老年原發性干燥綜合征患者干擾素-γ、Fas、FasL檢測的意義

李玉玲　冀林華

(青海大學附屬醫院檢驗科，青?！∥鲗帯?10001)

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1血液科

老年原發性干燥綜合征患者干擾素-γ、Fas、FasL檢測的意義

李玉玲冀林華1

(青海大學附屬醫院檢驗科，青海西寧810001)

目的探析干擾素(INF)-γ、Fas、FasL在原發性干燥綜合征(pSS)老年患者中的檢測意義。方法確診的尚未接受治療的40例初診pSS患者為PSS組，同期接受口外傷手術的22例女性健康者作為對照組。采用SP法檢測INF-γ、Fas、FasL的表達水平。比較兩組唇腺腺泡、唇腺導管的上皮細胞中INF-γ、Fas、FasL的陽性表達率，并對INF-γ、Fas、FasL行兩兩相關性分析。結果pSS組唇腺腺泡、唇腺導管上皮細胞中INF-γ、Fas、FasL的陽性表達率均明顯比對照組高(P均<0.01)。唇腺腺泡的上皮細胞中，INF-γ與Fas呈正相關(r=0.83，P<0.01)；INF-γ與FasL呈正相關(r=0.46，P<0.05)；Fas與FasL呈正相關(r=0.62，P<0.01)。結論INF-γ、Fas、FasL很可能在pSS的整個發生發展過程中扮演了重要的角色，并在唇腺組織中異常表達。

干擾素-γ；Fas；FasL；原發性干燥綜合征

原發性干燥綜合征(pSS)屬于外分泌腺體，主要侵犯淚腺、唾液腺等，臨床特征主要是高度的淋巴細胞灶性浸潤，主要表現是口腔干燥癥、結膜炎、干燥性角，有時甚至累及全身多個系統和器官。作為彌漫性結締組織疾病之一的pSS，在我國的致病率達0.3%～0.7%，屬于多發病、常見病，好發于30～40歲或者是絕經后的女性，老年人群中其致病率高達0.77%〔1〕。目前尚不明確老年pSS的病理機制。本文旨在通過對pSS老年患者唇線組織內的干擾素(INF)-γ、Fas、FasL表達水平的檢測，探析其臨床意義。

1　資料與方法

1.1一般資料2012年4月至2015年8月我院血液風濕科進行門診及住院確診的尚未接受治療的40例初診pSS患者的臨床資料，均為女性，平均年齡(69.8±7.8)歲。診斷均符合2002年國際分類(診斷)標準，排除感染、高血壓、糖尿病等對研究結果會造成一定干擾的相關疾病。另外選取同期在我院接受口外傷手術的22例女性健康者作為對照組，平均年齡(70.1±8.1)歲。受試者均接受唇腺活檢術，具體操作由口腔外科醫師負責。兩組年齡無明顯差異。

1.2研究方法上海亞培生物技術有限公司生產的INF-γ、Fas、FasL免疫組化試劑盒。INF-γ、Fas、FasL表達水平的測定：采用SP法。將組織切片、脫蠟并水化；用pH6.0的檸檬酸緩沖液高溫高壓抗原修復；對內源性過氧化物酶活性用3%雙氧水溶液進行阻斷，于室溫下孵育10 min；室溫下在正常兔血清中封閉20 min；滴注一抗，于4℃下孵育過夜；將二抗注入其中，于室溫下孵育30 min；最后滴加辣根過氧化物酶標記鏈霉親和素，于室溫下孵育15 min；二氨基聯苯胺(DAB)顯色；蒸餾水沖洗并終止顯色；復染、脫水、透明、封片，用顯微鏡進行觀察。

1.3INF-γ、Fas、FasL染色結果判定采用雙盲法，由2名病理醫師閱片評定。細胞質為黃色，則INF-γ、Fas、FasL為陽性。高倍鏡下每張切片隨機選取視野10個，且每個視野記錄細胞100個，綜合染色細胞數和強度在同類細胞數中的百分數值評定：①根據細胞數在同類細胞數中的百分值進行評分：低于25%計1分；25%～50%計2分；51%～75%計3分；超過75%計4分。②根據細胞著色的深淺進行評分：細胞無顯色，0分；黃色，1分；棕黃色，2分；棕褐色，3分?？偡e分為上述兩項評分之乘積?？偡e分如果為0～3分，則為陰性(-)，低表達；4～6分，弱陽性(+)；7～9分，陽性()；超過9分，則為強陽性()。

1.3統計學方法采用SPSS19.0軟件進行t檢驗和χ2檢驗。

2　結　果

2.1唇腺腺泡和導管上皮細胞中INF-γ、Fas、FasL的檢測結果pSS組唇腺腺泡和導管上皮細胞中INF-γ、Fas、FasL的陽性表達率均明顯比對照組高(P均<0.01)。見表1。

表1　兩組唇腺腺泡和導管上皮細胞中INF-γ、Fas、FasL的檢測結果(n)

2.2pSS患者Fas、FasL與INF-γ、Fas與FasL表達的相關性分析在唇腺腺泡的上皮細胞中，INF-γ與Fas呈正相關(r=0.83，P<0.01)；INF-γ與FasL呈正相關(r=0.46，P<0.05)；Fas與FasL呈正相關(r=0.62，P<0.01)。

3　討　論

pSS屬于慢性全身性自身免疫性疾病，主要損害外分泌腺，對于患者的腺體組織受損機制目前尚未完全明確。pSS的發病與細胞凋亡存在一定的關系〔2〕。Fas抗原是腫瘤壞死因子(TNF)家族中的成員。作為Ⅰ型跨膜蛋白，Fas定位于10q33，分子量是45 kD。Fas的天然配體是FasL，其也是TNF家族中一員，分子量是40 kD，屬于Ⅱ型跨膜蛋白〔3〕。Fas和FasL主要分布在自然殺傷細胞(NK)、T細胞及生殖細胞、肝、腎、心中，兩者的結合可以對凋亡信號進行轉導，對Fas所在細胞的整個凋亡過程起誘導作用〔4〕。細胞中各種蛋白對Fas功能活性起決定性的調節作用。腫瘤的發生往往與Fas的異常表達有關〔5〕。細胞凋亡往往通過Fas/FasL系統途徑發生，Fas/FasL系統在參與免疫赦免、控制免疫應答及誘導被激活的細胞凋亡、人體自身的耐受機制中均扮演著重要的角色〔6〕。

本文提示INF-γ、Fas、FasL均參與了老年pSS患者的發病過程；且在免疫調節、免疫相關性疾病等發生發展及轉歸過程中，細胞因子均發揮重要作用。在自身免疫性疾病的誘導、發展過程中，Th1和Th2細胞間的平衡發揮了關鍵性的作用〔7〕。Th1細胞通過表達FasL可以誘導靶細胞實現Fas途徑細胞凋亡〔8〕。INF-γ屬于Th1型細胞因子，其主要用于介導免疫應答〔9〕。類風濕關節炎患者的滑液和滑膜T細胞的功能性Fas抗原異常表達，抑制了患者體內的Fas途徑的T淋巴細胞凋亡，同時還抑制了關節局部的巨噬細胞、成纖維細胞、滑膜細胞等的凋亡，導致了滑膜細胞類腫瘤樣增生與滑膜細胞的活化，滑膜組織侵蝕性、增生性生長破壞了關節軟骨及其下面的骨〔10〕。

INF-γ可以對體外培養的所有腺上皮細胞進行誘導，使其表達Fas及FasL，最終對上皮細胞的生存產生影響〔11〕。

本研究提示INF-γ作為炎癥及免疫反應中關鍵性細胞因子，幾乎參與了各個階段免疫反應，其中包括B和T細胞分化、增殖與活化，參與血管內皮細胞、NK細胞及巨噬細胞等的激活過程，誘導細胞表達主要組織相容性復合體(MHC)Ⅰ、Ⅱ類分子，可以對IgG類轉化起一定的促進作用〔12〕。老年pSS患者INF-γ表達水平如果上升，不但會加劇腺體組織及自身免疫反應的受損，同時還會誘導pSS唇腺組織大量表達Fas、FasL，加速細胞凋亡，破壞腺體結構，減弱甚至丟失腺體分泌功能〔13〕。

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3Kinugawa T，Kato M，Yamamoto K,etal.Proinflammatory cytokine activation is linked to apoptotic mediator，soluble Fas level in patients with chronic heart failure〔J〕.Int Heart J，2012；53(3)：182-6.

4Ehlken H，Krishna-Subramanian S，Ochoa-Callejero L,etal.Death receptor-independent FADD signalling triggers hepatitis and hepatocellular carcinoma in mice with liver parenchymal cell-specific NEMO knockout〔J〕.Cell Death Differ，2014；21(11)：1721-32.

5Girnita DM，Ohmann EL，Brooks MM,etal.Gene polymorphisms impact the risk of rejection with hemodynamic compromise：a multicenter study〔J〕.Transplantation，2011；91(12)：1326-32.

6Ramamoorthy D，Turos E，Guida WC.Identification of a new binding site in E.coli FabH using molecular dynamics simulations：validation by computational alanine mutagenesis and docking studies〔J〕.J Chem Inf Model，2013；53(5)：1138-56.

7Park IH，Venable JD，Steckler C,etal.Estimation of hydrogen-exchange protection factors from MD simulation based on amide hydrogen bonding analysis〔J〕.J Chem Inf Model，2015；55(9)：1914-25.

8Kwan EE.ACD/Spectrus Processor review〔J〕.J Chem Inf Model，2012；52(7)：1898-900.

9Hegazy SK，Tolba OA，Mostafa TM,etal.Alpha-lipoic acid improves subclinical left ventricular dysfunction in asymptomatic patients with type 1 diabetes〔J〕.Rev Diabet Stud，2013；10(1)：58-67.

10Chen CJ，Vijaya KR，Tsai CC,etal.Structure and functions of gamma-dodecalactone isolated from antrodia camphorata for NK cell activation〔J〕.Bioorg Med Chem，2010；18(18)：6896-904.

11Iwai A，Shiozaki T，Miyazaki T.Relevance of signaling molecules for apoptosis induction on influenza a virus replication〔J〕.Biochem Biophys Res Commun，2013；441(3)：531-7.

12Elton TS，Selemon H，Elton SM,etal.Regulation of the MIR155 host gene in physiological and pathological processes〔J〕.Gene，2013；532(1)：1-12.

13Gu YZ，Xue Q，Chen YJ,etal.Different roles of PD-L1 and FasL in immunomodulation mediated by human placenta-derived mesenchymal stem cells〔J〕.Hum Immunol，2013；74(3)：267-76.

〔2014-12-25修回〕

(編輯苑云杰)

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.14.085

李玉玲(1975-)，女，主管檢驗師，主要從事臨床檢驗研究。

R392.1

A

1005-9202(2016)14-3536-02；