右美托咪定聯合肢體遠程缺血后處理對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的保護作用

武　懿　劉晶晶　李玲芝

(河北大學附屬醫院麻醉科，河北　保定　071000)

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右美托咪定聯合肢體遠程缺血后處理對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的保護作用

武懿劉晶晶1李玲芝

(河北大學附屬醫院麻醉科，河北保定071000)

目的探討右美托咪定(DEX)聯合肢體遠程缺血后處理對大鼠局灶性腦缺血再灌注(IRI)的保護作用。方法選取成年雄性SD大鼠60只，按隨機數字表法分為對照組、DEX后處理組DEX組、遠程缺血后處理組(遠程缺血組)和聯合處理組(聯合組)各15只。通過采用線拴阻閉大腦中動脈1.5 h，再灌注48 h的方法建立大鼠局灶性腦IRI模型，其中對照組大鼠給予缺血期分離左股動脈，再灌注前15 min腹腔注射10 ml生理鹽水處理；DEX組給予缺血期分離左股動脈，再灌注前15 min腹腔注射10 ml 3 μg/kg的鹽酸DEX處理；遠程缺血組給予缺血期鉗夾夾閉左股動脈15 min后恢復血流10 min，循環3次，大腦中動脈再灌注前15 min腹腔注射10 ml生理鹽水處理；聯合組進行DEX、遠程缺血組的聯合處理。24 h后進行大鼠腦神經功能缺損評分(NDS)，48 h后以Image J軟件測量大鼠的腦梗死面積比例。結果DEX、遠程缺血、聯合組的NDS評分及腦梗死面積比例均顯著低于對照組，且聯合組低于DEX、遠程缺血組(P<0.05)；而DEX、遠程缺血組比較無統計學差異(P>0.05)。結論DEX及肢體遠程缺血后處理均可顯著改善大鼠的局灶性腦缺血再灌注損傷，二者聯合處理具有協同保護作用。

腦缺血再灌注損傷；右美托咪定；肢體遠程缺血后處理

隨著溶栓術、心臟搭橋術等血管疏通術的廣泛應用，缺血再灌注損傷(IRI)成為臨床醫師急需解決的重大難題。肢體遠程缺血后處理法是一種腦損傷保護措施〔1〕。右美托咪定(DEX)是臨床常用的一種鎮靜類藥物。有研究發現〔2〕，其對大鼠腦IRI具有保護作用。但DEX聯合肢體遠程缺血后處理法的臨床研究較少。本研究旨在通過建立大鼠中動脈阻塞(MCAO)線栓模型觀察二者的聯合處理效果。

1　材料與方法

1.1實驗動物選擇60只清潔級成年雄性SD大鼠(由北京動物實驗中心 提供)，6～10周齡，體質量240～300 g。于動物實驗室適應性飼養1 w，室溫(25.0±2.0)℃，自然光照。

1.2實驗分組與大鼠模型制備根據隨機數字表法分為對照組、DEX后處理組(DEX組)、遠程缺血后處理組(遠程缺血組)和聯合處理組(聯合組)各15只。參照改良的Longa等〔3〕的線栓法建立大鼠大腦MCAO線栓模型：禁食12 h后，采用10%水合氯醛麻醉大鼠，仰臥固定，逐層解剖分離頸部腺體、肌肉組織，暴露右側頸動脈，結扎翼鄂動脈，由頸總動脈分叉處推送合適型號的尼龍栓線至有抵觸感(深度約18 mm)。缺血1.5 h后拔出線栓進行中動脈血流再灌注。實驗過程中保持大鼠體溫(37.0～37.5)℃。

1.3處理方法對照組：模型制備時缺血1.5 h期間分離左股動脈，血流再灌注前15 min腹腔注射10 ml生理鹽水，再灌注48 h。DEX組：模型制備時缺血1.5 h期間分離左股動脈，血流恢復前15 min腹腔注射10 ml劑量為3 μg/kg的鹽酸DEX(江蘇恩華藥業股份有限公司)，恢復血流再灌注48 h。遠程缺血組：模型制備時缺血1.5 h期間分離左股動脈，使用鉗夾夾閉15 min后放開10 min，循環3次，大腦中動脈恢復再灌注前15 min腹腔注射10 ml生理鹽水，再灌注48 h。聯合組：采用DEX組和遠程缺血組的聯合處理方法。

1.4觀察指標

1.4.1神經功能缺損評分(NDS)大鼠蘇醒后置于鼠籠內，自由進水飲食。腦缺血再灌注24 h進行NDS評分，根據大鼠的活動情況及意識表現進行評估，評分越高表示大鼠的神經功能缺損狀況越嚴重。以無功能障礙計為0分，無法伸展左前肢為1分，向左側旋轉為2分，向左側傾倒為3分，無自主活動伴意識喪失為4分，死亡為5分；

1.4.2腦梗死面積比例再灌注48 h后麻醉大鼠，斷頭處死，迅速取出大鼠腦組織置于-20℃冰箱中冰凍20 min。于冠狀面均勻制成5～6片厚度為2 mm的切片，分別經2%氯化三苯四唑(TTC)染色20 min、甲醛緩沖液固定10 min。染色后粉紅色組織為正常腦組織，白色區域為腦梗死區。24 h后以Image J軟件計算所有切片的腦梗死面積比例之和。腦梗死面積比例=梗死區面積/總面積×100%，用于反映腦梗死的嚴重程度。

1.5統計學方法采用SPSS14.0軟件進行單因素方差分析、SNK-q檢驗。

2　結　果

再灌注24 h后，四組大鼠NDS有統計學意義(F=19.201，P=0.000)，兩兩比較，DEX、遠程缺血、聯合組的NDS均顯著優于對照組，且聯合組優于DEX、遠程缺血組(P<0.05)。而DEX、遠程缺血組比較無統計學差異(P>0.05)。再灌注48 h后，四組大鼠腦梗死面積比例總體有統計學意義(F=24.358，P=0.000)，兩兩比較，DEX、遠程缺血、聯合組均顯著低于聯合組，且聯合組比例低于DEX、遠程缺血組(P<0.05)。而DEX、遠程缺血組比較無統計學差異(P>0.05)。見表1。

表1　四組大鼠NDS、腦梗死面積比例比較

與對照組比較:1)P<0.05；與聯合組比較:2)P<0.05

3　討　論

IRI病因與發病機制十分復雜，涉及血流動力學、細胞分子、能量代謝障礙等諸多因素，且各因素互為因果、相互關聯，通過級聯反應，最終導致細胞的凋亡或壞死。IRI是造成患者致殘及死亡的重要原因，由于大腦中動脈是腦梗死患者的最常見發病部位。研究發現〔4〕，DEX及肢體遠程缺血后處理可增加組織器官對IRI的耐受性，減輕IRI。

DEX是一種新型的腎上腺受體激動劑，具有鎮靜、抗焦慮、穩定血流動力學等作用，廣泛應用于手術麻醉等過程中，其對機體多臟器亦具有保護作用。本研究提示DEX對腦IRI具有保護作用，與以往研究結果相符〔5〕。關于其作用機制，有研究認為可能與其抑制細胞凋亡和交感神經的興奮、減少腦內興奮性神經遞質的釋放和炎癥因子等作用有關，也有研究發現其對海馬區神經元具有保護作用〔6〕。

遠隔缺血后適應(RPC)是指通過對遠隔器官采用短暫的非致死性的缺血再灌注處理措施，可減輕缺血器官的IRI。于2005年由Kerendi等〔7〕首次提出，其發現采用阻斷腎動脈5 min、再灌注1 min處理對大鼠缺血心肌具有保護作用，心肌梗死面積較對照組減少50%。目前該處理方法的保護作用已在缺血的腦〔8〕、腎臟〔9〕等器官中得到證實。四肢由于對缺血較耐受，因此肢體遠程缺血后處理成為對缺血器官進行保護的重要措施。本研究結果說明肢體遠程缺血后處理對腦IRI具有保護作用，與既往研究結果相符〔10〕。對其作用機制目前尚未完全闡明，而研究認為其主要與抑制IRI過程中臟器的炎性反應、調節免疫系統有關〔11〕。同時也有研究認為其與傳入神經通路和氧化-內質網應激信號通路有關〔12〕。本研究結果發現，DEX與肢體遠程缺血后處理的聯合處理效果顯著優于二者的單獨處理效果，說明二者對大鼠局灶性腦IRI具有協同作用，與李剛等〔13〕的研究結果一致。這可能與二者共同作用于多個靶點或啟動多種保護機制有關。但這僅為小樣本動物實驗的結果，臨床應用還有待大樣本實驗及臨床研究的進一步探索。

1常莉莎.遠隔肢體缺血后適應對大鼠腦缺血TLR4介導的保護作用機制的研究〔D〕.天津：天津醫科大學，2014.

2史曼，黃青青.右美托咪定的臨床應用研究進展〔J〕.現代醫藥衛生，2011；27(7)：1022-4.

3Longa EZ，Weinstein PR，Carlson S，etal.Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats〔J〕.Stroke，1989；20(1)：84-91.

4張曉峰.蛋白激酶C在電針預處理和遠程缺血后處理誘導腦保護中的作用〔D〕.西安：第四軍醫大學，2010.

5林生.右美托咪定對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護作用及機制〔D〕.濟南：山東大學，2013.

6Slosberg PS.The neuroprotective effect of dexmedetomidine in the hippocampus of rabbits after subarachnoid hemorrhage〔J〕.Surg Neruol，2009；72(6)：648.

7Kerendi F，Kin H，Halkos ME，etal.Remote postconditioning.Brief renal ischemia and reperfusion applied before coronary artery reperfusion reduces myocardial infarct size via endogenous activation of adenosine receptors〔J〕.Basic Res Cardiol，2005；100(5)：404-12.

8Wang Q，Zhang X，Ding Q，etal.Limb remote postconditioning alleviates cerebral reperfusion injury through reactive oxygen species-mediated inhibition of delta protein kinase C in rats〔J〕.Anesth Analg，2011；113(5)：1180-7.

9冷玉芳，姚愛軍.肢體缺血后處理和腎臟缺血后處理對大鼠腎臟缺血-再灌注損傷的影響〔J〕.臨床麻醉學雜志，2009；25(11)：974-7.

10劉強.遠隔缺血后適應對大鼠局灶腦缺血-再灌注炎性損傷的保護作用及其機制的研究〔D〕.濟南：山東大學，2014.

11Shimizu M，Sexena P，Konstantinov IE，etal.Remote ischemic preconditioning decreases adhesion and selectively modifies functional responses of human neutrophils〔J〕.J Surg Res，2010；158(1)：155-61.

12Anrather J，Hallenbeck JM.Biological networks in ischemic tolerance-rethinking the approach to clininal conditioning 〔J〕.Transl Stroke Res，2013；4(1)：114-29.

13李剛，王袁，趙嬌妹，等.右美托咪定聯合遠程缺血后處理增強腦保護效應的研究〔J〕.重慶醫學，2014；43(36)：4849-51.

〔2016-02-15修回〕

(編輯袁左鳴/滕欣航)

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.14.027

劉晶晶(1981-)，女，碩士，主治醫師，主要從事臨床麻醉及藥理學研究。

武懿(1979-)，女，碩士，主治醫師，主要從事臨床麻醉及藥理學研究。

R743

A

1005-9202(2016)14-3413-02；

1武警北京市總隊第二醫院麻醉科