骨痹止痛液對兔膝骨性關節(jié)炎軟骨中相關因子表達影響的研究

姚興璋，李興勇，李喜香，龐增林，麻　虎，宋　敏甘肅省中醫(yī)院，甘肅 蘭州 70050；甘肅省第三人民醫(yī)院；張家川縣中醫(yī)醫(yī)院；甘肅中醫(yī)藥大學

骨痹止痛液對兔膝骨性關節(jié)炎軟骨中相關因子表達影響的研究

姚興璋1，李興勇2，李喜香1，龐增林2，麻虎3，宋敏4
1甘肅省中醫(yī)院，甘肅 蘭州 730050；2甘肅省第三人民醫(yī)院；3張家川縣中醫(yī)醫(yī)院；4甘肅中醫(yī)藥大學

目的：研究骨痹止痛液對動物模型膝關節(jié)軟骨中白細胞介素-1（IL-1）、腫瘤壞死因子α （TNF-α）的影響。方法：將30只新西蘭大白兔隨機分為骨痹止痛液組（A組）、鹽酸氨基葡萄糖片組（B組）、模型組（C組）3組，每組10只。建立膝骨性關節(jié)炎模型后，分別給予骨痹止痛液、鹽酸氨基葡萄糖片、生理鹽水灌胃，連續(xù)8周。于8周后取樣，采用肉眼觀察形態(tài)學改變、HE染色、RT-PCR檢測軟骨中IL-1、TNF-α因子表達等指標。結果：肉眼觀察：A組及B組較給藥前無明顯變化，C組關節(jié)軟骨破壞較為嚴重，甚至出現(xiàn)糜爛。RT-PCR：A組、B組與C組比較，A組、B組兔軟骨標本中IL-1mRNA、TNF-αmRNA表達量明顯降低（P＜0.05）。兔軟骨標本中IL-1mRNA、TNF-αmRNA表達量A組較B組減低（P＜0.05）。結論：骨痹止痛液通過減少促炎因子（IL-1、TNF-α）的表達來抑制炎癥反應，從而減緩關節(jié)損傷。

骨痹止痛液；骨性關節(jié)炎，膝關節(jié)；白細胞介素-1；腫瘤壞死因子α

膝關節(jié)骨性關節(jié)炎（k n ee osteoart h r i t i s，K OA）是一種慢性退行性疾病，好發(fā)于老年人群［1］。K OA發(fā)病機制尚未明確，細胞因子是引起K AO發(fā)病的關鍵因素。本研究通過觀測骨痹止痛液對兔K OA模型關節(jié)軟骨中白細胞介素-1（I L-1）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）含量的影響，為臨床上使用骨痹止痛液提供客觀依據(jù)。

1　材料與方法

1.1實驗動物與分組清潔級新西蘭大耳兔30只，雌雄不限，體質量為（2.5±0.3）k g，采用隨機數(shù)字表分為3組，分別為骨痹止痛液組（A組）、鹽酸氨基葡萄糖片組（B組）、模型組（C組），每組10只。

1.2動物造模所有實驗動物實驗性飼養(yǎng)1周，然后按照文獻［2］描述方法造模：采用外科手術打開兔膝關節(jié)后，切斷其前交叉韌帶、內側副韌帶及取出內側半月板。術后每只動物給予青霉素40萬U/d，持續(xù)7天。造模后7天每日驅趕實驗動物活動半小時，驅趕4周后K OA造模成功。

1.3給藥參照《藥理實驗方法學》，按體表面積換算后，分別喂6mL骨痹止痛液，150mg/k g鹽酸氨基葡萄糖片，生理鹽水。結合體質量按相應劑量蒸餾水稀釋成20 mL后連續(xù)灌服8周后處死白兔。

1.4觀察指標H E染色光鏡觀察及R T-PC R測定I L-1m R N A、I L-1、TNF-αm R N A表達量。

1.5統(tǒng)計學方法應用S P SS 19.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計處理，所有實驗數(shù)據(jù)以（±s）表示，統(tǒng)計方法對各時段采用單因素方差分析（A N O V A），以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2　結果

2.1HE染色光鏡觀察8周后A組、B組軟骨細胞排列不規(guī)則現(xiàn)象在部分區(qū)域仍可見，但相比C組明顯少見，各層界限欠清楚，鏡下個別區(qū)域有簇集現(xiàn)象，潮線個別不完整；C組軟骨組織表層變薄甚至部分消失，表面粗糙，可見一些裂隙或者剝脫；軟骨細胞密度分布不均一，存在細胞簇集現(xiàn)象，軟骨細胞無明顯排列順序，潮線多不完整。見圖1。

圖1　各組關節(jié)軟骨變化（HE染色）

2.2IL-1mRNA、TNF-αmRNA表達量A組、B組與C組比較，A組、B組兔軟骨標本中I L-1m R N A、TNF-αm R N A表達量明顯降低（P＜0.05）。A組與B組比較，A組兔軟骨標本中I L-1m R N A、TNF-αm R N A表達量減低（P＜0.05）。見表1。

表1　各組動物軟骨標本中IL-1mRNA、TNF-αmRNA表達量的比較

3　討論

細胞因子在K OA發(fā)病中的作用備受關注，其中I L-1、TNF-α在K OA發(fā)病中起著重要的介導作用［3-4］。研究認為I L-1、TNF-α可以促使破骨細胞分泌多種金屬蛋白酶和其他酶類，從而引起軟骨細胞及其基質、軟骨下骨等結構降解和破壞，并可刺激成骨細胞樣細胞增殖，導致關節(jié)骨、軟骨增生性改變［5］。Y a n g L等［6］采用E LL S A對K OA患者膝關節(jié)關節(jié)腔內滑液測定發(fā)現(xiàn)，K OA患者滑液中I L-1β含量明顯高于正常人。

西醫(yī)對K OA的治療沒有特別有效的方法，藥物口服治療、關節(jié)內注射藥物治療、手術治療等遠期療效不容樂觀，而且有較多的副作用［7-11］。而基于現(xiàn)代醫(yī)學的以促進軟骨細胞和細胞外基質的生長為目的的方法，大多在臨床上較難實施，價格也比較昂貴。近年來，中藥對K OA治療實驗方面的研究越來越多。研究顯示［12-18］，很多中成藥或者經驗方劑都可以從關節(jié)軟骨、細胞因子、骨內壓、自由基、細胞凋亡、降低血清透明質酸、滑膜、金屬蛋白酶、雌激素等方面修復被破壞的軟骨細胞，改善膝關節(jié)疼痛、恢復膝關節(jié)功能。骨痹止痛液是甘肅省中醫(yī)院老一輩醫(yī)務工作者在中醫(yī)辨證論治、因地制宜的基礎上，針對甘肅特殊的地理面貌、氣候特征，集其臨床經驗而成。主要由制川烏、杜仲、獨活、羌活、穿山甲、川芎、當歸尾、肉桂等10余味藥物組成，具有補肝腎、通經脈、散瘀血、止痹痛、祛風濕的功效［9］。本研究結果表明，骨痹止痛液可通過減低I L-1m R N A、TNF-α m R N A表達量來減少炎性反應、緩解疼痛癥狀，為臨床使用骨痹止痛液提供了理論依據(jù)。

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Study on the In fluence of GuBi ZhiTong Liquid on Cartilage-related Factors Expressions of the Rabbitsw ith KneeOsteoarthritis

YAO Xingzhang1，LIXingyong2，LIXixiang1，PANG Zenglin2，MA Hu3，SONGMin4
1 Gansu Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine，Lanzhou 730050，China；2 Gansu Province the Third People′s Hospital；3 Zhangjiachuan County TCM Hospital；4 Gansu University of Traditional Chinese Medicine

Objective：To study the influence of GuBi ZhiTong liquid on IL-1 and TNF-αin knee cartilage ofthe animalmodel.Methods：Thirty rabbitswere random ized into the group of GuBi ZhiTong liquid（A），the group of glucosam ine hydrochloride tablets（B）and themodelgroup（C），ten rabbitseach group.The rabbit received intragastric administration of GuBi ZhiTong liquid，glucosamine hydrochloride tablets and physiological saline for eight weeks consecutively after establishing the rabbitmodel w ith knee osteoarthritis.Morphological changes were observed by the naked eyes，the expressions of IL-1 and TNF-αin the cartilage were detected by HE staining and RT-PCR after the sampleswere taken in eightweeks.Results：The observation under the naked eyes：therewas no obviouschange in the comparison of A and B between before and aftermedication，the damage of jointcartilagewas severe in group C，even erosion.RT-PCR：when A and Bwere comparedw ith C，theexpressionsof IL-1mRNA and TNF-αmRNA lowered obviously in A and B（P＜0.05）.The expressionsof IL-1mRNA and TNF-αmRNA in the rabbitcartilageof A were lower than these of B（P＜0.05）.Conclusion：GuBi ZhiTong liquid could inhibit inflammatory reaction by reducing the expressionsof IL-1 and TNF-α，therefore，to relieve jointdamage.

GuBi ZhiTong liquid；osteoarthritis；knee；IL-1；TNF-α

R285.5

A

1004-6852（2016）04-0029-03

2015-10-21

姚興璋（1987—），男，碩士學位，醫(yī)師。研究方向：骨傷科疾病的中醫(yī)藥診治。