琥乙紅霉素與二甲酚橙荷移反應(yīng)及其測定*

王曉玲，張　萍，王　歡

(咸陽師范學(xué)院化學(xué)與化工學(xué)院，陜西　咸陽　712000)

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琥乙紅霉素與二甲酚橙荷移反應(yīng)及其測定*

王曉玲，張萍，王歡

(咸陽師范學(xué)院化學(xué)與化工學(xué)院，陜西咸陽712000)

研究了在無水乙醇-鹽水介質(zhì)中，琥乙紅霉素與二甲酚橙能發(fā)生電荷轉(zhuǎn)移反應(yīng)，生成電荷轉(zhuǎn)移型絡(luò)合物，據(jù)此建立了琥乙紅霉素荷移光度分析的新方法。實驗最大吸收波長為580 nm，表觀摩爾吸光系數(shù)為9.82×103L·mol-1·cm-1線性回歸方程為y=1.245x-0.0598，相關(guān)系數(shù)r=0.9997，琥乙紅霉素的量在200～600 μg/10 mL范圍內(nèi)服從比爾定律。方法靈敏度較高、選擇性和重現(xiàn)性好，用于琥乙紅霉素片及琥乙紅霉素膠囊中琥乙紅霉素含量的測定，其相對標準偏差為0.23%～0.75%，加標回收率為99.0%～101%。

分光光度法；琥乙紅霉素；荷移反應(yīng)；二甲酚橙

電荷轉(zhuǎn)移反應(yīng)是由電子相對豐富的分子-電子給予體和電子相對缺乏的分子-電子接受體之間通過電荷轉(zhuǎn)移而形成新的絡(luò)合分子的過程，若反應(yīng)過程吸收的是可見光的能量，則該物質(zhì)就會是因電荷轉(zhuǎn)移而顯色。琥乙紅霉素分子中叔氨基上的氮原子有孤對電子，可作為電子給予體; 二甲酚橙是一平面缺電子體系，其中心碳原子和兩個氮原子上都帶有正電荷，顯正電性，可作為電子接受體，二者在無水乙醇-鹽水介質(zhì)中，能發(fā)生電荷轉(zhuǎn)移反應(yīng)而顯色，據(jù)此建立了電荷轉(zhuǎn)移光度法測定琥乙紅霉素的新方法，目前測定琥乙紅霉素的方法主要有色譜法[1-2]、藥典學(xué)[3]、流動注射化學(xué)發(fā)光法[4-5]、差示旋光法[6]、分光光度法[7-10]等。而利用二甲酚橙和琥乙紅霉素的荷移反應(yīng)測定琥乙紅霉素的方法未見報道。該方法利用氯化鈉作為增敏劑和增溫劑，靈敏度較高，體系穩(wěn)定，成功測定了藥劑中琥乙紅霉素的含量。

1　實　驗

1.1主要儀器及試劑

722S可見分光光度計(上海佑科儀器儀表有限公司)UPK-11-40型優(yōu)普超純水機(上海優(yōu)普實驗有限公司)；PHS-2C型精密酸度計。

1 mg/mL琥乙紅霉素標準液：在分析天平上準確稱取琥乙紅霉素的標準樣品0.1000 g于小燒杯中，加少量無水乙醇使之完全溶解，用無水乙醇定溶到100 mL；2.63×10-3mol/L 二甲酚橙溶液：準確稱量二甲酚橙0.5000 g在燒杯中，用水溶解溶解后定容至250 mL。

1.2實驗方法

在兩只25 mL比色管中，分別加入二甲酚橙溶液0.3 mL，向其中一支加入0.2 mL琥乙紅霉素標準溶液，另一支不加，再分別加入飽和食鹽水2.5 mL、無水乙醇0.2 mL，加水定容至10 mL，搖勻。以試劑空白為參比，用1 cm比色皿在分光光度計上，測定580 nm處吸光度值 A。

2　結(jié)果與討論

2.1吸收曲線

根據(jù)實驗方法配制空白和試劑溶液，在400～650 nm波長范圍內(nèi)測定吸光度A0和A，作出吸收曲線圖。如圖1所示，曲線1為二甲酚橙的吸收曲線，其最大波長在440 nm,曲線2為琥乙紅霉與二甲酚橙反應(yīng)生成荷移絡(luò)合物的曲線圖，其最大吸收波長為580 nm，荷移絡(luò)合物的最大吸收波長比試劑空白的最大吸收波長紅移了140 nm。選擇580 nm為實驗波長。

圖1　吸收曲線圖

2.2反應(yīng)條件探索

2.2.1介質(zhì)的選擇及用量

按實驗方法，試驗了HCl、H2SO4、H3PO4、KCl-HCl、鄰苯-HCl、KH2PO4-NaOH(pH=7.2)、H3BO3-KCl-NaOH(pH=8.53)、硼砂-NaOH(pH=11.04)、KCl-NaOH(pH=13.0)無水乙醇等溶液對反應(yīng)體系的影響。實驗顯示在無水乙醇介質(zhì)中顯色反應(yīng)效果較好。實驗選用無水乙醇為介質(zhì)。

2.2.2無水乙醇的用量

試驗設(shè)4個處理，采取隨機區(qū)組排列，3次重復(fù)，小區(qū)面積為1m×50m=50m2，播種量為15 g/m2。4個處理播種期：T1：4月 10 日，T2：5月 10 日，T3：6 月9日，T4：8月9日。選用120 cm寬的黑地膜，對試驗地進行一致處理，微起壟，壟高10 cm，壟面100 cm，壟間距20 cm。地膜覆好后，2 m一個土腰帶（寬10 cm），在膜面上用點播器打穴眼，穴眼深0.5 cm，穴距9 cm，行距3 cm，打眼器直徑為9 cm，播種行數(shù)為8行，全部鋪設(shè)噴灌在干旱時及時補水，種植密度40 穴 /m2。

實驗顯示，無水乙醇的用量在0.1～0.3 mL 范圍內(nèi)A趨于穩(wěn)定，此后吸光度A雖然在慢慢增大，但反應(yīng)體系不夠穩(wěn)定，綜合考慮以0.2 mL為無水乙醇的最佳用量

圖2　無水乙醇用量

2.2.3二甲酚橙的用量

隨著二甲酚橙用量的增加，吸光度在A在慢慢增大，當二甲酚橙的量為0.3 mL時A值達到最大且穩(wěn)定，此后隨著其用量的增大A值漫漫減小，以0.3 mL作為二甲酚橙的最佳用量。

圖3　二甲酚橙的用量

2.2.4離子強度的影響

按照實驗方法，試驗了可溶性的硝酸鹽、硫酸鹽、鹽酸鹽等，發(fā)現(xiàn)加入飽和氯化鈉后，反應(yīng)體系的穩(wěn)定性和靈敏度都有明顯提高，當飽和氯化鈉用量在1.5 mL～3.0 mL時，ΔA大且穩(wěn)定。實驗選用飽和氯化鈉的最佳用量為2.5 mL。

圖4　飽和氯化鈉用量

琥乙紅霉素V/mL不加飽和鹽水A加飽和鹽水AΔA靈敏度0.30.2510.3180.067提高26.8%

2.2.5反應(yīng)溫度和時間影響

在常溫下，顯色反應(yīng)迅速發(fā)生，在不同的反應(yīng)時間下，測定A值的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)A值基本沒有變化。故此反應(yīng)在常溫下進行，與反應(yīng)時間無關(guān)。

2.2.6反應(yīng)順序的影響

表2　反應(yīng)順序1

表3　反應(yīng)順序2

表4　反應(yīng)順序3

2.2.7工作曲線

配制琥乙紅霉素的系列標準溶液，在最大吸收波長580 nm處，測定其不同的吸光度A值，以標準溶液的量為橫坐標，吸光度值為縱坐標，繪制工作曲線，其線性回歸方程為y=1.245x-0.0598，相關(guān)系數(shù)r=0.9997，表觀摩爾吸光系數(shù)為9.82×103L·mol-1·cm-1，琥乙紅霉素的量在200～600 μg/10 mL范圍內(nèi)與A呈良好的線性關(guān)系。

圖5　工作曲線圖

2.2.8干擾離子

對0.3 mg/10 mL琥乙紅霉素進行測定，當相對誤差≤±5%時，考察了常見離子和藥物賦形劑的干擾情況。實驗表明，200倍的淀粉；60倍的精氨酸；40倍的葡萄糖均不干擾測定。

2.3琥乙紅霉素與二甲酚橙反應(yīng)機理探討

按試驗方法，應(yīng)用等摩爾連續(xù)變化法和斜率比法測得琥乙紅霉素與二甲酚橙絡(luò)合比為1:1。琥乙紅霉素分子中叔氨基上的氮原子有孤對電子，可作為電子給予體; 二甲酚橙是一平面缺電子體系，其中心碳原子和兩個氮原子上都帶有正電荷，顯正電性，可作為電子接受體，二者反應(yīng)可以生成1:1的電荷轉(zhuǎn)移絡(luò)合物。荷移反應(yīng)可表示如下：

3　樣品分析

3.1琥乙紅霉素片

取琥乙紅霉素片四片于50 mL的小燒杯中，加無水乙醇攪拌溶解、過濾，用無水乙醇定容到250 mL的容量瓶中。測定時每次取0.2 mL。

3.2琥乙紅霉素膠囊

取琥乙紅霉素膠囊一粒，將內(nèi)容物倒入小燒杯，加適量乙醇溶解、過濾、濾液用無水乙醇定容至50 mL容量瓶中，,再取該液10 mL稀釋到25 mL作為樣品測定液。測定時取0.2 mL。

表5　樣品測定結(jié)果

4　結(jié)　論

研究了在無水乙醇—鹽水介質(zhì)中，琥乙紅霉素與二甲酚橙能發(fā)生電荷轉(zhuǎn)移反應(yīng)，生成電荷轉(zhuǎn)移型絡(luò)合物，據(jù)此建立了琥乙紅霉素荷移光度分析的新方法。方法靈敏度較高、選擇性和重現(xiàn)性好，用于琥乙紅霉素片及琥乙紅霉素膠囊中琥乙紅霉素含量的測定，其相對標準偏差為0.23%～0.75%，加標回收率為99.0%～101%。

[1]關(guān)日晴. 高效液相色譜法測定琥乙紅霉素[J].中國藥品標準，2002, 3(3): 161-162.

[2]黃榕珍, 修虹, 陳水專. 高效液相色譜法測定琥乙紅霉素膠囊的含量[J]. 海峽藥學(xué), 2000, 12(4): 26-27.

[3]國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典.二部[M]. 北京: 化學(xué)工業(yè)出版社, 2000: 801.

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Determination of Erythromycin Ethylsuccinate Based on Charge Transfer Reaction between Erythromycin Ethylsuccinate and Xylenol Orange*

WANGXiao-ling,ZHANGPing,WANGHuan

(School of Vhemistry & Vhemical Engineering, Xianyang Normal University, Shaanxi Xianyang 712000, China)

A novel spectrophotometric method for the determination of erythromycin ethylsuccinate was established based on the charge transfer reaction between ethylsuccinate and xylenolorange in ethanol-salt water. The apparent molar absorptivity of the color compleex was 9.82×103L·mol-1·cm-1at 580 nm. The linear regression equation was y=1.245x-0.0598. Beers law was obeyed in the range of 200～600 μg/10 mL of erythromycin ethylsuccinate correlation coefficient was 0.9997. The method has high sensitivity, good selectivity and reproducibility for the determination of erythromycin ethylsuccinate in erythromycin ethylsuccinate tablets with RSD of 0.23%～0.75%, and recoveries between 99.0%～101%.

spectrophotometry; erythromycin ethylsuccinate; charge-transfer reaction; xylenol orange

陜西省科技廳科研項目(2012JQ2014)。

王曉玲(1964-)，女，高級工程師，大學(xué)本科，主要研究方向為光度分析和催化動力學(xué)分析。

O657.32

A

1001-9677(2016)07-0125-04