胃癌組織中Kiss-1 mRNA與Notch1 mRNA的表達(dá)及意義

段志英　李　超　趙云霞　范紅云　韓雙雙　于衛(wèi)芳

(河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院消化內(nèi)科，河北　石家莊　050031)

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胃癌組織中Kiss-1 mRNA與Notch1 mRNA的表達(dá)及意義

段志英李超1趙云霞1范紅云韓雙雙1于衛(wèi)芳1

(河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院消化內(nèi)科，河北石家莊050031)

目的探討Kiss-1 mRNA與Notch1 mRNA在胃癌組織中的表達(dá)及意義。方法采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測胃癌和癌旁正常組織中Kiss-1 mRNA與Notch1 mRNA的表達(dá)情況，分析其與臨床病理特征之間的關(guān)系。結(jié)果Kiss-1 mRNA在胃癌組織中的表達(dá)較癌旁正常組織中降低(P<0.05)；Kiss-1 mRNA的表達(dá)與胃癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期密切相關(guān)(P<0.05)，與胃癌的浸潤深度、分化程度、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無關(guān)(P>0.05)；Notch1 mRNA在胃癌組中的表達(dá)較癌旁正常組織升高(P<0.05)；Notch1 mRNA的表達(dá)與胃癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、分化程度密切相關(guān)(P<0.05)，與胃癌的浸潤深度、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無關(guān)(P>0.05)。結(jié)論Kiss-1 在胃癌的發(fā)病過程中發(fā)揮抑癌基因作用，并通過抑制轉(zhuǎn)移來影響胃癌的預(yù)后；Notch1在胃癌的發(fā)病過程中發(fā)揮癌基因作用，有潛力成為早期診斷胃癌的新型腫瘤標(biāo)記物。

胃癌；Kiss-1 mRNA；Notch1 mRNA；實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)；癌轉(zhuǎn)移

2014年中國腫瘤登記中心數(shù)據(jù)顯示，中國每年新發(fā)胃癌24萬例，在惡性腫瘤中占13.06%，每年因胃癌死亡人數(shù)15萬例，死亡率為17.8%〔1〕。研究證實〔2〕，Kiss-1基因在多種惡性腫瘤發(fā)病過程中起抑癌作用。Notch1在大多數(shù)惡性腫瘤中發(fā)揮促癌作用，而在少數(shù)惡性腫瘤(如乳腺癌、甲狀腺癌、肝癌和肺癌等)中則發(fā)揮抑癌作用〔3〕。本研究觀察胃癌組織及癌旁正常組織Kiss-1 mRNA和Notch1 mRNA表達(dá)，并分析其與臨床病理特征之間關(guān)系，探討兩者在胃癌發(fā)病過程中的作用。

1　資料與方法

1.1一般資料2013年10月至2014年10月我院34例胃癌根治術(shù)患者，術(shù)前均未接受放療、化療。其中男22例，女12例；年齡49～83歲，平均(66.06±9.18)歲。按照標(biāo)本取材部位分為胃癌組和癌旁正常對照組。胃癌組織取自腫瘤中心部位、癌旁正常組織取自距離腫瘤邊緣5 cm處，均經(jīng)病理證實診斷。標(biāo)本離體后迅速置于液氮中，于-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2主要試劑反轉(zhuǎn)錄試劑盒購自美國GeneCopoeia公司；Trizol、GAPDH(內(nèi)參)、Kiss-1和Notch1引物均購自美國 Invitrogen 生物工程公司。Kiss-1引物序列：正義：CCACCCTCTGGACATTC，反義：GCCGAAGGAGTTCCAGTT。Notch1引物序列：正義：CGAGGTCAACACAGACGAGTG。反義：GCACAGATGCC-CAGTGAAG。

1.3方法TrizoL法提取胃癌組織及癌旁正常組織中的總RNA。根據(jù)美國GeneCopoeia公司提供的反轉(zhuǎn)錄試劑盒操作說明書進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-qPCR)檢測胃癌組織及癌周邊正常組織中的Kiss-1 mRNA、Notch1 mRNA的表達(dá)情況。反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性10 min，然后按95℃15 s，60℃30 s，72℃10 s進(jìn)行40個循環(huán)，重復(fù)3次取平均值。靶基因的表達(dá)量采用2-△CT表示，其中ΔCT為CT靶基因與CT內(nèi)參的差值。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行t檢驗或Wilcoxon秩和檢驗；兩組間獨立樣本采用 Mann-WhitneyU檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)　果

2.1Kiss-1 mRNA在胃癌組織中的表達(dá)及臨床意義Kiss-1 mRNA在胃癌組、癌旁正常對照組中的表達(dá)量〔0.033 7(0.003 8～0.377 1)，0.576 3(0.167 9～1.357 4)〕差異顯著(Z=-3.548，P=0.028)。

2.2Kiss-1 mRNA與臨床病理特征的關(guān)系Kiss-1 mRNA在胃癌有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期組中的表達(dá)顯著低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組及TNM分期Ⅰ～Ⅱ期組(P<0.05)。Kiss-1 mRNA表達(dá)與性別、年齡，及腫瘤的浸潤深度、分化程度、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無關(guān)(P>0.05)，見表1。

2.3Notch1 mRNA在胃癌組織中的表達(dá)及臨床意義Notch1 mRNA在胃癌組、癌旁正常對照組的表達(dá)量〔0.310 9(0.046 1～1.854 1)、0.031 3(0.004 8～0.302 4)〕差異顯著(Z=-2.197，P=0.028)。

2.4Notch1 mRNA與臨床病理特征的關(guān)系Notch1 mRNA在胃癌有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組、低分化組及TNM分期Ⅲ～Ⅳ期組中的表達(dá)顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組、中高分化組及Ⅰ～Ⅱ期組(P<0.05)。Notch1 mRNA的表達(dá)與患者的性別、年齡及腫瘤的浸潤深度、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移分組無關(guān)(P>0.05)，見表1。

表1　Kiss-1 mRNA和Notch1 mRNA表達(dá)與胃癌臨床病理特征之間的關(guān)系

3　討　論

癌基因和抑癌基因的表達(dá)變化在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。Kiss-1基因是首先在黑色素瘤細(xì)胞株中被發(fā)現(xiàn)的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，其定位于染色體1q32-q41，編碼1個包含145個氨基酸組成的親水性蛋白，在多數(shù)惡性腫瘤中發(fā)揮著抑癌基因的作用〔4〕。Notch1最初是在人類T淋巴母細(xì)胞白血病中被鑒定出來，并證實其信號通路與腫瘤存在關(guān)系〔5〕。Buchler等〔6〕指出，Notch1在胰腺癌組織中呈高表達(dá)，發(fā)揮癌基因作用。Lu等〔7〕研究發(fā)現(xiàn)，Notch1信號途徑的激活引起食管癌EC9706細(xì)胞的凋亡，提示Notch1在食管癌中發(fā)揮抑癌基因作用。目前，Notch1在癌癥發(fā)生過程中究竟發(fā)揮抑癌或促癌作用，并無定論。

本研究提示Kiss-1與胃癌的生物學(xué)行為密切相關(guān)，在胃癌發(fā)病過程中可能發(fā)揮抑癌基因的作用。Dhar等〔8〕通過核酸酶保護(hù)分析法檢測Kiss-1在40例胃癌組織及癌旁正常組織中的表達(dá)情況，顯示Kiss-1在胃癌組織中呈低表達(dá)。Mitchell等〔9〕也得到相似的實驗結(jié)果。兩項研究同樣印證了本組關(guān)于Kiss-1在胃癌的發(fā)病過程中發(fā)揮抑癌基因作用的觀點。本文提示Kiss-1可能通過抑制胃癌的轉(zhuǎn)移來影響預(yù)后，有潛力成為判斷胃癌預(yù)后的生物學(xué)指標(biāo)。Mitchell等〔9〕的研究結(jié)果顯示，Kiss-1的表達(dá)隨著胃癌進(jìn)展而逐漸降低，并與胃癌的浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等關(guān)系密切。馮斌〔10〕發(fā)現(xiàn)，Kiss-1 mRNA的低表達(dá)直接關(guān)系到患者的5年存活率，并與胃癌的浸潤和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。兩項研究結(jié)果均指出，Kiss-1的表達(dá)與胃癌的分期及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，印證了本組結(jié)論。

目前，Notch1究竟在胃癌中發(fā)揮癌基因還是抑癌基因作用，尚不明確。本組結(jié)果提示Notch1 mRNA在胃癌發(fā)病過程中發(fā)揮癌基因的作用，Notch1 mRNA的高表達(dá)促進(jìn)了胃癌進(jìn)展，與胃癌的惡性程度密切相關(guān)，有潛力成為胃癌早期診斷、判斷惡性程度和預(yù)后的新型腫瘤標(biāo)記物。張佑蕊等〔11〕發(fā)現(xiàn)，Notch1在胃癌伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組呈高表達(dá)，而在胃癌無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組呈相對低表達(dá)；在TNM分期分組中，Notch1 mRNA表達(dá)量從Ⅰ期到Ⅳ期組逐漸升高，各期之間表達(dá)量存在顯著差異。李大衛(wèi)等〔12〕發(fā)現(xiàn)，Notch1在胃癌組織中的陽性率明顯高于正常胃黏膜組織，并證實其高表達(dá)與胃癌的分化程度、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。兩項研究結(jié)果與本組結(jié)論相似，印證了Notch1在胃癌發(fā)病過程中的癌基因作用及與預(yù)后的關(guān)系。

綜上，在胃癌的發(fā)病過程中，Kiss-1起著抑癌基因的作用，有潛力成為預(yù)測胃癌預(yù)后的指標(biāo)。Notch1在胃癌的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮癌基因作用，其高表達(dá)與胃癌惡性程度及預(yù)后相關(guān)，有潛力成為胃癌的新型腫瘤標(biāo)志物。

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2Li N，Wang HX，Zhang J，etal.Kiss-1 inhibits the proliferation and invasion of gastric carcinoma cells〔J〕.World J Gastroenterol，2012;18(15)：1872-83.

3任濤文，吳靜，周永寧，等.HER-2在胃癌及其淋巴結(jié)組織中表達(dá)的臨床意義〔J〕.第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2009；30(21)：2323，2326.

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6Buchler P，Gazdhar A，Schubert M，etal.The Notch signa-ling pathway is related to neurovascular progression of pancreatic cancer〔J〕.Ann Surg，2005；242(6)：791-800.

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8Dhar DK，Naora H，Kubota H，etal.Downregulation of Kiss-1 expression is responsible for tumor invasion and worse prognosis in gastric carcinoma〔J〕.Int J Cancer，2004；111：868-72.

9Mitchell DC，Abdelrahin M，Weng JS，etal.Regulation of KI SS-1 metastasis suppressor gene expression in breast cancer cells by direct interaction of transcription factors activator protein-2 alpha and specificity protein-1〔J〕.J Biol Chem，2006；281(1)：51-8.

10馮斌.Kiss-1基因在胃癌組織中的表達(dá)與胃癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的關(guān)系〔J〕.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2013；21(10)：2289-91.

11張佑蕊，師水生.胃癌中KLF4的表達(dá)與Sp1、Notch表達(dá)的關(guān)系及意義〔D〕.太原：山西醫(yī)科大學(xué)，2011.

12李大衛(wèi)，吳晴，彭志海，等.Notch1和PTEN在胃癌組織中的表達(dá)及其意義〔J〕.癌癥雜志，2007；26(11)：1183-7.

〔2014-12-16修回〕

(編輯苑云杰)

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.14.047

河北省科技惠民計劃課題基金資助(No.14277752D)

于衛(wèi)芳(1973-)，女，碩士，主任醫(yī)師，主要從事消化道腫瘤早診早治研究。

段志英(1978-)，女，主治醫(yī)師，主要從事消化道腫瘤研究。

R735.3

A

1005-9202(2016)14-3454-03；

1河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院內(nèi)鏡中心