不同營(yíng)養(yǎng)液配方對(duì)山葡萄幼苗生長(zhǎng)的影響

王紅霞，廉 博

(呼倫貝爾市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣服務(wù)中心，內(nèi)蒙古海拉爾 021008)

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不同營(yíng)養(yǎng)液配方對(duì)山葡萄幼苗生長(zhǎng)的影響

王紅霞，廉 博

(呼倫貝爾市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣服務(wù)中心，內(nèi)蒙古海拉爾 021008)

[目的] 研究山葡萄嫩莖段愈傷組織離體培養(yǎng)最佳配方。[方法]以山葡萄優(yōu)良母株新生枝條嫩梢為外植體，觀察山葡萄在IAA和NAA不同濃度下芽的分化、繼代與生根情況。[結(jié)果]在相同條件下，不同濃度IAA和NAA對(duì)山葡萄的芽分化、繼代與生根影響顯著。芽分化NAA濃度為0.05 mg/L的時(shí)候效果最好，愈傷組織中等，分化出的芽較多。繼代IAA濃度為 0.10 mg/L的時(shí)候效果最好，生長(zhǎng)旺盛，繁殖倍數(shù)較高。生根NAA濃度為 0.10 mg/L的時(shí)候效果最好，根粗壯，生根率高。[結(jié)論]該研究結(jié)果可為山葡萄離體培養(yǎng)奠定基礎(chǔ)。

山葡萄；IAA；NAA；芽分化

山葡萄是葡萄科葡萄屬落葉藤本植物，其含有豐富的碳水化合物、蛋白質(zhì)、維生素和礦物質(zhì)，生食可口，味酸甜，富含漿汁，是美味的山間野果[1]。山葡萄可作為葡萄酒釀造的原料，用其所釀的葡萄酒深紅艷麗，風(fēng)味品質(zhì)甚佳。我國(guó)自20世紀(jì)50年代開(kāi)始研究山葡萄人工馴化栽培并獲得成功。山葡萄苗木常規(guī)的繁殖方法有嫁接繁殖、壓條繁殖和扦插繁殖，但嫁接繁殖受接穗來(lái)源限制，壓條繁殖系數(shù)低，扦插繁殖不易生根[2]。筆者擬采用組織培養(yǎng)的手段來(lái)繁殖和培育山葡萄[3-10]，篩選出適合的培養(yǎng)基，以期為山葡萄進(jìn)一步快繁和大規(guī)模工廠化繁殖提供有效途徑。

1　材料與方法

1.1材料以野生山葡萄為材料，取其優(yōu)良母株新生枝條嫩梢作為外植體材料。

1.2方法

1.2.1外植體消毒。于2014年5月18日在中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院組培實(shí)驗(yàn)室對(duì)野生山葡萄優(yōu)良母株新生枝條嫩梢進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)試驗(yàn)，先用清水洗去外植體表面的殘留，再浸泡1～2 h，裝到無(wú)菌瓶中，放到無(wú)菌工作臺(tái)上，用70%酒精浸泡15 s，無(wú)菌水沖洗2～3次，用0.1%HgCl2進(jìn)行表面消毒8～10 min，無(wú)菌水沖洗4～5次，在無(wú)菌條件下剝?nèi)[片與幼葉，切取0.3～0.5 m長(zhǎng)的莖尖，接種于培養(yǎng)瓶中。

1.2.2培養(yǎng)條件。基本培養(yǎng)基為MS，加20 g/L蔗糖、720 g/L瓊脂，pH 5.6～5.8，培養(yǎng)溫度24 ℃，每日光照16 h，光強(qiáng)2 000 lx，濕度70%～80%。

1.3試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.3.1不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)。 該試驗(yàn)設(shè)4個(gè)處理：I.1/2 MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.010 mg/L +LH 100 mg/L；II.1/2 MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.005 mg/L +LH 100 mg/L；III.1/2 MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.020 mg/L +LH 100 mg/L；IV.1/2 MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.050 mg/L +LH 100 mg/L，每個(gè)處理重復(fù)3次，每次重復(fù)20瓶，每瓶接6個(gè)外植體。

為了促進(jìn)愈傷組織的形成和芽分化，可將接種于培養(yǎng)基I～I(xiàn)V上的外植體先放置于黑暗中處理48～60 h，然后置于2 000 lx光照下，經(jīng)35～40 d愈傷組織誘導(dǎo)出芽。

1.3.2繼代培養(yǎng)。該試驗(yàn)設(shè)4個(gè)處理：V.1/2 MS+6-BA 0.5 mg/L +IAA 0.10 mg/L +GA 30.2 mg/L；VI.1/2 MS+6-BA 0.5 mg/L +IAA 0.05 mg/L +GA 30.2 mg/L；VII.1/2 MS+6-BA 0.5 mg/L +IAA 0.20 mg/L +GA 30.2 mg/L；VIII.1/2 MS+6-BA 0.5 mg/L +IAA 0.50 mg/L +GA 30.2 mg/L，每個(gè)處理重復(fù)3次，每次重復(fù)20瓶。將高5 cm以上的山葡萄試管苗切段(帶1～2個(gè)側(cè)芽)接種于繼代培養(yǎng)基V～VIII上進(jìn)行繼代增殖。當(dāng)芽分化較多時(shí)，會(huì)影響莖的伸長(zhǎng)，成苗率會(huì)降低，此時(shí)宜先將叢生芽切下接種于繼代培養(yǎng)基上，使其成苗后再進(jìn)行切段培養(yǎng)。

1.3.3生根培養(yǎng)。選擇NAA和IAA作為誘導(dǎo)生根的因素，該試驗(yàn)設(shè)5個(gè)處理：IX.1/2 MS+NAA 0.10 mg/L；X.1/2 MS+NAA 0.20 mg/L；XI.1/2 MS+NAA 0.05 mg/L；XII.1/2 MS+IAA 0.10 mg/L；XIII.1/2 MS+IAA 0.05 mg/L，每個(gè)處理重復(fù)3次，每次重復(fù)20瓶。

在繼代培養(yǎng)中，切下莖段可接種于生根培養(yǎng)基IX～XIII上進(jìn)行生根培養(yǎng)。

1.4調(diào)查指標(biāo)及方法接種后，每隔5～8 d觀察并統(tǒng)計(jì)愈傷組織分化情況，生根數(shù)、生根率、根生長(zhǎng)等指標(biāo)。

2　結(jié)果與分析

2.1芽分化情況由表1可知，接種于培養(yǎng)基IV上的莖尖，愈傷組織中等，平均分化出芽5.0個(gè)；接種于培養(yǎng)基I上的莖尖，愈傷組織較大，平均分化出芽0.5個(gè)；接種于培養(yǎng)基III上的莖尖，愈傷組織過(guò)大，平均分化出芽1.5個(gè)；接種于培養(yǎng)基II上的外植體形成愈傷組織很小，外植體啟動(dòng)困難，沒(méi)有分化出芽。

表1不同營(yíng)養(yǎng)液配方對(duì)芽分化的影響

Table 1Effects of different nutrient solution formulas on the bud differentiation ofV.amurensis

培養(yǎng)基Medi-um芽分化情況Buddifferentiation愈傷組織情況CallusI++ 較大II- 無(wú) III+ 過(guò)大IV++++中等

注：- 沒(méi)有生長(zhǎng)；+生長(zhǎng)緩慢；++生長(zhǎng)較顯著；++++生長(zhǎng)旺盛。

Note：-，+，++，and ++++ mean not growing，growing slowly，growing obviously，and growing luxuriantly respectively.

2.2莖段增殖從生長(zhǎng)情況看，接種于培養(yǎng)基V上莖段或芽生長(zhǎng)快，且同時(shí)生出粗壯根系，根與莖同時(shí)生長(zhǎng)，苗形態(tài)正常，生長(zhǎng)健壯，繁殖系數(shù)可達(dá)3.5～4.0；接種于培養(yǎng)基VII上的莖段或芽也長(zhǎng)出較多根系，生長(zhǎng)情況較好；接種于培養(yǎng)基VIII上的莖段或芽生長(zhǎng)較差，繁殖系數(shù)較低。

表2不同營(yíng)養(yǎng)液配方對(duì)莖段生長(zhǎng)情況的影響

Table 2Effects of different nutrient solution formulas on the growth ofV.amurensis

培養(yǎng)基Medium生長(zhǎng)情況Growthstate繁殖系數(shù)ReproductioncoefficientV++++3.5～4.0VI+ 無(wú)VII+++ 2.0～3.0VIII++ 1.0～2.0

注：- 沒(méi)有生長(zhǎng)；+生長(zhǎng)緩慢；++生長(zhǎng)較顯著；++++生長(zhǎng)旺盛。

Note：-，+，++，and ++++ mean not growing，growing slowly，growing obviously，and growing luxuriantly respectively.

2.3生根情況從生根情況看，以接種于培養(yǎng)基X上的莖段生根最多，但根細(xì)長(zhǎng)，試管苗移栽時(shí)不易成活；接種于培養(yǎng)基XI、XII和XIII上的莖段生根數(shù)較少，根細(xì)弱；接種于培養(yǎng)基IX上的莖段生根數(shù)適中，根粗壯，生根率也高，該培養(yǎng)基為最佳配方，即莖段生根以1/2 MS+NAA 0.10 mg/L為宜。

表3不同營(yíng)養(yǎng)液配方對(duì)生根情況的影響

Table 3Effects of different nutrient solution formulas on the root growth ofV.amurensis

培養(yǎng)基Medium生根數(shù)Numberofroots∥條生根率Rootingrate∥%生長(zhǎng)情況GrowthstateIX3～7100粗壯X10以上85細(xì)長(zhǎng)XI2～575細(xì)長(zhǎng)或粗壯XII2～370細(xì)、短XIII1～245細(xì)、短

3　結(jié)論

用莖尖組織培養(yǎng)方法進(jìn)行山葡萄快速繁殖，可保持品種優(yōu)良性狀，縮短推廣時(shí)間。在進(jìn)行莖尖誘導(dǎo)時(shí)，6-BA單獨(dú)使用效果要好。在1/2 MS+6-BA l.0 mg/L+NAA 0.050 mg/L+LH 100 mg/L培養(yǎng)基中，愈傷組織中等，分化出的芽較多。為了提高莖尖成活率，可適當(dāng)將莖尖切至0.5～1.0 mm，但莖尖切取過(guò)大，繁殖系數(shù)會(huì)降低。繼代培養(yǎng)以1/2 MS+6-BA 0.5 mg/L+IAA 0.10 mg/L+GA 30.2 mg/L(肌醇用量為50 mg/L)為宜，此時(shí)生長(zhǎng)旺盛，繁殖系數(shù)較高。生根培養(yǎng)以1/2 MS+NAA 0.10 mg/L為宜，此時(shí)根粗壯，生根率高。繼代培養(yǎng)和生根培養(yǎng)同時(shí)進(jìn)行，這樣可縮短試管苗培養(yǎng)時(shí)間，移栽易成活，繁殖系數(shù)一般很高。

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Influences of Different Nutrient Solution Formulas on Seedling Growth ofVitisamurensisRupr.

WANG Hong-xia, LIAN Bo

(Hulunbeir Agricultural Technology Extension and Service Center, Hailar, Inner Mongolia 021008)

[Objective] To discuss the optimum formula for the in vitro culture of tender stem callus ofVitisamurensisRupr. [Method] Newborn branch tops of good maternal plants ofV.amurensiswere used as explants, and the bud differentiation, subculture and root growth ofV.amurensiswere analyzed under different concentrations of IAA and NAA. [Result] Under the same conditions, different concentrations of IAA and NAA had obvious effects on the bud differentiation, subculture and root growth ofV.amurensis. When NAA concentration was 0.05 mg/L, callus was moderate, and there were more buds. As IAA concentration was 0.10 mg/L, it grew well, and the breeding rate was high. When NAA concentration was 0.10 mg/L, its roots were thick, and the rooting rate was high. [Conclusion] The study can lay the foundation for the in vitro culture ofV.amurensis.

VitisamurensisRupr.; IAA; NAA; Bud differentiation

王紅霞(1981-)，女，內(nèi)蒙古烏蘭察布人，農(nóng)藝師，從事農(nóng)業(yè)推廣工作。

2016-05-09

S 663.1

A

0517-6611(2016)19-263-02