關于男性生育力的人精子頂體內頂體蛋白酶和透明質酸酶作用解析

李林　吳勵梅　羅一平　田小燕　李彩英　徐妙容（廣東省佛山市順德區第一人民醫院生殖健康與不孕科　佛山528300）

關于男性生育力的人精子頂體內頂體蛋白酶和透明質酸酶作用解析

李林吳勵梅羅一平田小燕李彩英徐妙容
（廣東省佛山市順德區第一人民醫院生殖健康與不孕科佛山528300）

目的：解析精子透明質酸酶（HYD）和精子頂體蛋白酶（ACE）在男性生育力中所起的作用。方法：以不育者為實驗組，以來我院檢查身體的健康正常生育男性為對照組，用明膠底物膜法對精子樣本檢驗，并進行組間對比。結果：實驗組精子畸形率較高，ACE陽性率、活性強度、HYD陽性率、活性強度均低于對照組，且精子密度及活性與上述指標呈正相關（P＜0.05）。結論：HYD 及ACE在男性生育能力中起到至關重要的作用。

男性生育力；精子；ACE；HYD

有研究認為精子透明質酸酶（HYD）和精子頂體蛋白酶（ACE）與男性生育能力相關，但其具體所起的作用卻未經證實［1～2］。本研究采用細胞染色技術對不育癥患者精液樣本進行觀察，并通過與正常人的精液比較來探討其作用?，F報道如下：

1　資料與方法

1.1臨床資料本研究選取2013年4月～2015年9月期間在我院生殖健康與不孕科就診的不育癥患者為實驗組，同時以身體健康正常生育男性為對照組。診斷標準：前向運動（PR）級精子百分率＞32%、精子密度＞15×106/ml為正常［3］。納入標準：已婚且有1年以上同居經歷；夫妻性生活正常；處在正?？缮挲g范圍內（本研究選取24～35歲患者）。排除標準：因女方原因導致不育。經納入、排除后共選入對象70例。實驗組20例，年齡24～35歲，平均年齡（29.32±2.16）歲，按精子活動率和精子密度各分為三組。對照組50例，年齡24～35歲，平均年齡（29.15±2.09）歲。兩組一般資料對比，無明顯差異（P＞0.05），具有可比性。

1.2方法用明膠底物膜法對精子樣本進行檢驗，對比正常男性與不育者精子樣本差異，分析人精子頂體蛋白酶與透明質酸酶的作用。研究對象需要禁欲3～7 d，采用手淫法取精液，全部收集于干燥無菌取精杯中，放置37℃恒溫箱內孵育，待液化后精液樣本處理。通過人工鏡檢法準確計數精子畸形率、活動率、密度。移取精液于15 ml錐形管內，相對離心力900 g離心10 min，將精漿上層去除，用磷酸鹽緩沖液（PBS）對沉淀物洗滌，用2倍體積的PBS將洗滌后的沉淀物懸浮，取1～2滴懸浮液，滴于明膠膜片上，保持溫度在37℃恒溫內3 h，干燥后涂片、孵育、對其進行觀察。

HYD檢測法：在0.2 mol/L的醋酸-醋酸鈉緩沖液中放入藥盒底膜片，緩沖液PH值為4，保持20 min，以矯正PH值。將以上的PBS精子懸浮液取1～2滴在藥盒底膜片上涂抹，并放在溫度為37℃的恒濕恒溫箱中孵育。孵育3 h后取出，并在室溫下進行干燥，干燥后置于普通光鏡下對孵育結果觀察。ACE檢測法：把藥盒底膜片放入巴比妥鈉醋酸緩沖液當中，10 s后取出，進行干燥處理。干燥后將精子PBS懸浮液均勻鋪開在底膜片上1～2滴，放于溫度為37℃的恒溫恒濕箱當中孵育，于2 h后取出，并在室溫下做干燥鏡檢［4］。

觀察組患者根據精子密度不同進一步分組，其中M1組精子濃度＞40×106/ml，M2組精子濃度15～40×106/ml，M3組精子濃度＜15×106/ml。同時，根據精子活動率不同進一步分組，其中H1組PR＞50%，H2組PR32%～50%，H3組PR＜32%。

1.3評定標準［5～6］本次實驗檢測用顯微鏡型號均為Leica DME，一般檢測所用視野六個左右即可，隨即選取200個精子頭部對其進行觀察檢測。檢測結果顯示其頭部周圍存在不同程度的暈環情況即可判定為HYD或ACE陽性。確定陽性后，醫護人員需要選取專業合理的測微尺測量精子頭部周圍暈環的直徑，整理分析不同測量數據，最終得出平均值，根據該數值能夠對HYD或ACE的活性強度進行判定。

1.4觀察指標主要對兩組患者的精子密度及活性指標進行觀察，同時觀察分析實驗組患者精子密度與ACE和HYD及精子活動率與ACE和HYD之間的關系。

1.5統計學方法將所有研究數據納入SPSS19.0軟件，計量資料以（±s）表示，用t檢驗；計數資料以率（%）表示，用χ2檢驗。判定統計學差異的標準為P＜0.05。

2　結果

2.1健康人與不育患者的精子密度及活性相關指標比較HYD陽性率、活性強度及ACE陽性率和活性程度比較，實驗組低于對照組，而精子畸形率比較，則實驗組較高，P＜0.05。見表1。

表1　實驗組與對照組精子密度及活性指標比較（±s）

表1　實驗組與對照組精子密度及活性指標比較（±s）

注：與對照組相比，*P＜0.05。

組別　n　HYD活性強度（μm）　HYD陽性（%）　精子畸形率（%）　ACE活性強度（μm）　ACE陽性（%）實驗組對照組20 50 tP 28.31±17.32*49.21±17.25 11.359 0.015 37.25±15.32*76.35±9.26 20.315 0.001 53.30±10.22*42.15±6.31 12.580 0.021 27.02±12.31*46.21±7.98 19.214 0.002 44.01±7.32*84.02±8.51 20.145 0.001

2.2不同精子密度下的相關指標比較相比對照組而言，精子密度越低則ACE及HYD陽性和活性相關指標越低，組間對比均經統計學驗證證實，P＜0.05。見表2。

表2　精子密度為因變量下的相關指標比較±s）

表2　精子密度為因變量下的相關指標比較±s）

注：與對照組相比，*P＜0.05。

組別　n　ACE陽性（%）ACE活性強度（μm）HYD陽性（%）HYD活性強度（μm）M1組M2組M3組對照組9655 0 55.25±12.64*39.25±6.20*29.49±5.21*84.02±8.51 38.52±17.25*22.34±5.01*11.94±2.64*46.21±7.98 52.31±10.34*35.35±7.89*12.42±72.25*76.35±9.26 39.80±12.45*21.63±8.65*15.65±3.42*49.21±17.25

2.3不同精子活動率下的相關指標比較相比對照組而言，精子活動率越低則ACE及HYD陽性和活性相關指標越低，組間對比均經統計學驗證證實，P＜0.05。見表3。

表3　精子活動率為因變量下的相關指標比較（±s）

表3　精子活動率為因變量下的相關指標比較（±s）

注：與對照組相比，*P＜0.05。

組別　n　ACE陽性（%）ACE活性強度（μm）HYD陽性（%）HYD活性強度（μm）H1組H2組H3組對照組10 555 0 51.14±12.32*40.25±6.21*33.51±5.23*84.02±8.51 38.52±17.25*22.34±5.21*12.97±2.65*46.21±7.98 47.25±15.02*29.35±7.54*25.15±76.25*76.35±9.26 37.31±15.32*22.98±3.65*15.65±3.42*49.21±17.25

3　討論

HYD在精子頂體內酶組中發揮重要作用，其細胞顆粒在卵泡附近呈分散式分布，能促使精子通過。并利用相關酶系以及其他頂體蛋白酶，在配合作用下創造適宜于精子和卵子結合的環境條件［7］。在當前醫學界對人體微觀認知中，酶共有24種，除了HYD之外，另一種重要的酶就是ACE。ACE在精子獲能時形成透明帶，并與HYD相配合促進精子通過。所以兩者均成為對精子活性進行評價的有效指標。加之兩者之間的配合關系，對HYD和ACE進行協同檢測則能通過綜合反饋的信息，對男性生育能力做出準確的評估［8］。另外，精子內含HYD及ACE數量可以通過其頭部亮環進行觀察而得出，一般來說亮環亮度越強、范圍越大則HYD及ACE數量也就越多，并且酶活性越高。

本次研究證實，ACE和HYD指標均能有效反應男性生育能力，通過兩者綜合測量能在常規檢查的基礎上提高診斷準確率。從研究結果中發現，男性不育癥患者精子畸形率較高，并且HYD陽性率、活性強度及ACE陽性率和活性程度比較結果顯示實驗組低于對照組。相比對照組而言，精子密度越低則ACE及HYD陽性和活性相關指標越低。精子活動率越低則ACE及HYD陽性和活性相關指標越低。綜上所述，HYD及ACE在男性生育能力中起到至關重要的作用，在對因不育的男性患者進行臨床檢查時，應采取ACE及HYD協同檢測方法，以加強診斷的及時性和準確性。

［1］馬曉萍，高曉勤，楊燕平，等.人精子頂體內頂體蛋白酶和透明質酸酶對男性生育力的影響［J］.檢驗醫學，2014，29（3）:258-261

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［5］鐘志敏，王維，莫云丹，等.血清頂體蛋白酶抗體與精子蛋白17抗體對不孕不育癥的臨床價值探討［J］.檢驗醫學，2013，28（4）:276-279

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R698.2

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10.13638/j.issn.1671-4040.2016.05.012

2016-04-18）