液相色譜法檢測食品中的脫氫乙酸含量

熊齊榮

目前各國對脫氫乙酸應用有著嚴格的限制，如我國規定果汁、醬汁、糕點等食品中的最高用量不得超過0.5g/kg。對于脫氫乙酸含量的測定主要采用氣相色譜法和液相色譜法，其中，氣相色譜法的操作繁瑣且色譜峰易出現拖尾，因此現階段普遍采用操作更簡單、靈敏度更高的高效液相色譜法。

材料與方法

儀器。戴安3000；旋渦混合器；離心機。

試劑。甲基氰（色譜純）；乙酸銨（分析純）；NaCl（分析純）；脫氫乙酸（99.9%）。

測定方法。①色譜條件：流動相為15：85的甲基氰（0.02mol/ml）、乙酸銨溶液；流速為1.0 mL/min；進樣量為10μL；柱溫為35℃。②實驗方法：實驗樣品為市售不同品牌的果汁、醬菜、糕點，分別做如下處理。果汁：準確稱量5.00g于50mL離心管中；醬菜、糕點：預先均勻，稱取2～3g于50mL離心管中，加入飽和NaCl溶液5mL，1：1的鹽酸溶液1mL，在旋渦混合器中混合處理1min，精確添加甲基氰10 mL，再次混合處理3min，然后以3000轉/min的速度離心處理15min，取上清液，用0.45μm規格的過濾器進行過濾，待用。③色譜分析：根據上述色譜條件，利用外標法分析樣液，保留時間定性，根據峰面積定量，計算脫氫乙酸含量（mg/mL）。

結果與討論

檢測波長的確定。由掃描結果得知，脫氫乙酸在230nm處出現強吸收，但基體干擾較多；在297nm處出現次強吸收，基體干擾較少，因此，選擇297nm作為檢測波長。

流動相的選擇。以甲基氰+水作為流動相時，色譜峰出現拖尾，以0.02mol/L的乙酸銨替代水時，峰形明顯改善。甲基氰的比例對出峰時間和響應有一定影響，比例較低時，保留時間長，響應也比較低，反之則出峰時間短，響應較高。經多次試驗得出，當甲基氰與乙酸銨（0.02mol/L）的比例為15：85時，可以取得較好的效果。

提取液的選擇。脫氫乙酸對水難溶，但脫氫乙酸鈉易溶，通常利用水、NaOH溶液、NaCO3溶液等作為提取液，但提取后需要先凈化后才能使用。本文研究中，以甲基氰作為提取液，原因是脫氫乙酸可以溶于甲基氰，且甲基氰的水溶性有助于將酸性樣液中的脫氫乙酸徹底溶解，而且甲基氰能夠沉淀蛋白質，與脂肪不溶，通過離心即可獲得純度較高的提取液。

色譜分離。在上述色譜條件下，脫氫乙酸的保留時間為5.775min，峰形和組分的分離情況比較好，色譜圖如下：

標準曲線。將70%的甲基氰水溶液作為溶劑，制作不同濃度的脫氫乙酸標準液，得到若干測定結果（見表1）。利用峰面積對脫氫乙酸的濃度做回歸方程分析，得Y=2.39X×108-1.33×105，R=0.9997，線性結果良好。然后，對各濃度標準液連續進樣5次，所得峰面積及保留時間的相對標準偏差依次為0.35%和0.24，表明此測定方法具有較高的定性及定量準確度。

回收率及精密度試驗。取未添加脫氫乙酸的腐乳樣品3份，每份3g，分別加入0.1mg、0.2mg、0.4mg、0.6mg、1.0mg脫氫乙酸標準液，利用1.3所述方法及步驟進行處理，最終測定結果顯示，加標回收率為96.1～99.5%，平均回收率為98.5%。

取含有脫氫計算的腐乳樣品1份，以同樣的方法和步驟測定6次，得到下列測定值：0.192、0.195、0.194、0.198、0.195、0.193g/kg，相對標準偏差為1.08%。

樣品測定。利用該法對市售不同品牌的果汁、醬菜、糕點等食品中的脫氫乙酸含量進行測定，共檢測10份，其中7份為未檢出，3份檢測出脫氫乙酸，濃度依次為0.052g/kg，0.131g/kg，0.088g/kg，與國際標準氣相色譜法的測定結果相一致，表明該法測定結果良好，值得推廣使用。

（作者單位：畢節市質量技術監督檢測所）