高效液相色譜法測定硫酸阿托品的含量

高武，吳勇

(1.國藥集團精方(安徽) 藥業股份有限公司，安徽 宣城　242000；2.馬鞍山市食品藥品檢驗中心，安徽 馬鞍山　243000)

?

高效液相色譜法測定硫酸阿托品的含量

高武1，吳勇2

(1.國藥集團精方(安徽) 藥業股份有限公司，安徽 宣城242000；2.馬鞍山市食品藥品檢驗中心，安徽 馬鞍山243000)

摘要：目的建立一種用HPLC法測定硫酸阿托品含量的方法。方法色譜柱：Agilent Eclipse X DB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：0.05 mol·L-1KH2PO4溶液(含庚烷磺酸鈉0.002 5 mol·L-1)-乙腈(84∶16)(用磷酸或氫氧化鈉試液調節pH值至5.0)；檢測波長：225 nm;柱溫30℃；流速1.0 mL·min-1。結果硫酸阿托品在2.6425～42.48 mg·L-1范圍內與峰面積呈良好的線性關系。回歸方程為A=11 938C-1348 8，r=0.999 9(n=3)，回收率為：100.19%，RSD 為1.33% 。結論HPLC法操作簡單，可靠，準確性及重現性好。

關鍵詞：色譜法,高壓液相;阿托品;回收率

硫酸阿托品屬于莨菪堿類生物堿，是臨床上常用的處方藥，其作用原理主要是與毒蕈堿型膽堿受體(簡稱M受體)相結合，競爭性拮抗乙酰膽堿或其它膽堿受體激動藥的作用。藥理作用主要表現減少腺體分泌、抑制胃腸道及膀胱平滑肌興奮、松弛瞳孔括約肌使瞳孔擴大、升高眼壓、心率加快、治療量的阿托品可輕度興奮延髓及迷走神經的興奮。臨床上常用于緩解各種內臟絞痛，眼科擴瞳用于驗光配眼鏡、眼底檢查、治療虹膜睫狀體炎癥，全身麻醉前給藥用于減少腺體的分泌，治療緩慢型心律失常、各種感染性休克及有機磷類農藥中毒的搶救[1-2]。硫酸阿托品使用不當可引起不良反應，故相關制劑研究較多，如有LC-MS、毛細管電泳、HPLC法等[3-6]，硫酸阿托品片及注射液標準收載于中國藥典，其含量測定方法為酸性染料比色法[7]，但實際操作過程中較繁瑣，且準確性及重復性不高，因而建立更為簡便的液相色譜法，為相關的制劑含量測定作參考。

1　儀器與試藥

1.1儀器Waters 2695高效液相色譜儀， 2998檢測器，Empower 2色譜工作站(美國 waters 公司)；梅特勒AL-104電子天平，Sartorius BP211D電子天平，JK-2200 超聲儀(合肥金尼克機械制造有限公司)，METTLER TOLEDO FE 20 pH酸度計。

1.2試藥硫酸阿托品對照品(購自中國食品藥品檢定研究院，批號為100040-201011，供含量測定用，按(C17H23NO3)2·H2SO4計，含量為96.5%)，硫酸阿托品注射液與片劑為市場上抽查品種，水為純化水，乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。

2　方法與結果

2.1色譜條件[2]色譜柱：Agilent Eclipse X DB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：0.05 mol·L-1KH2PO4溶液(含庚烷磺酸鈉0.0025 mol·L-1)-乙腈(84∶16)(用磷酸或氫氧化鈉試液調節pH值至5.0)；柱溫為30℃；檢測波長：225 nm;流速為1.0 mL·min-1。

2.2溶液的制備

2.2.1供試品溶液的制備將硫酸阿托品片劑碾碎，精密稱取供試品適量(約相當于硫酸阿托品2.5 mg)，置50 mL容量瓶中，加30 mL水超聲使溶解，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。注射劑精密量取直接稀釋即可。

2.2.2對照品溶液的制備精密稱取硫酸阿托品對照品適量，置100 mL容量瓶中，加水60 mL超聲使溶解后，定容，搖勻，即制成對照品溶液(每1 mL約含100 μg的溶液)。

2.3測定法分別取供試品溶液和對照品溶液于色譜用測試瓶中，進樣量為20 μL，注入高效液相色譜儀，測定，即得HLPC 色譜圖，見圖 1。

A.對照品

B.供試品 圖1　HPLC色譜圖

2.4系統適宜性按2.1項下色譜條件進行測定，硫酸阿托品主峰應與相鄰色譜峰的分離度符合要求，理論塔板數應不低于5 000。

2.5線性范圍考察取對照品溶液，按上述色譜條件，以Waters自動進樣器分別進樣5、10、20、30、40、60及80 μL，注入Waters液相色譜儀中，記錄硫酸阿托品的色譜圖，峰面積分別為46 487.67、100 044、227 664.5、345 772、469 653.3、700 985.3、939 798，以色譜圖中硫酸阿托品峰面積A為縱坐標，對照品的濃度C(mg·L-1)為橫坐標，繪制相應的標準曲線，得硫酸阿托品的回歸方程為：A=11 938C-13488，r-0.9 999(n=3)，結果表明硫酸阿托品濃度在2.6425～42.48 mg·L-1范圍內與色譜峰面積呈良好的線性關系。

2.6精密度試驗取2.2.2項下的對照品溶液，按2.1項下的色譜條件連續進樣6針，測得硫酸阿托品的色譜峰面積分別為224489、223916、230142、232629、227287、227524，RSD為1.46%，表明該方法精密度良好。

2.7穩定性試驗取同一批次硫酸阿托品供試品溶液，分別在0、1、2、4、8及12h取樣測定，結果硫酸阿托品峰面積17500、18500、19580、19580、17580，RSD為0.26%，表明硫酸阿托品供試品溶液在12 h內穩定。

2.8重復性試驗取同一批次硫酸阿托品供試品，按“供試品溶液制備”項下方法制備供試品溶液 5 份，精密進樣 20 μL進行測定峰面積分別為289376、287531、291152、285531、290180，RSD 為0.78%，表明該方法重復性良好。

2.9加樣回收試驗取已知含量的硫酸阿托品供試品共 6 份，精密加入相同量的對照品溶液進行平行操作，分別按樣品含量測定方法進樣進行測定，計算硫酸阿托品的回收率。結果見表 1。平均回收率為100.19%，RSD 為1.33% 。

表1　回收率實驗結果(n=3)

2.10樣品的含量測定按上述溶液的制備2.2項下的方法配制相應的供試品溶液及對照品溶液，按“2.1”項下方法進樣進行測定，記錄相應的硫酸阿托品色譜圖，按外標法以硫酸阿托品的峰面積進行計算，即得。結果見表2。

表2　樣品測定結果(n=3)

3　討論

硫酸阿托品片劑及注射液的含量測定采用酸性染料比色法，先用三氯甲烷提取，再用溴甲酚綠顯色，用紫外分光光度法測定，該操作比較繁瑣，且三氯甲烷毒性較大，不利于環保，用分液漏斗提取過程較復雜，測定過程中吸收波長不在給定波長處等影響因素較多，使得測定的結果重復性極差，因而對提高標準勢在必行。

流動相及色譜條件的選擇：參照相關文獻及中國藥典中硫酸阿托原料中有關物質的測定方法，發現藥典中測原料有關物質的色譜條件測硫酸阿托品含量更簡便可行，這與藥典中大多數藥品的含量測定與有關物質的測定方法相同相吻合[8-10]。

本法測硫酸阿托品，同時用Agilent 1260及Kromasil C18，Hypersil C18色譜柱測定，均能取得相近的結果，說明本法適用性好。此外，測試中無其它雜質峰的干擾，簡化了實驗操作，與現行的標準相比[7]，本法操作更簡便，準確度、精密度更高，可用于硫酸阿托品類相關藥品的質量控制，具有較好的實際應用價值。

參考文獻

[1]鄒春蘭.鹽酸戊乙奎醚對婦科腹腔鏡手術患者腺體分泌的抑制作用[J].安徽醫藥,2014,18(4):759-760.

[2]雷金花,黃菊敏,吳曉云.早期消化道毒物清除的集束化護理在急性重度有機磷中毒的應用[J].安徽醫藥,2013,17(4):712-713.

[3]徐潔,胡文卉,顧冬飛,等.聯用技術鑒定與測定硫酸阿托品有關物質[J].中國藥科大學學報,2014,45(4):438-443.

[4]楊志明,汪蕓,張小軍,等.毛細管電泳-電致化學發光法測定維U顛茄鋁膠囊中硫酸阿托品的含量[J].藥物分析雜志,2008,28(7):1042-1045.

[5]張磊,白青山,王亮.復方顛茄口服溶液中硫酸阿托品含量測定及質量標準研究[J].藥物分析雜志,2013,33(8):1407-1410.

[6]羅曉梅,尹懷文.高效液相色譜法測定麻顛口服溶液中鹽酸麻黃堿和硫酸阿托品的含量[J].中南藥學,2015,13(1):90-92，98.

[7]國家藥典委員會.中國藥典(二部)[S].北京：中國醫藥科技出版社，2015:1335-1337.

[8]范本沖,范義鳳.硫酸阿托品滴眼液含量測定方法的改進[J].交通醫學,2013,27(1)29-31.

[9]李啟彬,李樹立.高效液相色譜法測定硫酸阿托品注射液的含量[J].臨床合理用藥雜志,2014,7(8A)59-60.

[10] 陳德俊,徐志洲,張雷,等.HPLC測定硫酸阿托品片的含量及含量均勻度[J].中國現代應用藥學,2015,32(7)853-855.

doi:10.3969/j.issn.1009-6469.2016.07.016

(收稿日期：2016-02-11，修回日期：2016-04-09)

Determination of Atropine Sulfate by HPLC

GAO Wu1，WU Yong2

(1.SinopharmGroupJingfang(Anhui)PharmaceuticalCo.Ltd,Xuancheng,Anhui242000,China;2.Ma’anshanCenterforFoodandDrugInspection,Ma'anshan,Anhui243000,China)

Abstract:ObjectiveTo establish a method for the analysis of Atropine Sulfate by HPLC.MethodsThecolumnwas Agilent Eclipse X DB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm).The mobile phase consisted of 0.05 mol·L-1potassium dihydrogen phosphate solution(containing 0.002 5 mol·L-1sodium heptanesulfonate) -acetonitrile(84∶16)(the pH value adjusted to 5.0 by phosphoric acid or sodium hydroxide solution).The detection wavelength was set at 225 nm with a column temperature at 30℃,and the flow rate was 1.0 mL·min-1.ResultsThe linear range was 2.6425～42.48 mg·L-1.The regression equation was A=11 938C-13 488，r=0.9 999(n=3).The average recovery was 100.19% and RSD was 1.33%.ConclusionThis method of operation is simple,reliable,accurate and well reproducible.

Key words:Chromatography,high pressure liquid;Atropine;Retrieving rate