HPLC法測定葛酮通絡膠囊中葛根素含量*

李　靜，夏成凱，方成武1,

(1 安徽中醫(yī)藥大學，安徽　合肥　230001；2 亳州市食品藥品檢驗中心， 安徽　亳州　236800；3 亳州職業(yè)技術學院，安徽　亳州　236800)

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分析測試

HPLC法測定葛酮通絡膠囊中葛根素含量*

李靜1,2，夏成凱3，方成武1,3

(1 安徽中醫(yī)藥大學，安徽合肥230001；2 亳州市食品藥品檢驗中心， 安徽亳州236800；3 亳州職業(yè)技術學院，安徽亳州236800)

建立了高效液相色譜法測定葛酮通絡膠囊中葛根素的含量方法。采用Hypersil ODS2 C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動相：甲醇-水(35:65)；檢測波長：250 nm；柱溫：25℃；流速：1 mL·min-1；進樣量20 μL。結果表明：葛根素質量在0.24～1.18 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關系(r=0.9999)，葛根素的平均回收率為95.66%，RSD=1.41%(n=6)。結論：該方法操作便捷，準確可靠，重復性好，可以用于測定葛酮通絡膠囊中葛根素含量。

葛酮通絡膠囊；葛根素；高效液相色譜法；含量測定

葛酮通絡膠囊由葛根提取物等成分組成，具有活血化淤的作用。臨床上主要用于缺血性中風經(jīng)絡淤血痹阻脈絡證，具體癥狀可見半身不遂，口偏身麻木，舌歪斜，頭暈目眩，語言不利，頸項強痛等；同時還對動脈粥樣硬化性血栓性腦梗死和腔隙性腦梗塞具有較好的治療和預防效果。

該處方中主要為中藥葛根的提取物，由黃酮類成分組成，其中主要的黃酮類成分為葛根素。為了更準確、快速測定其含量，本文結合實際制備工藝并參考文獻[1]，通過高效液相色譜法測定葛酮通絡膠囊中葛根提取物中葛根素含量，并作為葛酮通絡膠囊質量標準制定的依據(jù)。

1　儀器與材料

1.1儀器

LC-10ATvp高效液相色譜儀，日本島津公司；SPD-10Avp紫外檢測器，日本島津公司；Hypersil ODS2 C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)色譜柱，日本島津公司；LCsolution Lite數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。

1.2材料

葛根素對照品(批號110752-201312)，中國藥品生物制品檢定研究院提供；甲醇(色譜純)，美國Fisher公司；純化水自制。

葛酮通絡膠囊，安徽九方藥業(yè)有限公司(每粒重0.5 g，批號140301、140302、140303、140304、140305、130430、130501、130601、121001、121203)。

2　方法與結果

2.1溶液的制備

2.1.1對照品溶液的制備

取葛根素對照品10 mg，精密稱定，置具25 mL容量瓶中，加30%乙醇溶解，搖勻；精密量取2 mL，置10 mL容量瓶中，加乙醇稀釋，制成每1 mL含葛根素 80 μg。

2.1.2供試品溶液的制備

取本品膠囊10粒，取出內(nèi)容物研勻，取粉末10 mg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50 mL甲醇，稱定質量，采用功率250W，頻率40 kHz超聲處理30 min，放冷，再稱定，補足重量，搖勻，即得。

2.1.3陰性對照品溶液的制備

本品主要由葛根素提取物為原料制備，取除葛根素提取物以外的物質，按制備要求，制成不含葛根素提取物的葛酮通絡膠囊陰性樣品，按照2.1.2項下供試品溶液制備項下的方法，制備葛酮通絡膠囊陰性對照溶液。

2.2色譜條件

色譜柱：Hypersil ODS2 C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動相：甲醇-水(35:65)；檢測波長：250 nm；柱溫：25℃；流速：1 mL·min-1；進樣量20 μL，理論板數(shù)按葛根素峰計算不少于2000。

2.3系統(tǒng)適應性實驗

分別精密稱取2.1.1、2.1.2、2.1.3項下溶液20 μL，在2.2色譜條件下，對照品、供試品中葛根素與其它組分均能達到基線分離R=2.86(R>1.5)，陰性對照品無其他色譜峰。見色譜圖1。

2.4線性關系的考察

精密吸取葛根素對照品溶液(每1 mL含葛根素 80 μg)3、6、9、12、15 μL，分別注入液相色譜儀中，測定其色譜峰面積積分值。以葛根素對照品進樣量(X)C(μg)為橫坐標，相應色譜峰面積積分值(Y)為縱坐標，繪制標準典線，并經(jīng)統(tǒng)計學處理，得回歸方程Y=4E+06X-300450(r=0.9999，n=6)，實驗表明：葛根素的量在0.24～1.18 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關系。

2.5陰性對照試驗

取葛根素陰性對照樣品，依法操作，進行液相色譜分析，結果表明其他成分對葛根素測定無干擾，見圖1。

圖1　葛酮通絡膠囊 HPLC 色譜圖

2.6精密度試驗

取供試品溶液，連續(xù)進樣5次，測其葛根素峰面積積分值，結果統(tǒng)計：相對標準偏差RSD=0.56%,小于2.0%，結果表明儀器精密度良好，結果見表1。

表1　精密度試驗結果

2.7重復性試驗

取同一批號的葛酮通絡膠囊，按含量測定的方法依法重復操作測定5次，測得葛根素的平均含量為73.5 mg/粒，相對標準偏差RSD=1.12%,本法重現(xiàn)性較好，結果見表2。

表2　重復性試驗

2.8穩(wěn)定性試驗

取供試品溶液，按含量測定下的方法進行制備供試品溶液，立即進行測定，并按照0，3，6，9，12，24 h，經(jīng)統(tǒng)計學處理，相對標準偏差RSD=1.12%(n=6)，結果樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好，結果見表3。

表3　穩(wěn)定性試驗結果

2.9加樣回收試驗

采用加樣回收法，取已知含量的同一批樣品，分別加入一定量的葛根素對照品，依法進樣測定，同法重復試驗6次，測定葛根素的平均回收率為95.66%，RSD=1.41%(n=6)，實驗表明：本法準確性較好,結果見表4。

表4　葛酮通絡膠囊中葛根素加樣回收試驗結果

2.10樣品中葛根素含量測定

取140301、140302、140303、140304、140305、130430、130501、130601、121001、121203，10個批號的葛酮通絡膠囊樣品，分別按照2.1.2項下供試品溶液的制備方法，制得10批供試品，按2.2項下色譜條件檢測，10批供試品中葛根素的含量結果見表5。

表5　樣品中葛根素含量測定結果

3　討　論

3.1提取方法的選擇

邱震、楊海麗等[2-3]根據(jù)葛根素的理化性質對其提取溶劑及提取時間進行了分析和選擇，利用超聲提取的方式并選擇甲醇作為提取溶劑，分別在15 min、30 min、45 min進行比較，結果發(fā)現(xiàn)30 min后雜質峰較少，故樣品處理選擇甲醇超聲30 min 后使用。

3.2最大吸收波長的選擇

以葛根素對照溶液在200～400 nm范圍進行光譜掃描測定，結果葛根素在(250±2) nm波長處有最大特征吸收，與文獻[4]一致，因此，選擇250 nm作為葛根素的測定波長。

3.3流動相的選擇

周翎、張元元等[5-6]比較了采用不同比例甲醇-水(35:65)、(24:76)和甲醇-0.1%磷酸溶液(26:74)作為流動相，結果為：當采用甲醇-水(35:65)作為流動相時，通過對葛根素分離度較好、保留時間拖尾因子等因素的考察最優(yōu)。

本實驗采用HPLC法測定葛酮通絡膠囊中葛根素含量，此法操作簡便、準確度高、重現(xiàn)性好，可作為該制劑的定量分析方法并為其質量控制提供依據(jù)。

[1]黃櫻華,黃月純,王祝斌,等．葛根骨康寧顆粒中葛根素的含量測定研究[J].中國藥師，2012，15(2):186-187.

[2]邱震,周正華,杜安全．HPLC法測定參蘇感冒片中葛根素的含量[J]．安徽醫(yī)藥，2007，11(1):29.

[3]楊海麗，李志浩．高效液相色譜法測定表虛感冒顆粒中葛根素的含量[J]．云南中醫(yī)學院學報，2013,36(6):39-41．

[4]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：1138-1139.

[5]周翎,許枬.HPLC法測定糖消片中葛根素的含量[J].遼寧中醫(yī)雜志，2007，34 (2)：212-213.

[6]張元元,李進,陳濤,等.暑熱寧合劑提取工藝優(yōu)化[J].中國實驗方劑學，2012,18 (24)：49-51.

Content Determination of Puerarin in Getongtongluo Capsules by HPLC*

LI Jing1,2,XIA Cheng-kai3,FANG Cheng-wu1,3

(1 Anhui University of Chinese Medicine,Anhui Hefei 230001; 2 Bozhou City Food and Drug Inspection Center,Anhui Bozhou 236800; 3 Bozhou Vocational and Technical college,Anhui Bozhou 236800,China)

The content of Puerarin in Getontongluo capsules was determined.HPLC was used to determine the content of Puerarin.A Hypersil ODS 2 C18(4.6 mm× 250 mm,5 μm) column was used.The mobile phase was methanol-water(35:65) and the detection wavelength was 250 nm.The injection volume was 20 μL and column temperature was kept at 25℃,he flow rate was 1 mL·min-1.Result showed that the calibration curve of Puerarin was in good linearity over the range of 0.24～1.18 μg(r=0.9999).The average recovery was 95.66% with RSD of 1.41%.The method is simple,accurate and reliable,it is suitable for the content determination of puerarin in getontongluo capsules．

Getontongluo capsules；Puerarin；HPLC；content determination

亳州市創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)領軍人才科研團隊(編號：亳組2014[21]號)；安徽省藥學專業(yè)教學團隊(2013jxtd067)。

李靜 (1982-)，女，主管藥師，2012級在職研究生，研究方向：中藥質量控制。

方成武，男，教授。E-mail:fangcw1961@sina.com

R284.1

A

1001-9677(2016)04-0078-03