程度分為3級(jí)：（1）輕中度狹窄（n=39例）：動(dòng)脈內(nèi)徑縮小10%～60%。（2）重度狹窄（n=10例）：動(dòng)脈內(nèi)徑縮?。?0%.（3）動(dòng)脈內(nèi)徑縮?。?0%為無(wú)狹窄組（n=11例）。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）年齡 32～81歲，首次發(fā)病入院且入院時(shí)間＜12h。（2）疾病診斷符合第4次全國(guó)腦血管病會(huì)議急性腦梗死的臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)［5］。（3）頭顱影像學(xué)（頭顱CT或頭顱MRI）確診梗死病灶位于頸內(nèi)動(dòng)脈系統(tǒng)的腦梗死患者。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）近期經(jīng)歷頭顱及腦部重大手術(shù)、外傷史等。（2）既往有神經(jīng)系統(tǒng)器質(zhì)性疾病導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙者。（3）合并急慢性感染性疾病及風(fēng)濕免疫性、血液系統(tǒng)疾病及其導(dǎo)致的腦梗死患者。（4）心、肺、肝、腎功能障礙的患者。（5）罹患惡性腫瘤患者。對(duì)照組人群為與觀察組人群年齡相匹配，且體檢結(jié)果顯示正常者。所有觀察對(duì)象或者家屬均簽署知情同意書(shū)。兩組性別、年齡、吸煙史、飲酒史、高血壓病史等方面，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 血清標(biāo)本的收集 在腦梗死患者發(fā)病后24h內(nèi)采集肘靜脈血3ml，抗凝處理，離心（3000r/min，10min），取血清，-20℃的冰箱中保存，備用待測(cè)。對(duì)照組人群抽取靜脈血3ml，抗凝處理，離心（3000r/ min，10min），取血清，-20℃的冰箱中保存，備用待測(cè)。

1.3 血常規(guī)、血脂指標(biāo)以及血清MMP-9、D-D水平的測(cè)定 （1）ELISA方法檢測(cè)血清MMP-9水平：采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）對(duì)觀察人群血清MMP-9水平進(jìn)行測(cè)定。操作嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。簡(jiǎn)要步驟如下：依次將標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗MMP-9標(biāo)記的親和素加入預(yù)先包被抗MMP-9抗體的微孔中，經(jīng)過(guò)溫育并徹底洗滌。用底物顯色，待測(cè)物質(zhì)在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色；溶液顯色的程度與待測(cè)物質(zhì)中MMP-9水平呈正相關(guān)。隨即利用酶標(biāo)儀（λ=450nm）測(cè)定光密度（OD值），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線得出MMP-9的濃度。（2）凝固法檢測(cè)血清D-D水平：采用全自動(dòng)血凝分析儀CS-5100檢測(cè)研究人群的血清D-D水平。嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。實(shí)驗(yàn)原理如下：當(dāng)單克隆抗體（8D3）10共價(jià)包被的聚乙烯顆粒與待測(cè)血漿樣本中的D-D抗原特異性結(jié)合，從而誘發(fā)凝聚，反應(yīng)環(huán)境的渾濁度增加，檢測(cè)器捕捉反應(yīng)液的濁度變化，對(duì)比參照溶液濁度，繪制濁度變化曲線，得出待測(cè)血漿樣本中的D-D的水平。血常規(guī)、血脂指標(biāo)的測(cè)定全部采用羅氏cobas-8000全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行測(cè)定。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件。計(jì)量資料以（±s）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，相關(guān)性檢測(cè)采用 Spearman 等級(jí)分析，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組人群血清MMP-9和D-D水平變化情況 與正常人群血清MMP-9和D-D水平比較，急性腦梗死組患者血清MMP-9和D-D水平增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.634，t=2.687，P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 兩組人群血清MMP-9和D-D水平變化情況［ng/ml，（±s）］

表1 兩組人群血清MMP-9和D-D水平變化情況［ng/ml，（±s）］

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05

分組nMMP-9D-D觀察組60939.81±154.25*171.59±35.68*對(duì)照組60728.36±102.4552.48±19.97

2.2 兩組人群傳統(tǒng)危險(xiǎn)因素水平變化情況 與正常對(duì)照組人群血清甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL）、脂蛋白a（LPa）水平相比較，觀察組患者血清TG、HDL、LPa水平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。而白細(xì)胞總數(shù)（WBC）、血紅蛋白（HB）、總膽固醇（CHOL）、低密度脂蛋白（LDL）水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表2。

表2 觀察組和正常對(duì)照組傳統(tǒng)危險(xiǎn)因素表達(dá)水平比較（±s）

表2 觀察組和正常對(duì)照組傳統(tǒng)危險(xiǎn)因素表達(dá)水平比較（±s）

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05

項(xiàng)目觀察組（n=60）對(duì)照組（n=60）WBC（×109/L）8.47±2.356.76±2.01 HB（g/L）138.59±17.63137.85±16.93 CHOL（mmol/L）4.58±1.215.35±1.34 TG（mmol/L）1.59±0.46*1.21±0.41 HDL（mmol/L）2.06±0.58*1.12±0.36 LDL（mmol/L）3.87±1.153.12±1.01 LPa（mmol/L）35.68±10.38*18.46±11.47

2.3 急性腦梗死患者不同頸動(dòng)脈狹窄程度與MMP-9 和D-D表達(dá)水平的關(guān)系 與急性腦梗死患者無(wú)狹窄組的血清MMP-9和D-D水平比較，重度狹窄組和輕中度狹窄組患者增高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=3.441，t=2.357，P＜0.05）。見(jiàn)表3。

表3 急性腦梗死患者不同頸動(dòng)脈狹窄程度與MMP-9和D-D表達(dá)水平比較［ng/ml，±s）］

表3 急性腦梗死患者不同頸動(dòng)脈狹窄程度與MMP-9和D-D表達(dá)水平比較［ng/ml，±s）］

注：與無(wú)狹窄組比較，*P＜0.05

分組MMP-9D-D重度狹窄組（10例）1258.98±356.14*196.54±67.59*輕中度狹窄組（39例）978.21±259.67*156.51±66.1*無(wú)狹窄組（11例）711.25±88.7699.81±34.08

2.4 急性腦梗死患者不同頸動(dòng)脈狹窄程度與相關(guān)危險(xiǎn)因素水平的關(guān)系 與急性腦梗死患者無(wú)狹窄組的LPa水平比較，重度及輕中度狹窄組中LPa水平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；重度狹窄組患者的TG水平增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而其在輕中度狹窄組和無(wú)狹窄組中的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。WBC、HB、HDL、LDL在不同程度頸動(dòng)脈狹窄組差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表4。

表4 急性腦梗死患者不同頸動(dòng)脈狹窄程度與傳統(tǒng)相關(guān)危險(xiǎn)因素水平的關(guān)系（±s）

表4 急性腦梗死患者不同頸動(dòng)脈狹窄程度與傳統(tǒng)相關(guān)危險(xiǎn)因素水平的關(guān)系（±s）

注：與無(wú)狹窄組比較，*P＜0.05

項(xiàng)目重度狹窄組（10例）輕中度狹窄組（39例）無(wú)狹窄組（11例）WBC（×109/L）7.21±2.046.13±1.967.81±2.46 HB（g/L）137.45±15.26137.41±14.03141.52±16.82 CHOL（mmol/L）4.26±0.874.75±1.065.13±0.86 TG（mmol/L）1.85±0.52*1.18±0.331.41±0.49 HDL（mmol/L）1.03±0.121.28±0.211.15±0.32 LDL（mmol/L）2.81±0.813.02±0.763.54±1.05 LPa（mmol/L）37.19±15.67*34.51±13.71*18.45±10.74

2.5 急性腦梗死患者血清MMP-9和D-D水平變化的Spearmen相關(guān)性分析 Spearmen相關(guān)性分析結(jié)果表明，血清MMP-9和D-D水平與急性腦梗頸動(dòng)脈狹窄程度正相關(guān)（r=0.421，r=0.446，P＜0.05）。MMP-9與腦梗死危險(xiǎn)因素中D-D、LPa呈正相關(guān)（r=0.2235，r=0.2290，P＜0.05），而MMP-9與HDL呈負(fù)相關(guān)（r= -0.267，P＜0.05）。此外，MMP-9與其它危險(xiǎn)因素WBC、HB、CHOL、LDL均無(wú)相關(guān)性（P＞0.05）。

3 討論

急性腦梗死是一種嚴(yán)重威脅人類生命健康的腦血管疾病。研究表明，其由多種因素相互作用引起，且常伴隨有腦組織缺血缺氧性損傷［10］。當(dāng)腦梗死發(fā)?。?4h，或梗塞灶＜8mm，或病變?cè)谀X干和小腦處，臨床腦CT檢查常不能提供正確診斷，因此，臨床醫(yī)師必需結(jié)合血清因子水平變化情況作出判斷。研究表明，MMPs家族中的MMP-9主要攻擊腦血管外基膜的主要成分層粘蛋白和纖粘蛋白，破壞血腦屏障（bloodbarrieer，BBB），從而引起腦水腫及腦出血性轉(zhuǎn)化［11］。宗信等［12］認(rèn)為Ⅳ型膠原酶作為MMP-9底物，活化的MMP-9可以分解位于基底膜的細(xì)胞外基質(zhì)蛋白如Ⅳ型酶，造成局部炎性改變，血腦屏障通透性增加，頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性下降，逐漸破裂。程瑋等［13］認(rèn)為MMP-9能夠作為判斷急性腦梗死病情嚴(yán)重程度的預(yù)測(cè)指標(biāo)。Luciveo V等［14］研究發(fā)現(xiàn)，血清MMP-9水平在肺梗死患者中的水平出現(xiàn)明顯的階段性變化，且與病灶梗死面積的大小呈現(xiàn)正相關(guān)。Rosell等［15］對(duì)溶栓治療后梗死的患者外周血MMP-9水平的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，MMP-9水平與MRI病灶大小密切相關(guān)。

本資料結(jié)果表明，觀察組患者血清MMP-9水平較正常對(duì)照組水平升高，且MMP-9水平在急性腦梗死患者不同頸動(dòng)脈狹窄組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），同時(shí)Spearmen相關(guān)分析顯示MMP-9與急性腦梗頸動(dòng)脈狹窄程度正相關(guān)。表明血清MMP-9與急性腦梗死的發(fā)生以及頸動(dòng)脈的狹窄程度有密切的關(guān)系。

D-D是一種交聯(lián)纖維蛋白的降解產(chǎn)物，外周循環(huán)血液中D-D水平升高與腦血管疾病尤其腦出血疾病關(guān)系密切。本資料中，與正常對(duì)照組人群血清D-D水平比較，急性腦梗死患者血清D-D水平增高，且其在急性腦梗死患者不同頸動(dòng)脈狹窄組中差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。同時(shí)，Spearmen相關(guān)分析提示D-D水平與急性腦梗死頸動(dòng)脈狹窄程度正相關(guān)。

此外，腦梗死急性期相關(guān)的傳統(tǒng)危險(xiǎn)因素中，TG、HDL和Lpa水平在急性腦梗死患者中明顯升高，而CHOL和LDL升高不明顯，在不同程度的頸動(dòng)脈狹窄引起的急性腦梗死患者中僅Lpa水平升高差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。因此推斷TG、HDL和Lpa作為傳統(tǒng)因素對(duì)急性腦梗死的診斷有一定的價(jià)值，其中Lpa不僅在判斷急性腦梗死的發(fā)生和發(fā)展上有意義，而且在推斷急性腦梗死的預(yù)后具有重要的參考價(jià)值。

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Objective To discuss the levels of matrix metalloproteinase-9（MMP-9）and D-D in serum of patients with acute cerebral infarction and the clinical values. Methods We selected 60 cases patients with acute cerebral infarction and 60 cases healthy control in the research from Dec，2013 to March，2015. Then adopting the ELISA method and D-D levels were detected by coagulation method，at the same time，the levels of peripheral blood routine，CHOL，TG HDL，LDL and LPa were measured. Results The serum concentration of MMP-9 and D-D and traditional risk factors（RFs）including TG，HD and LPa in ACI group was higher than that in normal control group（P＜0.05）.While the other RFs（WBC、HB，CHOL，LDL，LPa）showed no difference compared with normal control group（P＞0.05）.Moreover，among ACI cases MMP-9 and D-D were significantly higher in the two stenosis groups than in the group without stenosis（P＜0.05）.Both MMP-9 and D-D levels were positively related with the severity of the carotid stenosis by spearmen correlation analysis（r=0.421，P＜0.05）.And otherwise，MMP-9 was positively related with D-D and LPa（r=0.2235，r=0.2290，P＜0.05）negatively related to HDL（r=-0.2 67，P＜0.05），but showed no relationship with RFs including WBC，HB，CHOL and LDL（P＞0.05）.Conclusions Serum MMP-9 and D-D level have close relationship with onset and development of ACI and the severity of the carotid stenosis. MMP-9 and D-D joint detection can provide important clinical laboratory evidence for cerebral infarction diagnose，treatment effect observation and prognosis.

Acute cerebral infarction Matrix metallprotein-9 D-dimer Risk factors

010050 內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科