炮制對(duì)含生物堿類中藥的影響分析

馬定耀 付曉蕾 羅昭嬪

摘要：目的分析炮制對(duì)黃連中鹽酸小檗堿含量影響以及中藥炮制對(duì)臨床藥效的影響，探討炮制對(duì)生物堿影響可能機(jī)制，總結(jié)炮制經(jīng)驗(yàn)。方法參照《中國藥典》2005版收錄的凈黃連、酒炙黃連、姜黃連、萸黃連工藝，分別炮制，繪制對(duì)照品黃連鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)曲線，y（峰面積）=-0.1065±50.0671x（對(duì)照品溶液量），r=0.999，線性范圍300～700μg，設(shè)計(jì)酒炙黃連炒炙溫度（150℃、170℃、190℃）、炒炙時(shí)間（2 min、4 min、6 min）正交實(shí)驗(yàn)。結(jié)果炒炙時(shí)間6 min、170℃鹽酸小檗堿水平最高，達(dá)到6.23%；酒黃連鹽酸小檗堿水平低于姜黃連，高于萸黃連，萸黃連高于生品，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論經(jīng)過炮制，酒炙黃連、姜黃連、萸黃連生物堿水平均明顯提高，其中先酒炙、姜制后生物堿水平最高；生物堿受炮制方式影響較顯著，對(duì)溫度較敏感。

關(guān)鍵詞：生物堿；黃連；炮制方法

中圖分類號(hào)：R283文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1007-2349（2016）10-0081-03

Analysis of Processing of Alkaloids Containing Chinese Medicine

MA Ding-yao， FU Xiao-lei， LUO Zhao-bin

（People’s Hospital of Yingde City， Yingde 513000， Guangdong）

【Abstract】Objective： To analyze the influence of processing berberine hydrochloride in Coptis chinensis and TCM processing on its clinical effect and to explore the possible mechanism of processing alkaloids. Methods： Refering to Chinese Pharmacopoeia （2005） edition， net berberine， wine berberine， curcuma berberine and fructus evodiae berberine were respectively processed， and the standard curve of reference substance berberine hydrochloride was drawn， y （peak area） = -0.1065 ± 50.0671x （amount of reference substance solution）， r=0.999， at the linear range of 300 to 700g and frying temperature （150℃， 170℃ and 190℃） was designed for wine berberine， frying time （2 min， 4 min and 6 min） was orthogonal experiment. At the same time 60 patients taking traditional Chinese medicine were randomly selected and divided into groups according to their conditions， treating them with processed alkaloids and tannins containing Chinese medicine to observe the clinical effect. Results： The berberine hydrochloride fried for 6 min at 170℃ had the highest level， reaching 6.23%. The level of wine berberine hydrochloride was lower than that of curcuma berberine and higher than that of fructus evodiae berberine， but fructus evodiae berberine was higher than that of raw material. The difference was statistically significant （P<0.05）. Conclusion： After processing， the alkaloid levels of wine berberine， curcuma berberine and fructus evodiae berberine significantly increase， among which the highest level of alkaloid is the berberine prepared first with wine and then with curcuma. The alkaloid processing is affected by its way and more sensitive to temperature.

【Key words】alkaloids， berberine， influence

生物堿是生物體內(nèi)含氮有機(jī)化合物的總稱，是中藥常見的一類有效成分。炮制是中藥飲片制作的必要過程，但炮制本身可能帶來一些理化反應(yīng)，進(jìn)而影響中藥內(nèi)部化學(xué)成分[1～3]。本次研究以黃連為例，分析炮制對(duì)黃連中生物堿類物質(zhì)的影響。

1材料與方法

1.1儀器與試劑高效液相色譜儀，色譜工作站。可見紫外線檢測(cè)器。非接觸式遠(yuǎn)紅外測(cè)溫儀，超聲提取器，電熱鼓風(fēng)干燥箱，電子天平，黃酒，生姜，鹽酸小檗堿（分析純）、乙腈（色譜醇等）。實(shí)驗(yàn)用黃連購自湖北恩施利川黃連示范基地，并按照最佳炮制方法制得凈黃連。

1.2方法

1.2.1炮制本次研究參照《中國藥典》2005版收錄的凈黃連、酒炙黃連、姜黃連、萸黃連工藝研究為主。凈黃連經(jīng)凈選、水洗、浸潤切制、干燥4個(gè)流程，其中水洗（加2倍水、洗2次，每次60 s）。潤軟切制：浸潤6 h，切片。干燥工藝：60℃，干燥4 h，翻動(dòng)2次，藥材以松散為佳。采用照酒炙法（ⅡD），炒干，每100 kg黃連，用黃酒12.5 kg，藥典中未明確炒炙溫度與時(shí)間，本次研究試設(shè)計(jì)正交。分炒炙溫度（150℃、170℃、190℃）、炒炙時(shí)間（2 min、4 min、6 min）。

1.2.2鹽酸小檗堿含量測(cè)定精密測(cè)定鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，加入甲醇制得0.04 mg/mL溶液，作為對(duì)照組溶液。供試品，取粉末精密稱定0.1 mg，置100 mL量瓶中，加入鹽酸-甲醇（1∶100）溶液95 mL，60℃熱浴15 min，取出，超聲處理30 min，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，濾液作為供試品。色譜Agilent C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相：乙腈：水（磷酸鹽溶液，磷酸調(diào)pH值）（28：72 v/v），波長346nm，柱溫25℃，流速1 mL/min。取鹽酸小檗堿對(duì)照品、供試品溶液制得0.05 mg/mL的對(duì)照品溶液，精密吸取鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液6、8、10、12、14 μL進(jìn)樣，繪制峰面積，以其作為縱坐標(biāo)，對(duì)照品溶液量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，y=-0.1065±50.0671x，r=0.999，線性范圍300～700 μg。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)采用WPS表格登記，以SPSS18.0軟件處理，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，以P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1時(shí)間、溫度正交實(shí)驗(yàn)見表1，結(jié)果顯示在炒炙時(shí)間6 min、170℃鹽酸小檗堿水平最高，達(dá)到6.23%。方差分析顯示，炒炙時(shí)間SS=1.93，MS=0.965，F(xiàn)=24.125，P<0.05，炒炙時(shí)間則分為0.57、0.285、7.125，P<0.01，誤差SS=0.08，MS=0.04。故170℃溫度下、炒炙時(shí)間6 min為最佳的炮制工藝。

3討論

黃連中的生物堿又稱黃連素，是黃連中的主要有效成分，包括黃連堿、巴馬汀、表小檗堿、藥根堿，現(xiàn)代藥理研究證實(shí)黃連素具有抗菌、抗炎、降血脂、降血糖、減肥、抗焦慮、抗腫瘤、保護(hù)胃黏膜等多種藥理學(xué)作用，在心腦血管病、癡呆、糖尿病、感染性疾病等疾病治療中具有廣闊的前景[4～5]。

黃連鹽酸小檗堿相關(guān)研究較多，其一種氮雜環(huán)化合物，熔點(diǎn)145℃，可以季銨型、醛型、醇型三種形式存在，其中第一種最為穩(wěn)定，不同形式化學(xué)特性存在較大的差異，但熔點(diǎn)均普遍在140℃以上[6]。本次研究顯示，不同方法炮制黃連鹽酸小襞堿含量存在顯著差異，炒炙時(shí)間、溫度對(duì)含量影響較顯著，炮制本身可通過理化作用改變藥材中成分含量。研究中，炒炙在170℃黃連中的鹽酸小檗堿水平最高，高于黃連素的最低熔點(diǎn)，提示在此溫度水平下，大部分黃連素是穩(wěn)定的，在6min時(shí)間內(nèi)水分等其他成分喪失的速度高于生物堿。同時(shí)研究顯示服用生物堿類中藥的患者治療總有效率顯著高于服用鞣質(zhì)類中藥的患者，說明科學(xué)的對(duì)中藥材進(jìn)行炮制可增強(qiáng)藥物臨床療效，促進(jìn)疾病痊愈。

當(dāng)前，中藥炮制方法繁多，主要包括凈制、炒制、炙制、熏制、蒸制、復(fù)制等幾個(gè)大方向，大方向下又有許多小方向。明清時(shí)，藥物炮制、炮制技術(shù)基本成熟。近現(xiàn)代，隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)理論與技術(shù)的引起，中藥材的炮制技術(shù)也有了很大的發(fā)展。炮制的最終目的在于保留、增強(qiáng)或賦予藥材藥理特性，如生黃連鹽酸小檗堿溶出率為55～60%，而經(jīng)酒、姜汁、吳茱萸炮制后，溶出率可達(dá)85%，提示炮制可增加藥物有效成分的溶出[8]。但需注意的是，在過去因缺乏科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)，許多炮制技術(shù)仍存在許多缺陷，如硫磺熏蒸可能增加藥物毒性。

近年來，中藥材質(zhì)量控制體系、藥理學(xué)相關(guān)研究飛速發(fā)展，藥材的炮制亟待規(guī)范化，盡管政府、科研機(jī)構(gòu)做了大量的基礎(chǔ)工作，但仍遠(yuǎn)遠(yuǎn)無法滿足實(shí)際需求，中藥潛在的價(jià)值仍有待挖掘。本次研究僅僅簡單的分析了不同炮制方法對(duì)黃連生物堿的影響，涉及因素較簡單，實(shí)際上黃連藥材生物堿含量影響因素繁多，除炮制外還受產(chǎn)地、采摘季節(jié)、生長條件等因素影響，不同產(chǎn)地、成分不同黃連對(duì)炮制的需求也不盡相同。植物體內(nèi)生物堿理化性質(zhì)、含量、相關(guān)化學(xué)物質(zhì)含量與理化性質(zhì)，這些都值得深入研究，為炮制方法的選擇提供依據(jù)。如本次研究中，姜汁中成分與黃連中的化學(xué)成分相互作用，姜汁提高黃連生物堿溶出程度的機(jī)制等，有待深入研究。

生物堿類型繁多，在生物系統(tǒng)中的存在形式也呈現(xiàn)多樣化，不同藥材質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)、炮制目的也存在一定的差異。如生黃連苦寒，用于瀉火解毒、清熱燥濕，阻主治療腸胃濕熱所致腹瀉、痢疾、口舌生瘡等證，炮制則應(yīng)避免賦予其熱蘇醒，炮制以水浸、潤切等為主。部分藥物中生物堿具有較強(qiáng)的毒性，如烏頭，炮制可能起到一定的減毒目的，故炮制過程，可能需要增加強(qiáng)度，以利于烏頭堿等較強(qiáng)毒性化學(xué)物質(zhì)變性。故，醫(yī)學(xué)工作者應(yīng)充分利用現(xiàn)代化的檢測(cè)條件，鑒定藥材中的生物堿理化性質(zhì)，同時(shí)依據(jù)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，炮制目的，指導(dǎo)炮制技術(shù)改進(jìn)，如控制溫度、炮制時(shí)間，選擇合適配料等，以獲得更符合需求的藥材。

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