雞肉凍干粉中妥曲珠利及妥曲珠利砜殘留標(biāo)準(zhǔn)樣品的研制

何　平，鞠玲燕，崔　嘉，李兆杰，宋曉華 ，楊麗君*

(1.中國(guó)合格評(píng)定國(guó)家認(rèn)可中心，北京　100062；2.威海出入境檢驗(yàn)檢疫局，山東 　威海　264200)

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雞肉凍干粉中妥曲珠利及妥曲珠利砜殘留標(biāo)準(zhǔn)樣品的研制

何平1，鞠玲燕2，崔嘉2，李兆杰2，宋曉華2，楊麗君2*

(1.中國(guó)合格評(píng)定國(guó)家認(rèn)可中心，北京100062；2.威海出入境檢驗(yàn)檢疫局，山東 威海264200)

建立了雞肉凍干粉中妥曲珠利和妥曲珠利砜標(biāo)準(zhǔn)樣品的研制和定值方法。通過口灌給藥，使妥曲珠利在雞體內(nèi)代謝，從而使雞肉中含有一定濃度的妥曲珠利和妥曲珠利砜，經(jīng)均質(zhì)、冷凍干燥、真空封裝等處理后獲得1批852個(gè)獨(dú)立包裝的雞肉凍干粉標(biāo)準(zhǔn)樣品。采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜對(duì)樣品的均勻性和穩(wěn)定性進(jìn)行檢測(cè)，通過8 家實(shí)驗(yàn)室協(xié)作定值的方式對(duì)標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行定值和不確定度評(píng)估，最終確定妥曲珠利的標(biāo)準(zhǔn)值為(60.42±9.12) μg/kg，妥曲珠利砜的標(biāo)準(zhǔn)值為(73.10±12.48) μg/kg。結(jié)果表明樣品的均勻性良好，穩(wěn)定性長(zhǎng)達(dá)24 個(gè)月，可用于雞肉中妥曲珠利和妥曲珠利砜殘留分析的質(zhì)量控制。

標(biāo)準(zhǔn)樣品；雞肉；妥曲珠利；妥曲珠利砜；研制；定值；液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜

標(biāo)準(zhǔn)樣品(Reference material，RM)是一種或多種規(guī)定特性足夠均勻和穩(wěn)定的材料，已經(jīng)確定其符合測(cè)定過程的預(yù)期用途(包括測(cè)量系統(tǒng)校準(zhǔn)、測(cè)量程序評(píng)估、給其他材料賦值和質(zhì)量控制)[1]。歐盟2002/657/EC中明確指出在獸藥殘留分析中需采用基體標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行過程控制。但國(guó)外標(biāo)準(zhǔn)樣品的價(jià)格昂貴而且訂購(gòu)和運(yùn)輸時(shí)間長(zhǎng)，國(guó)內(nèi)的殘留分析實(shí)驗(yàn)室無法定期用其進(jìn)行質(zhì)控。我國(guó)獸藥殘留標(biāo)準(zhǔn)樣品的研究起步較晚，雖有幾家檢驗(yàn)檢疫機(jī)構(gòu)開展了獸藥殘留檢測(cè)實(shí)物標(biāo)準(zhǔn)樣品的研究[2-6]，但仍未形成規(guī)模化、成品化的標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備、生產(chǎn)、供給。我國(guó)動(dòng)物源獸藥的標(biāo)準(zhǔn)樣品相當(dāng)匱乏，因此研制一系列均勻性和穩(wěn)定性較好的動(dòng)物源基體獸藥標(biāo)準(zhǔn)樣品具有廣闊的應(yīng)用前景。

妥曲珠利(Toltrazuil，TOL)是三嗪酮類抗球蟲藥物，因其高效、低毒、廣譜的特點(diǎn)，被廣泛用于畜禽養(yǎng)殖業(yè)中。妥曲珠利砜(Toltrazuril sulfone)是妥曲珠利的代謝產(chǎn)物。由于兩者在仔雞可食用組織中的殘留時(shí)間很長(zhǎng)，停藥24 d后在雞胸肌中仍能檢出，因此，美國(guó)至20世紀(jì)末仍未批準(zhǔn)該產(chǎn)品上市[7]。日本和歐盟規(guī)定雞肉中妥曲珠利(以妥曲珠利砜計(jì))的最大殘留限量分別為0.9 mg/kg 和0.1 mg/kg[8]。目前，妥曲珠利和妥曲珠利砜的檢測(cè)分析通常采用加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)作為質(zhì)量控制的手段，但加標(biāo)回收率難以反映出真正陽(yáng)性樣品的提取效率，需采用妥曲珠利和妥曲珠利砜殘留基體標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行檢測(cè)過程控制。本研究從給藥到定值進(jìn)行探討，研制出含妥曲珠利和妥曲珠利砜殘留的雞肉凍干粉基體標(biāo)準(zhǔn)樣品，填補(bǔ)了我國(guó)三嗪類藥物殘留基體標(biāo)準(zhǔn)樣品的空白，并以能力驗(yàn)證計(jì)劃為平臺(tái)，將該基體標(biāo)準(zhǔn)樣品應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室外部質(zhì)量控制過程。

1　實(shí)驗(yàn)部分

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與藥物

實(shí)驗(yàn)用雞購(gòu)自本地養(yǎng)雞場(chǎng)，選擇當(dāng)?shù)爻赡耆怆u，雌雄各半，個(gè)體大小均一，體重約2.5 kg，適應(yīng)飼喂7 d，給藥前禁食12 h，自由飲水。實(shí)驗(yàn)用雞經(jīng)檢測(cè)確認(rèn)不含目標(biāo)物后，取部分宰殺用作空白樣品，其余進(jìn)行給藥實(shí)驗(yàn)，用于制備妥曲珠利和妥曲珠利砜標(biāo)準(zhǔn)樣品。實(shí)驗(yàn)用藥為市售妥曲珠利原藥粉(含量≥98%，批號(hào)20120917)，購(gòu)自湖北龍翔藥業(yè)有限公司。

1.2試劑與儀器

甲醇(色譜純，美國(guó)默克公司)；乙酸乙酯、環(huán)己烷(色譜純，德國(guó)CNW公司)；無水硫酸鈉(分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠)，使用前需于650 ℃灼燒4 h，置于干燥器中備用。標(biāo)準(zhǔn)品：妥曲珠利(CAS：69004-03-1，純度>98.0%)、妥曲珠利砜(CAS：69004-04-2，純度>99.0%)購(gòu)自德國(guó)Dr.Ehrenstorfer公司，內(nèi)標(biāo)妥曲珠利-D3(CAS：1353867-75-0，純度>98.0%)購(gòu)自德國(guó)Witega公司。

Ultimate 3000高效液相色譜儀、TSQ Vantage串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀(美國(guó)Thermofisher公司)；CR22GⅡ高速冷凍離心機(jī)(日立公司)；Buchi旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(瑞士Buchi公司)；MS3旋渦混合器(德國(guó)IKA公司)；B20-KT高速多功能攪拌機(jī)(廣東恒聯(lián)食品機(jī)械有限公司)；8411型電動(dòng)振篩機(jī)(上海寶蘭實(shí)驗(yàn)儀器有限公司)；YB-1000A型高速中藥粉碎機(jī)(上海力箭機(jī)械有限公司)；UM44A型粉碎混勻機(jī)(德國(guó)Stephan公司)；4 kg×25盤冷凍干燥倉(cāng)(威海眾合食品有限公司)；VS-600WA真空包裝機(jī)(深圳市晟楓包裝機(jī)械有限公司)。

1.3分析方法

1.3.1樣品的前處理稱取雞肉5 g或雞肉粉1 g(雞肉粉需加4倍樣品質(zhì)量的水還原60 min)，精確至0.01 g，加入內(nèi)標(biāo)溶液、25 mL乙酸乙酯和5 g無水硫酸鈉，10 000 r/min均質(zhì)提取1 min，離心，取10 mL提取液于玻璃管中，45 ℃下氮?dú)獯蹈桑靡宜嵋阴?環(huán)己烷(50∶50)溶解殘?jiān)⒍ㄈ葜?0 mL，GPC凈化后，將收集的洗脫液蒸干，用1 mL甲醇-水(8∶2)溶解殘?jiān)瑴u旋振蕩，過0.45 μm有機(jī)濾膜，供LC-MS/MS檢測(cè)。

1.3.2液相色譜條件色譜柱：Kinetex XB-C18(2.6 μm，2.1 mm×100 mm)；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10 μL；流動(dòng)相：A為0.1%甲酸溶液；B為乙腈；流速：0.3 mL/min；梯度洗脫條件：0～2.0 min，30%～55%B，2.0～8.5 min,55%B，8.5～8.7 min，55%～90%B，8.7～11.0 min，90%B，11.0～11.1 min，90%～30%B，11.1～15 min，30%B。

1.3.3質(zhì)譜條件電噴霧電離源正離子掃描(ESI+)；選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式(SRM)；電噴霧電壓:3 200 V；離子傳輸毛細(xì)管溫度:350 ℃；加熱器溫度:350 ℃；鞘氣壓力:40 arb；輔助氣壓力:10 arb；妥曲珠利的監(jiān)測(cè)離子m/z424.0，碰撞能量(CE)為3 V，S-lens RF電壓為81 V；妥曲珠利砜的監(jiān)測(cè)離子m/z456.0，碰撞能量(CE)為5 V，S-lens RF電壓為:94 V；妥曲珠利-D3的監(jiān)測(cè)離子m/z427.0，碰撞能量(CE)為3 V，S-lens RF電壓為81 V。

1.4標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備

妥曲珠利按照每只雞0.2 mg的藥量，藥粉裝入膠囊中，將膠囊塞至雞舌根處，讓雞自然咽下，每天給藥1次，連續(xù)給藥3 d，停藥后每10 h宰殺進(jìn)行檢測(cè)，直至得到雞肉中妥曲珠利和妥曲珠利砜的含量約為15 μg/kg，宰殺后取雞胸肉和雞腿肉，洗凈血水。按4∶1的比例加水將雞肉混勻制成肉糜，將肉糜放入真空冷凍干燥機(jī)內(nèi)，-70 ℃速凍成厚度不超過2 cm的凍塊，置于真空干燥倉(cāng)中，保持48 h，直至凍塊干燥。將冷凍干燥后的肉糜取出，用高速中藥粉碎機(jī)粉碎、勻質(zhì)后的肉粉過60目孔篩，棄去篩余粗粉；聚乙烯瓶提前45 ℃烘干，放入無菌室用紫外燈滅菌，在無菌室內(nèi)準(zhǔn)確稱量干粉置于聚乙烯瓶中，每個(gè)瓶?jī)?nèi)雞粉的質(zhì)量6.0 g，再用鋁箔袋將包裝瓶真空封裝，隨機(jī)在外包裝順序編號(hào)，共計(jì)852瓶；-18 ℃冷凍保存，進(jìn)一步做均勻性和穩(wěn)定性檢測(cè)。

1.5均勻性研究

標(biāo)準(zhǔn)樣品的特性應(yīng)當(dāng)均勻，即在規(guī)定的細(xì)分范圍內(nèi)保證其特性不變。本文研制的標(biāo)準(zhǔn)樣品數(shù)量在500瓶以上，根據(jù)以往的研制經(jīng)驗(yàn)，均勻性相對(duì)較好，故均勻性檢驗(yàn)方案設(shè)計(jì)為每種隨機(jī)抽取15瓶，每瓶樣品中各抽取3份子樣，在相同的實(shí)驗(yàn)條件下對(duì)標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行均勻性檢測(cè)，采用單因素方差分析法對(duì)樣品的均勻性數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，判斷標(biāo)準(zhǔn)樣品是否均勻[9-10]。

1.6穩(wěn)定性研究

穩(wěn)定性研究是為了確定標(biāo)準(zhǔn)樣品穩(wěn)定貯存和運(yùn)輸?shù)沫h(huán)境條件。在適宜的環(huán)境條件下，標(biāo)準(zhǔn)樣品特性值應(yīng)不會(huì)隨著貯存、運(yùn)輸時(shí)間的延長(zhǎng)發(fā)生顯著變化。對(duì)于新研制的標(biāo)準(zhǔn)樣品，首先應(yīng)考察其在給定貯存條件下的長(zhǎng)期穩(wěn)定性。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)樣品穩(wěn)定貯存條件與標(biāo)準(zhǔn)樣品應(yīng)用時(shí)的實(shí)際運(yùn)輸條件存在較大差異時(shí)，還應(yīng)考察該標(biāo)準(zhǔn)樣品在運(yùn)輸過程中的短期穩(wěn)定性[9-11]。

1.6.1短期穩(wěn)定性短期穩(wěn)定性研究是確定標(biāo)準(zhǔn)樣品運(yùn)輸?shù)沫h(huán)境條件。短期穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)進(jìn)行30 d，按先密后疏選6個(gè)時(shí)間點(diǎn)(0，2，5，9，14，30 d)，模擬運(yùn)輸中遇到的極端溫度(-18，25，50 ℃ 3個(gè)溫度點(diǎn))存放，每次測(cè)量隨機(jī)選擇3瓶，每瓶樣品平行分析2次，共6組數(shù)據(jù)，以3瓶的總平均值為該時(shí)間點(diǎn)的特性值穩(wěn)定性檢驗(yàn)結(jié)果。

1.6.2長(zhǎng)期穩(wěn)定性長(zhǎng)期穩(wěn)定性研究是確定標(biāo)準(zhǔn)樣品穩(wěn)定貯存的環(huán)境條件。時(shí)間間隔分別為0，3，6，12，18，24個(gè)月，具體方案是在每個(gè)穩(wěn)定性檢驗(yàn)時(shí)間點(diǎn)從庫(kù)存樣品中隨機(jī)抽取3瓶樣品，每瓶樣品平行分析2次，共6組數(shù)據(jù)，以3瓶的總平均值為該時(shí)間點(diǎn)的特性值穩(wěn)定性檢驗(yàn)結(jié)果。

1.7定值與不確定性評(píng)估

本標(biāo)準(zhǔn)樣品的定值采用8個(gè)有較高權(quán)威性的實(shí)驗(yàn)室協(xié)作定值的方式進(jìn)行，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室3個(gè)樣品，每個(gè)樣品做2個(gè)平行，測(cè)定數(shù)據(jù)經(jīng)過格拉布斯(Grubb's)檢驗(yàn)、夏皮羅-威爾克(Shapiro-wilk)檢驗(yàn)、狄克遜(Dixon)檢驗(yàn)、科克倫(Cochran)檢驗(yàn)后取平均結(jié)果定值。標(biāo)準(zhǔn)樣品特性值的不確定度由協(xié)作定值產(chǎn)生的不確定度，長(zhǎng)期穩(wěn)定性和短期穩(wěn)定性產(chǎn)生的不確定度，以及瓶間不均勻性產(chǎn)生的不確定度合成并擴(kuò)展(包含因子k=3)而得。

圖1　給藥后雞肉中妥曲珠利和妥曲珠利砜 的含量與時(shí)間曲線Fig.1　Time-concentration curves of toltrazuil and toltrazuil sulfone in chicken muscle after oral administration

2　結(jié)果與討論

2.1樣品的制備

為了保證精確給藥，本研究選擇口腔灌服給藥的方式。家禽內(nèi)服妥曲珠利后，迅速被代謝為妥曲珠利亞砜和妥曲珠利砜，但一次給藥很難將雞肉組織中兩種藥物的水平控制在同一數(shù)量級(jí)內(nèi)，因此采用連續(xù)3 d給藥方式[6]，給藥后監(jiān)測(cè)雞肉組織中妥曲珠利和妥曲珠利砜的濃度(見圖1)，選擇適宜濃度時(shí)宰殺。結(jié)果表明，停藥10 h時(shí)，肌肉組織中的部分妥曲珠利代謝為妥曲珠利砜，在此時(shí)取樣，雞肉組織中妥曲珠利和妥曲珠利砜的殘留量接近，約為15.0 μg/kg，此后妥曲珠利繼續(xù)代謝，肌肉組織中妥曲珠利砜的含量增加，而妥曲珠利含量逐漸消減。

宰殺后取樣，要求盡量避免血液與肌肉接觸，采用不易受血液污染的雞胸肉和雞腿肉，且勻漿、粉碎、過篩和冷凍干燥等過程應(yīng)嚴(yán)格控制，保證最后制得樣品的均一性。例如在凍干器壁上雞肉的涂抹厚度要適中，厚度過厚，會(huì)使凍干時(shí)間延長(zhǎng)，而且凍塊會(huì)出現(xiàn)局部板結(jié)化，造成凍干不均勻。分裝前，分散取六點(diǎn)，進(jìn)行均勻性初測(cè)，均勻性滿足要求后，進(jìn)行無菌分裝。

2.2樣品的測(cè)定

按前述分析方法處理樣品后，得到妥曲珠利和妥曲珠利砜標(biāo)準(zhǔn)品以及雞肉凍干粉標(biāo)準(zhǔn)樣品的MRM色譜圖(如圖 2)。 由圖可見標(biāo)準(zhǔn)樣品中妥曲珠利、妥曲珠利砜以及同位素內(nèi)標(biāo)與樣品中各組分良好分離，且出峰保留時(shí)間和對(duì)應(yīng)的各組分保留時(shí)間基本一致,標(biāo)準(zhǔn)樣品的目標(biāo)檢測(cè)物出峰處無雜峰干擾，證明所獲取的標(biāo)準(zhǔn)樣品中存在目標(biāo)檢測(cè)物，且能準(zhǔn)確反映樣本中目標(biāo)物的殘留量。

　圖2　妥曲珠利和妥曲珠利砜標(biāo)準(zhǔn)品(A)以及雞肉凍干粉標(biāo)準(zhǔn)樣品(B)的SRM色譜圖Fig.2　SRM chromatograms of toltrazuil and toltrazuil sulfone standards(A)and the reference materials in chicken muscle lyophilisates(B)

2.3均勻性研究

在均勻性檢驗(yàn)過程中，一般需同時(shí)考察組間均勻性及組內(nèi)均勻性，本研究采用單因素方差分析法對(duì)樣品的均勻性數(shù)據(jù)進(jìn)行處理[9-11]，結(jié)果如表1所示。根據(jù)方差分析原理，該統(tǒng)計(jì)量是自由度為(v1，v2)的F分布變量。由公式v1=m-1，v2=N-m，并已知m=15，N=3×15=45；則v1=14，v2=30，在顯著性水平α=0.05時(shí)，計(jì)算得F0.05(14,30)=1.367和1.607，查表得到F臨界值(Fcrit)=2.04，F(xiàn)值小于Fcrit值時(shí)，該樣品均勻，并將樣品的不均勻性誤差計(jì)入總的不確定度。

表1　妥曲珠利和妥曲珠利砜標(biāo)準(zhǔn)樣品的均勻性檢驗(yàn)(n=3)

(續(xù)表1)

No.ToltrazuilToltrazuilsulfoneDetected/(μg·kg-1)Average/(μg·kg-1)Detected/(μg·kg-1)Average/(μg·kg-1)1259.82,58.19,56.8458.2875.90,79.95,74.9676.941358.89,61.01,62.8260.9179.83,80.83,81.5880.751458.31,56.42,59.6958.1479.88,77.42,78.9078.731562.33,61.16,63.0962.1979.67,81.72,79.2480.21P-value0.2770.186F0.05(14,30)1.3671.607Fcrit2.0372.037

2.4穩(wěn)定性研究

標(biāo)準(zhǔn)樣品穩(wěn)定性研究的基本模型是Y=β0+β1X+ε，用線性擬合模型評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)樣品的穩(wěn)定性，以X代表時(shí)間，Y代表標(biāo)準(zhǔn)樣品中目標(biāo)物的含量，ε代表隨機(jī)誤差分量，采用t檢驗(yàn)法對(duì)樣品的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，比較t檢驗(yàn)計(jì)算值(tcal)與t檢驗(yàn)臨界值(tcrit)，tcal≤tcrit時(shí)，表明標(biāo)準(zhǔn)樣品是穩(wěn)定的[9-11]。短期穩(wěn)定性數(shù)據(jù)見表2，可以看出，tcal

表2　妥曲珠利和妥曲珠利砜短期穩(wěn)定性研究的數(shù)據(jù)(n=2)

表3　妥曲珠利和妥曲珠利砜的長(zhǎng)期穩(wěn)定性研究數(shù)據(jù)(n=6)

2.5定值與不確定度評(píng)定

表4　各定值實(shí)驗(yàn)室的妥曲珠利測(cè)定數(shù)據(jù)處理結(jié)果

表5　各定值實(shí)驗(yàn)室的妥曲珠利砜測(cè)定數(shù)據(jù)處理結(jié)果

2.5.2不確定度評(píng)估以全部定值實(shí)驗(yàn)室的測(cè)定結(jié)果為整體進(jìn)行定值不確定度評(píng)估，考慮長(zhǎng)期穩(wěn)定性和短期穩(wěn)定性以及樣本之間的不均勻性產(chǎn)生的不確定度，在數(shù)據(jù)檢驗(yàn)滿足要求的前提下，不再單獨(dú)評(píng)估單個(gè)實(shí)驗(yàn)室人員操作、儀器設(shè)備等產(chǎn)生的不確定度，以簡(jiǎn)化不確定度的評(píng)估量，同時(shí)保證評(píng)估數(shù)據(jù)的可靠性。分析不確定度評(píng)估結(jié)果，本標(biāo)準(zhǔn)樣品的不確定度來源主要有以下方面[10，12-15]：

①標(biāo)準(zhǔn)樣品協(xié)作定值產(chǎn)生的不確定度：包括檢測(cè)方法、樣品前處理、環(huán)境設(shè)施、人員操作、儀器差異等產(chǎn)生的不確定度。uchar=s/n0.5，s為總均值標(biāo)準(zhǔn)偏差，n為實(shí)驗(yàn)室數(shù)。

③短期穩(wěn)定性產(chǎn)生的不確定度：即標(biāo)準(zhǔn)樣品在各種運(yùn)輸環(huán)境下的不穩(wěn)定所產(chǎn)生的不確定度。usts=s(b1)×t,t為短期穩(wěn)定性檢驗(yàn)持續(xù)的時(shí)間，s(b1)為斜率標(biāo)準(zhǔn)偏差的估計(jì)值。

在置信概率為99%時(shí)，k=3，則標(biāo)準(zhǔn)樣品的擴(kuò)展不確定度為:U=kuc，不確定度結(jié)果見表6。

表6　妥曲珠利和妥曲珠利砜標(biāo)準(zhǔn)樣品的不確定度

最終確定妥曲珠利標(biāo)準(zhǔn)值為(60.42±9.12) μg/kg，妥曲珠利砜標(biāo)準(zhǔn)值為(73.10±12.48) μg/kg。

圖3　實(shí)驗(yàn)室Z值分布圖Fig.3　Histogram of Z-scores of labs

2.6應(yīng)用

應(yīng)用本標(biāo)準(zhǔn)樣品成功組織了12個(gè)實(shí)驗(yàn)室參與的CNAS T0785“雞肉中地克珠利、妥曲珠利和妥曲珠利砜殘留量的測(cè)定”能力驗(yàn)證。以各參加實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果的Z比分?jǐn)?shù)(Z值)作為評(píng)價(jià)其結(jié)果滿意度的依據(jù)，Z值的大小代表實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果與中位值的偏離程度，∣Z∣≤2.0為滿意結(jié)果，2.0<∣Z∣<3.0為可疑結(jié)果，∣Z∣≥3.0為不滿意結(jié)果。Z值分布的原理實(shí)際上是呈正態(tài)分布的顯著性檢驗(yàn)，本次能力驗(yàn)證的Z值分布見圖3。由圖3可見，本次能力驗(yàn)證的數(shù)據(jù)服從正態(tài)分布，測(cè)試結(jié)果較為集中，無較大偏差。參加能力驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)室對(duì)妥曲珠利測(cè)定結(jié)果的平均值為57.6 μg/kg，妥曲珠利砜測(cè)定結(jié)果的平均值為64.0 μg/kg，在標(biāo)準(zhǔn)樣品最終確定的標(biāo)準(zhǔn)值(妥曲珠利60.42±9.12 μg/kg、妥曲珠利砜73.10±12.48 μg/kg)范圍內(nèi)。

3　結(jié)　論

通過藥物飼養(yǎng)試驗(yàn)動(dòng)物，確定最佳的飼養(yǎng)條件和采集時(shí)機(jī)，獲得了預(yù)期含量的代表實(shí)際樣品原狀態(tài)的含妥曲珠利和妥曲珠利砜的雞肉凍干粉標(biāo)準(zhǔn)樣品。該標(biāo)準(zhǔn)樣品適用于妥曲珠利和妥曲珠利砜殘留分析質(zhì)量控制，填補(bǔ)了我國(guó)抗球蟲類獸藥基體標(biāo)準(zhǔn)樣品的空白，對(duì)進(jìn)一步開展各類殘留檢測(cè)用基體標(biāo)準(zhǔn)樣品的研制工作具有重要意義。

[1]GB/T 15000.3-2008.Directives for the Work of Reference Materials(3) -Reference Materials-General and Statistical Principles for Certification(標(biāo)準(zhǔn)樣品工作導(dǎo)則(3)-標(biāo)準(zhǔn)樣品定值的一般原則和統(tǒng)計(jì)方法.中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)).

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Preparation and Certification of Reference Materials for Toltrazuil and Toltrazuil Sulfone in Chicken Lyophilisates

HE Ping1，JU Ling-yan2，CUI Jia2，LI Zhao-jie2，SONG Xiao-hua2，YANG Li-jun2*

(1.China National Accreditation Service for Conformity Assessment,Beijing100062,China；2.Weihai Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau，Weihai264200,China)

A method for preparing and certifying the reference materials of toltrazuil and toltrazuil sulfone in chicken muscle lyophilisates was presented.Toltrazuil was accessed to chicken by oral administration.With the metabolism of toltrazuil in chiken,a certain concentration of toltrazuil and toltrazuil sulfone were obtained in the muscles.Lyophilization of the muscles was performed in one batch,and 852 bags of samples were obtained by the procedure of homogenation，cryodesiccation and vacuum-packaging.The homogeneity and stability of the sample were examined by high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry(HPLC-MS/MS).The value of the chemical constituent of the sample was certified through the collaborative analysis program participated by 8 laboratories,and the uncertainty was evaluated.The standard values of standard samples were certified as(60.42±9.12)μg/kg for toltrazuil and (73.10±12.48)μg/kg for toltrazuil sulfone.The results showed that good homogeneity and stability of the sample reached up to 24 months,and could be used for the quality control of toltrazuil and toltrazuil sulfone residue in chicken.

reference materials; chicken; toltrazuil; toltrazuil sulfone;preparation;certification；high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry(HPLC-MS/MS)

2015-11-23；

2016-01-07

質(zhì)檢公益性行業(yè)科研專項(xiàng)(201310143)

楊麗君，碩士，高級(jí)工程師，研究方向：食品安全,Tel:0631-3807680，E-mail:yihan82527@163.com

doi:10.3969/j.issn.1004-4957.2016.07.006

O657.7;TQ460.72

A

1004-4957(2016)07-0811-08