不同溶劑絞股藍提取物清除自由基性能

王　蕾,甘美嬌,劉澤宏,王依楠,朱妙琴

(浙江外國語學院科技學院，浙江　杭州　310012)

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不同溶劑絞股藍提取物清除自由基性能

王蕾,甘美嬌,劉澤宏,王依楠,朱妙琴

(浙江外國語學院科技學院，浙江杭州310012)

分別以80℃水和25℃ 50%的乙醇溶液為提取溶劑,固液比1:30,以普通震蕩法提取絞股藍中黃酮類(包括兒茶素、原花青素)物質，紫外顯色法測定兩種提取液中黃酮類物質含量。結果表明：提取液中黃酮類物質含量分別為18.0 mg/g和6.00 mg/g，提取液溫度對絞股藍中黃酮類物質的提取效果影響較大。80℃水提取液比25℃ 50%的乙醇提取液清除DPPH自由基的能力更強;清除自由基能力與提取物中黃酮類物質含量并不完全呈正比。

絞股藍;黃酮類物質;清除自由基

絞股藍，又名七葉膽、五葉參、甘茶曼等，是屬于葫蘆科絞股藍多年生草本類植物。絞股藍含有絞股藍皂苷、糖類、黃酮類、氨基酸等[1-3]。研究表明，植物黃酮類物質具有較強的清除自由基能力和抗氧化活性，可使機體免受代謝過程中產生的自由基和過氧化物的損害。目前對于絞股藍黃酮、多糖提取以及藥理研究較多[4-5]，但對于不同溶劑的絞股藍黃酮類提取物清除自由基性能比較研究不多。作者分別以80℃純水(模擬人們喝茶溫度)和25℃ 50%的乙醇為提取溶劑，用普通震蕩法對絞股藍中黃酮類物質進行提取和分析，并對兩種方法的提取物清除DPPH自由基性能進行了量效研究，以期為絞股藍提取物的經濟提取及利用提供參考依據。

1　儀器與材料

HY-3A多功能振蕩器，江蘇金壇市金南儀器廠；UV-2550PC紫外可見分光光度計，日本。

絞股藍，產自浙江麗水。將絞股藍60℃烘干，粉碎過40目篩，樣品密閉避光保存，備用。蘆丁對照品,二苯基苦基苯肼(DPPH),其他試劑均為分析純。

2　方法與結果

2.1絞股藍中黃酮類物質的提取

[6-8]的提取方法。準確稱取1.0 g的絞股藍樣品，于250 mL錐形瓶中,分別加入30 mL 80℃的蒸餾水和30 mL 25℃ 50%的乙醇溶液(固液比1:30)，設置一定溫度浸取10 min，置于多功能振蕩器上振蕩30 min，抽濾得提取液，密閉、避光儲存,備用。

2.2蘆丁標準曲線的制作

準確吸取不同體積的蘆丁標準溶液于7支25.00 mL比色管中，加入5%亞硝酸鈉溶液1.0 mL，10%硝酸鋁溶液1.0 mL混勻，室溫靜置6 min，最后加入4%氫氧化鈉溶液10 mL，蒸餾水定容至25.00 mL，室溫靜置15 min，510 nm波長處測得其吸光度，繪制A-C標準曲線。

如圖1所示，得線性回歸方程:y=12.162x+0.0002,R=0.9993。

圖1　蘆丁溶液的標準曲線

2.3提取液中黃酮類物質含量的測定

參考文獻[9]測定提取液中總黃酮含量。分別用吸量管準確吸取50%乙醇絞股藍提取液和80℃水絞股藍提取液各1 mL于25 mL比色管中，加入5%亞硝酸鈉溶液1 mL混勻，室溫靜置6 min，然后加入10%硝酸鋁溶液1 mL混勻，室溫靜置6 min，最后加入4%氫氧化鈉溶液10 mL，加蒸餾水定容至25.00 mL，室溫靜置15 min，510 nm波長處測得其吸光度分別為0.1473和0.4390。由線性回歸方程知，25℃ 50%乙醇絞股藍提取液和80℃水絞股藍提取液中黃酮類物質的濃度分別為0.012 mg/mL和0.036 mg/mL。計算得到兩種不同絞股藍提取液中黃酮的含量分別為0.6%和1.8%，即6.00 mg/g和18.0 mg/g。

2.4提取液清除DPPH自由基的能力與黃酮類物質量效關系

在1號試管中依次加入2.5 mL 6.5×10-5mol/L DPPH溶液和1.5 mL體積分數為50%的乙醇溶液,純水稀釋至10.00 mL,混勻,室溫靜置20 min,于517 nm處測定其吸光度記為A0，在2號和3號試管中分別加入2.5 mL 6.5×10-5mol/L 的DPPH溶液和相同體積的兩種絞股藍提取液,純水稀釋至10.00 mL混勻,室溫靜置20 min后,于517 nm處測定其吸光度記為As1和As2；在4號和5號試管中分別加入2.5 mL 50%的乙醇溶液和等體積的兩種絞股藍提取液,純水稀釋至10.00 mL混勻，室溫靜置20 min,于517 nm處測定其吸光度記為Ar1和As2。

按以下公式計算提取液對DPPH自由基的清除率，結果見表1，表2。

消除率

從表1可以看出：80℃水絞股藍提取液對DPPH自由基有清除效果，且效果很明顯。測定液中黃酮類物質含量在 0.09～0.27 mg/10 mL范圍內對DPPH清除率隨濃度上升明顯提高。但當測定液中黃酮類物質濃度達到0.36 mg/10 mL時,清除率逐漸降低。這與有關報道相符[10-11]，一些天然抗氧化劑在高濃度時會表現促氧化作用，對自由基清除能力下降。

表2　50%乙醇絞股藍提取液對DPPH自由基的消除率

從表2可以看出：25℃ 50%乙醇絞股藍提取液對DPPH自由基有清除效果，測定液中黃酮類物質濃度0.15 mg/10 mL時，清除率可達40.70%。測定液中黃酮濃度在 0.03～0.15 mg/10 mL范圍內對DPPH清除率隨濃度上升而提高。比較表1和表2可以看出，80℃水絞股藍提取液比50%乙醇絞股藍提取液對DPPH自由基的清除效果明顯要好。說明提取液溫度對提取效果影響明顯；隨著提取液溫度升高，絞股藍中水溶性黃酮類物質含量較多。

3　結　論

以80℃純水和25℃ 50%的乙醇溶液為提取溶劑，以普通震蕩法提取絞股藍中黃酮類(包括兒茶素、原花青素)物質，80℃純水提取液中黃酮類物質含量較25℃ 50%的乙醇溶液高得多，說明提取液溫度對黃酮類物質提取效果影響較大。固液比均為1:30的80℃純水絞股藍提取液比25℃ 50%的乙醇溶液絞股藍提取液，清除DPPH自由基能力明顯要好。說明80℃水絞股藍提取液中水溶性黃酮類物質含量較多，符合人們平時喝茶保健習慣。清除自由基能力與提取物中黃酮類物質含量并不完全呈正比。因此，食品工業生產過程提取絞股藍中黃酮類物質，可以用75～80℃普通純水作為提取溶劑，既節約提取成本也便于規模化生產。

參考文獻

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[11]姜麗燕.三類天然抗氧化劑的化學研究[D].杭州:浙江大學,2011.

Ability of Free Radical Scavenging by Different Gynostemma Extracts

WANG Lei，GAN Mei-jiao，LIU Ze-hong，WANG Yi-nan，ZHU Miao-qin

(School of Science and Technology，Zhejiang International Studies University，Zhejiang Hangzhou 310012，China)

To optimize the extracting total flavonoids,80℃ water and 25℃ 50% ethanol were used to extract the flavanolin Gynostemma,include catechin and polyprocyanidin.The contents of flavanols were determined in two extracts.The contents of flavanol were 18.0 mg/g by 80℃ water and 6.00 mg/g by 50% ethanol.The 80℃ water was batter than 50% ethanol on extracting the contents of flavanol in Gynostemma.The 80℃ water extracts were more batter on scavenging of DPPH (1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl) than 50% ethanol.It was no effective on free radical scavenging activity to contents of flavanols.

Gynostemma;flavanol;free radical scavenging

王蕾(1994-)，女；甘美嬌(1994-)，女；劉澤宏(1994-)，男；王依楠(1994-)，女;分別為浙江外國語學院科學技術學院化學系2012級，2013級學生。

朱妙琴(1963-)，女，教授，理學碩士，主要從事天然藥植物有效成分提取與應用研究。

TQ914.1

B

1001-9677(2016)04-0061-02