張樹虎
(北方交通大學附屬中學 北京 100081)
人教版高中生物學教材《遺傳與進化》第3章第3節(jié)“DNA的復制”(第一課時)“探究DNA的復制方式”主要闡述遺傳信息傳遞的方式,是“DNA分子的結(jié)構(gòu)”內(nèi)容的延續(xù),是遺傳分子基礎部分的重點內(nèi)容之一,是繼續(xù)學習遺傳信息表達和遺傳信息在生物學大分子間的流動(中心法則),以及遺傳信息傳遞規(guī)律的必要基礎。教學內(nèi)容包括對DNA分子復制的推測、DNA半保留復制的實驗證據(jù)。其中DNA半保留復制的實驗證據(jù)列為選學內(nèi)容,但作為體驗生物學實驗思想和進行科學研究方法教育的良好載體,在教學中不容忽略。可通過引導學生層層探究,從而得出實驗結(jié)論,同時感受科學探究的魅力,并再次體驗“假說—演繹法”的應用。
2.1 知識目標 概述DNA分子復制的條件、方式;認同 DNA 雙螺旋結(jié)構(gòu)模型對探究 DNA分子復制方式的指導意義。
2.2 能力目標 能夠運用“假說-演繹法”分析探究DNA復制方式的實驗過程和思路。
2.3 情感態(tài)度與價值觀目標 體驗科學家嚴謹?shù)奶骄克季S和科學研究的方法,培養(yǎng)積極探索的精神和科學嚴謹?shù)膽B(tài)度。
3.1 導入 在1953年以前,基因的物質(zhì)本性一直是困擾著全世界生物學家的問題。1953年4月25日英國《自然》雜志發(fā)表了沃森和克里克“DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)模型”,闡述了DNA分子的雙螺旋結(jié)構(gòu)模型,反映了DNA分子可能具有的無窮多樣性。在這篇文章的結(jié)尾處提出了DNA分子復制的可能機制,使生物學家一下子接受了基因的物質(zhì)本質(zhì)就是DNA。那么DNA果真是一種能自我復制的分子嗎?請同學們根據(jù)資料提出你想解決的問題。
教師預設問題:沃森和克里克認為DNA能復制是基于眾多實驗結(jié)果為依據(jù)嗎?(DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)模型是以眾多的實驗結(jié)果為依據(jù),而DNA的復制僅僅是根據(jù)DNA分子的結(jié)構(gòu)特點對DNA能夠復制一種推測,并沒有實驗證據(jù)的支持)
設計意圖:以講故事的形式導入,抓住學生的思維,使他們順利進入科學探究的狀態(tài)。讓學生根據(jù)資料發(fā)現(xiàn)問題、提出問題并解答問題。學生通過學習能夠認識到生物學的探究是由問題需求緣起的;能夠基于生命現(xiàn)象提出可以探究的問題。教師依據(jù)材料引出本節(jié)的學習內(nèi)容和學習目標,告知學生學習的重點難點。
3.2 確立探究課題——提出問題 確立探究課題要想探究DNA分子的復制方式,必須先了解DNA可能有哪些復制方式。教師首先創(chuàng)設情境:1953 年沃森和克里克又發(fā)表了第2篇論文,提出了DNA復制的假說。文中有這樣一段話:“我們的 DNA 模型實際上是一對模板,每一模板與另一個互補。我們設想:在復制前氫鍵斷開,兩條鏈松開、分離,然后每條鏈作為形成自己新鏈的模板,最后我們從原先僅有的一對鏈得到了兩對鏈,而且準確地復制了堿基序列?!眴栴}:你能根據(jù)沃森和克里克的“假說”將DNA復制1次后的結(jié)果畫出來嗎?分組畫圖,小組推選代表展示。
這真是個天才的預測!這個模型曾被人們懷疑(沃森和克里克自己也懷疑),因為最大問題就是“雙鏈是如何打開的?”。研究者為了避開“如何打開雙鏈”這個難題,提出了全保留復制和彌散(分散)復制(即親代的雙鏈被切成雙鏈片段,復制完成后,“新舊”DNA 同時存在于同一條鏈中,這種復制機制被認為可以避免雙鏈 DNA 解旋的問題。)2個模型。請同學們大膽猜想并分組討論,嘗試畫出示意圖(彌散復制方式也可以暫時不提)。
結(jié)合學生的討論結(jié)果,教師PPT展示(或者小組推選代表到黑板上畫,或者投影展示各小組最佳圖案)DNA可能的復制方式,學生判斷是哪一種復制方式。
尋找證據(jù),小組討論實驗設計的思路。預設問題:①半保留復制方式與另外兩種復制方式的區(qū)別關鍵在哪里?(母鏈是否與子鏈“結(jié)合”構(gòu)成DNA分子)②DNA分子是肉眼看不見的,那么通過哪種方法可以直觀區(qū)別母鏈或子鏈?(同位素標記法,如15N )。③同位素標記會使由不同鏈組成的DNA分子在密度上有一些差異,如何將組成不同的DNA分子區(qū)分開?學生討論后,提出用“密度梯度離心”的方法。
利用原核生物證明DNA的復制是半保留復制的實驗,師生共同分析科學家梅塞爾森(M.Meselson)和斯特爾(F.W .Stahl)的實驗思路:將已被15N標記的大腸桿菌置于14N的培養(yǎng)液中培養(yǎng),在細胞分裂第1次和第2次之后分別提取DNA進行密度梯度離心,觀察子代DNA在離心管中的分布情況。
教師引導學生分析,親代DNA的母鏈只含有15N,新合成的DNA子鏈只含有14N,所以15N鏈代表母鏈,14N鏈代表子鏈。提取大腸桿菌DNA后進行密度梯度離心,可將不同鏈組成的DNA分開。
為了更好地理解實驗過程,教師以標記DNA分子中的N元素為例,分析用重帶、中帶、輕帶表示DNA分子的雙鏈構(gòu)成,觀察密度梯度離心后的實驗結(jié)果。若DNA兩條鏈都被15N標記(用15N/15N表示),密度最大,離心后最靠近試管底部;若DNA只有一條鏈被15N標記(用15N/14N表示),其密度居中,位置也居中;若兩條鏈都未被15N標記(用14N/14N表示),密度最小,離心后離試管底部最遠。
設計意圖:根據(jù)問題設計探究方案,并認識不同類型的問題有不同的探究方法,正確解讀科學史上的經(jīng)典實驗。
3.3 作出假設,演繹推理,判斷預期結(jié)果 教師引導學生分析,DNA分子如果進行半保留復制,則15N鏈(母鏈)會與14N鏈(子鏈)結(jié)合構(gòu)成14N/15N-DNA;如果進行的是全保留復制,則只出現(xiàn)15N/15N-DNA和14N/14N-DNA,而不會出現(xiàn)14N/15N-DNA。密度梯度離心后,由于2條鏈都含有15N的DNA密度較大,分布在離心管底部;只有一條鏈含有15N的DNA密度稍小,分布在離心管中部;2條鏈都含有14N的DNA密度最小,分布在離心管的上部[1]。
根據(jù)提出的假說,采取小組討論的方法,小組推選代表展示討論結(jié)果(表1)。教師根據(jù)學生的實際情況,可指導學生先畫圖,隨后教師PPT分步展示“演繹”過程。

表1 DNA的復制方式假說-演繹與預期結(jié)果
3.4 實驗檢驗,觀察、比較實驗結(jié)果,得出結(jié)論 視頻展示資料一:1958年,梅塞爾森和斯特爾的大腸桿菌DNA密度梯度離心實驗。學生觀看視頻;教師設問:①為什么選用大腸桿菌為實驗材料?(分裂快,結(jié)構(gòu)簡單、DNA易提取)②為何選擇15N 作為 DNA 分子的標記元素?32P 和14C是否也可以作為標記元素?(15N 標記位置的是含氮堿基這樣使15N-DNA和14N-DNA及15N14N-DNA的密度不同)③復制后的DNA分子通常是隨機混合在一起的,不易分離。梅塞爾森和斯特爾如何解決這個難題?(通過密度梯度離心將親本鏈和子代鏈區(qū)分開來)④使用CsCl進行密度梯度離心能夠?qū)⒉煌芏鹊?DNA 分子分離開,為什么?(6 mol/L的氯化銫溶液密度約1.7 g/mL,與DNA密度最接近)⑤氯化銫密度梯度是如何形成?(氯化銫離心液形成1.65~1.75 g/mL的密度梯度。原因:重金屬鹽的沉降作用與擴散作用達到動態(tài)平衡)⑥不同密度的DNA分離的原理是什么?[不同密度的DNA(15N,14N)在離心液中進入與自身密度梯度最接近的區(qū)域,形成不同的區(qū)帶,從而將微小差異的DNA很明顯的區(qū)分開]⑦梅塞爾森-斯特爾用什么方法檢測到實驗結(jié)果?(用紫外光源照射離心管,透過離心管在感光膠片上記錄DNA帶的位置,顯示離心管內(nèi)不同密度的DNA帶)
教師先播放梅塞爾森和斯特爾的“大腸桿菌DNA密度梯度離心實驗”視頻,展示實驗過程和實驗結(jié)果。出示問題,師生共同討論。最后由學生觀察比較并作出判斷,實驗結(jié)果與預期結(jié)果一致,得出DNA復制的實驗結(jié)論:DNA分子以半保留方式進行復制。
設計意圖:教師設計有效的“問題串”幫助學生理解實驗的過程,體會科學探究中科學研究方法與科學思維方法;基于一定的信息及理論知識,進行問題的邏輯推理的能力培養(yǎng),提高學生對數(shù)據(jù)的分析能力。在問題驅(qū)動下,讓學生在小組合作中親身經(jīng)歷實驗探究的整個過程,為學生的終身發(fā)展奠定良好的基礎。
視頻展示資料二:半保留復制進一步的實驗證椐。為了進一步確認DNA是半保留復制,梅塞爾森和斯特爾在密度梯度離心之前用熱變性處理CsCl溶液中DNA樣品(100℃下30 min)。實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn),雜交DNA分成了重密度帶(15N-DNA)及低密度帶(14N-DNA)兩條帶。而變性前的雜交分子為一條中密度帶。15N DNA、14N DNA雜交分子經(jīng)加熱變性,對于變性前后的DNA分別進行CsCl密度梯度離心。設問:①子一代(雜交帶)的DNA通過熱變性后能夠排除哪種復制方式?(分散復制)。②實驗組、對照組分別是哪一組?(B;A、C)
設計意圖:還原史實,以有深度的探究性學習,拓展學生的探究層次,開發(fā)學生的智力,力圖通過探究引導學生學會學習和掌握科學探究的方法,為學生的終身學習奠定基礎。
視頻展示資料三:利用真核生物為實驗材料。1958年,赫伯特泰勒(Herbert Taylar)用蠶豆(2N=12)根尖細胞作為實驗材料,證明了真核細胞染色體DNA的復制也符合半保留復制模型。他先用放射性同位素3H標記細胞染色體DNA(標記雙鏈),然后讓細胞在不含3H的培養(yǎng)液中進行有絲分裂,經(jīng)放射自顯影顯示實驗結(jié)果。
該實驗方法的優(yōu)勢在于可觀察到染色體被標記的情況。設問:①在第1細胞周期的中期染色體中,每個染色體的2條單體被標記的情況如何?(在第1周期的中期染色體中,每個染色體的2條單體都被標記)②第2細胞周期的中期染色體中,每個染色體的2條單體被標記的情況如何?(第2周期的中期染色體中,每個染色體僅1條單體被標記。這一結(jié)果和預期的情況完全符合,證明了真核細胞的染色體DNA復制也符合半保留模型)
小組活動:由學生根據(jù)染色體標記情況,將染色體中的DNA分子標記情況畫出來。
3.5 課堂小結(jié) 小組總結(jié),每小組選派學生匯報:科學探究中的科學研究方法——假說演繹法的步驟,證明DNA的復制是半保留方式的實驗材料,研究技術手段等。