蒙藥漏蘆花總黃酮含量測定方法研究

李 爽 王曉琴 韓國慶 黃 慧

(1.內蒙古滿州里市人民醫院，內蒙古 滿洲里 021400；2.內蒙古醫科大學 藥學院,內蒙古 呼和浩特 010110)

*通訊作者：王曉琴，博士，教授。E-mail: nywangxiaoqin@163.com

蒙藥漏蘆花總黃酮含量測定方法研究

李 爽1王曉琴2*韓國慶2黃 慧2

(1.內蒙古滿州里市人民醫院，內蒙古 滿洲里 021400；2.內蒙古醫科大學 藥學院,內蒙古 呼和浩特 010110)

目的：建立蒙藥漏蘆花總黃酮含量測定方法，并測定9個藥材樣品中總黃酮的含量。方法以芹菜素為對照品，采用紫外分光光度法測定總黃酮含量。結果芹菜素對照品濃度在3.39～11.87μg·mL-1范圍內與吸光度呈良好線性關系，平均加樣回收率為100.95%，RSD 為2.24%。結論該方法靈敏高，準確性強，精密度高，重復性好，可以用作漏蘆花總黃酮的含量測定。

漏蘆花；總黃酮；含量測定；芹菜素

漏蘆花為菊科植物祁州漏蘆Rhaponticum uniflorum (L)DC.的干燥花序，蒙藥名為洪格勒-珠爾，國內主要分布在河北、內蒙古、黑龍江、吉林、遼寧、陜西、甘肅、青海、山東等地。其性涼，味微苦，具有殺“黏”，止刺痛，清熱解毒、消腫排膿、生肌、下乳之功效，為蒙醫常用藥材[1-2]。

目前，各學者從漏蘆花中分離得到多種黃酮類成分[3]，也有相關報道建立了漏蘆花總黃酮含量測定方法，但均有欠缺[4,5]。根據課題組前期對漏蘆花化學成分的系統研究表明漏蘆花中的黃酮類成分主要為以芹菜素(apigenin)為苷元的一系列化合物。目前以芹菜素為對照品測定漏蘆花總黃酮的方法未見報道。因此，課題組建立蒙藥漏蘆花總黃酮含量測定方法，為蒙藥漏蘆花進一步的化學成分研究和質量控制提供科學依據。

1 儀器與材料

AL204電子天平(梅特勒-托利多儀器)；TU-1901雙光束紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器公司)；UV1000紫外可見分光光度計(上海天美科學儀器有限公司)；KQ-250DA超聲波提取器(昆山市超聲儀器有限公司)。

芹菜素標準品購買于上海源葉生物科技有限公司 (編號YY90113)，所用試劑均為分析純，水為蒸餾水。9批漏蘆花藥材分別采集于內蒙古地區和購買于藥材公司和醫院，方法學考察所用藥材為1號樣品(購買于包頭市中蒙醫院)。

2 方法與結果

2.1 供試品溶液制備：取漏蘆花粉末約(過60目篩)約0.1g，精密稱定，置于150 mL具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇溶液25 mL，密塞，稱定質量，超聲(功率100W)提取30 min,冷卻后補足失重，搖勻，靜置，濾過，精密吸取續濾液1mL，置于25 mL容量瓶中，用70%甲醇定容搖勻即得。

2.2 對照品溶液制備： 精密稱取干燥至恒重的芹菜素標準品10.6 mg，用70%甲醇溶解并定容至25 mL的容量瓶中，得濃度為0.424mg·mL-1的對照品溶液。

2.3 最大吸收波長選擇 ： 分別吸取1 mL對照品溶液和供試品溶液于25 mL量瓶中，用70%甲醇定容，以70%甲醇為空白對照，于200～400 nm波長范圍內掃描，在268 nm處得到最大吸收波長，選擇268 nm為測定波長，掃描結果見圖1。

2.4 線性關系考察： 分別精密吸取對照品溶液0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7 mL置于25 mL容量瓶中，加70%甲醇定容至25 mL，得芹菜素濃度分別為3.39、5.09、6.78、8.48、10.18、11.87 μg·mL-1的對照品溶液，以70%甲醇為空白對照，于268 nm波長處測定各吸光度。以芹菜素濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線，得線性回歸方程：Y=0.0707X-0.00511，r = 0.9997，表明芹菜素對照品在3.39～11.87 μg·mL-1范圍內與吸光度呈良好線性關系。

2.5 重復性試驗：按2.1項下的方法平行制備供試品溶液6份，并于268 nm測定吸光度。結果漏蘆花總黃酮平均含量為27.72 mg·g-1，RSD為2.03%，表明方法重復性良好。

2.6 精密度試驗：按2.1項下的方法制備供試品溶液，并于268 nm連續測定吸光度6次，總黃酮含量的RSD為0.17%，表明儀器精密度良好。

2.7 穩定性試驗：按2.1項下的方法制備供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、12 h在268 nm處測定吸光度，總黃酮含量的RSD為0.75%，表明供試品溶液在12 h內穩定性良好。

2.8 加樣回收率試驗： 取已知含量的同一樣品6份，各約0.05 g，精密稱定，分別按藥材粉末已知含量的80%、100%、120%3個水平精密加入芹菜素對照品，按2.1項下供試品溶液制備方法制備供試品溶液，并于268 nm處測定吸光度，計算含量及回收率，結果見表1。

表1 加樣回收率結果

3 含量測定

取以下9個批次的藥材粉末(過60目篩)約0.1 g，精密稱定，按2.1項下的方法制備供試品溶液，并于268 nm測定吸光度，每個批次平行測定3次，并采用標準曲線法計算含量，結果見表2。

表2 不同批次漏蘆花總黃酮含量測定結果

4 討論

本實試驗對文獻報道較多的3種黃酮類化合物蘆丁、槲皮素、芹菜素為對照品進行了篩選，將3種對照品溶解配制成濃度適宜的對照品溶液，按2.1項下的方法制備供試品溶液在紫外分光光度計200～400 nm進行波長掃描，結果顯示供試品溶液在268 nm和340 nm處有最大吸收，蘆丁對照品在257 nm和359 nm處有最大吸收，槲皮素對照品在256 nm和374 nm處有最大吸收，芹菜素對照品在268 nm處有最大吸收。

以蘆丁為對照品，采用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH顯色法和AlCl3顯色法對蘆丁對照品和供試品溶液進行顯色，結果顯示蘆丁對照品用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH顯色在509 nm處有最大吸收，用AlCl3顯色在450 nm處有最大吸收；而供試品溶液在兩種顯色方法下與對照品相比無共同最大吸收，原因可能與樣品中蘆丁含量低以及干擾成分較多有關。因此，本課題采用芹菜素為對照品，以268 nm為測定波長，結果顯示該方法簡單，準確，重復性好，可作為漏蘆花總黃酮含量測定的方法。

紫外分光光度法是測定中藥和天然藥物中一類成分總含量的常用方法。本研究建立了紫外分光光度法測定漏蘆花總黃酮含量的方法，使待測成分最大限度的檢出，含量測定結果更為準確。

[1]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典(一部)[S]．北京: 中國醫藥科技出版社，2010．

[2]國家中醫藥管理局中華本草編委會．中華本草(蒙藥卷) [M]．上海: 上海科學技術出版社，1999．

[3]陳常蓮，陳紅梅，泉山．蒙藥漏蘆花總黃酮含量測定[J]．中國民族醫藥雜志，2009，9：58-59．

[4]薩楚拉圖，牛雪平，王玲霞．紫外分光光度法測定蒙藥漏蘆花中總黃酮含量[J]．分析試驗室，2008，27(12)：119-120.

R291.2

B

1006-6810(2017)05-0039-02

2017年2月13日收稿