水稻苗期稻瘟病抗性鑒定

楊永紅康敏龔建華張學文洪亞輝

（1.湖南農業大學生物科學與技術學院湖南長沙4100002.株洲市農業科學研究所湖南株洲412000）

水稻苗期稻瘟病抗性鑒定

楊永紅1，2康敏1，2龔建華2張學文1洪亞輝1

（1.湖南農業大學生物科學與技術學院湖南長沙4100002.株洲市農業科學研究所湖南株洲412000）

水稻稻瘟病（rice blast）是水稻生產上的主要病害之一。它是一種真菌（Magnaporthe oryzae）病害，分布范圍及廣，流行速度極快，對水稻的危害極大。根據稻瘟病發生的時期和部位，可分為苗瘟、葉瘟、節瘟、頸瘟和粒瘟。以葉瘟發生最早，在秧苗時期就可以發生，并可以進行鑒定。

雖然有些品種具有高度抗稻瘟病的特性，但是由于病源菌的生理小種變異頻繁，抗病品種的抗性容易喪失，很快會變為感病型。這些并非是品種抗病性的改變，而是由于病源菌生理小種的頻繁變化所致。必須不斷了解病原菌的變化，并不斷選育出新的抗病品種用于生產，才能有效地控制病害。本文就稻瘟病的鑒定方法進行了闡述。

水稻；苗期；稻瘟病；抗性

引言

稻瘟病發生和流行的環境條件，溫度以25～28℃最為適宜，空氣相對濕度為96%以上最為適宜。這時菌絲發育和分生孢子形成均有利。分生孢子的萌發還要求有水滴存在。光照對孢子的形成、萌發、浸入都有抑制作用。分生孢子萌發后，浸入組織，經4d的潛育期就可出現病班，稻株易感病的生育時期是四葉期、分蘗期和穗期。偏施氮肥和排灌不良易導至稻瘟病的發生和流行。

1 稻瘟病的鑒定

稻瘟病的鑒定方法分為人工接種鑒定和自然鑒定兩種。前者常用于苗瘟和葉瘟的鑒定，后者可用于苗瘟、葉瘟、枝梗瘟和頸病等的鑒定。

所需用品：

（1）材料

①抗感稻瘟病特性不同的水稻品種材料數個。

②供試稻瘟病菌種。從當地收集分布廣、致病力強的主要稻瘟菌代表性生理小種，將不同小種分別進行培養繁殖，接種時混合使用。

（2）儀器和用品

高壓滅菌鍋、超凈工作臺，酒精燈、恒溫培養箱，三角瓶、培養皿、接種環、搪瓷盤、顯微鏡、載玻片、蓋玻片、紗布、普通噴霧器或醫用噴頭噴霧器、注射器、橡膠管、保溫保濕遮陽用品等。

（3）藥品

可溶性淀粉、酵母、瓊脂、大麥或高梁種子、無菌水等。

2 操作方法

2.1 人工接種鑒定法

2.1.1 制備菌種——采用酵母淀粉瓊脂培養基

將瓊脂10～15g放入1000mL水中加熱溶化，再加入可容性淀粉（或蔗糖）10g，酵母2g，分裝入試管中，進行高壓滅菌。取出后制成斜面，接入所采集的稻瘟菌菌種，放在26～28℃恒溫箱中培養3～4d后，搖動三角瓶中的大麥粒，使菌絲均勻生長。待菌絲體長滿大麥粒并變黑時，用自來水沖洗大麥粒上的菌絲，再將大麥粒薄攤于搪瓷盤中，用1～2層紗布覆蓋以保濕，置于25～28℃下培養48h，即可產生出大量孢子，可供接種之用。應注意在擴大繁殖時搪瓷盤內的濕度不宜保持過高，否則只長大量菌絲，而產孢子很少。

2.1.2 育秧

將各供試水稻材料的種子進行粒選，各取30～40粒種子，經消毒、沖洗、催芽后，在盛有肥沃泥土的搪瓷盤中育秧。每個盤中最好同時安排有感病和抗病品種作對照。在幼苗2葉期定株，每個材料選留10株生長一致的秧苗。定株后酌施2～3次氮肥，最后一次施氮肥應在接種前3～4d施用，使幼苗生長嫩綠。一般在3～4葉期接種。如采用注射接種鑒定法，可在秧田中育秧，移植于大田后進行接種鑒定。

要注意以下幾點：

適時播種：既要考慮到在自然條件下的濕度和溫度，最利于病菌的浸入，發病與流行，又要使供試材料正是最易感病的生育時期，一般在3～4葉期，日平均氣溫25～28℃和陰雨高濕，葉面長時間（12h以上）常有水珠的時期，最有利于發病。

育秧方式：采用育秧盤育秧，每盤中最好都安排感病品種對照，整個鑒定材料中還應安排品種對照。采用注射接種方法，可以在秧田育秧，后移植于本田。

苗床要增施氮肥：（接種前4～5d），以利于發病。

2.1.3 接種

噴霧接種：當秧苗達3～4葉期時，先按病菌小種分別配制孢子懸浮液，用100倍顯微鏡檢孢子密度，平均每個視野應有孢子20～25個（孢密度則為20～25萬個/mL）。然后將不同生理小種的孢子懸浮液混合，用于接種。采用專用噴霧器噴霧接種。噴霧時要將葉片充分均勻濕潤。接種后，在26～28℃下，用薄膜覆蓋保濕24h。然后移至室外，在20～30℃下保持高濕，培養7d，進行病情鑒定。

孢子懸浮液的配制：將上述產生孢子的大麥粒放入盛有自來水的燒杯中經攪拌制成孢子懸浮液，其孢子濃度在100倍顯微鏡下觀察，平均每個視野20～25個/mL，隨后將不同小種的孢子懸浮液混合成混合孢子懸浮液。

接種：用專用的普通噴霧器或醫用喉頭噴霧器噴霧接種。噴霧時要使葉片上布滿均勻的霧點。接種最好是在專用接種室內進行，便于保濕保溫。

保溫、保濕和遮強光：噴霧接種后，秧苗應在26～28℃和保持葉片上有水珠的濕度條件下24h，而后移于室外，在20～30℃下，經4d左右即可見發病。

注射接種：

孢子懸浮液的配制：與“噴霧接種”相同。

接種：一般在水稻6～7葉期分蘗進行，接種的分蘗必須有一張未展開的嫩心葉，使用醫用皮下注射器從葉鞘外側注入孢子懸浮液，直到多余菌液從心葉中冒出為止。接種后7d調查植株的發病情況。

注意：這種方法把菌液直接注射到葉鞘內，使心葉較長時間處于浸漬狀態，保證了濕度，因此，發病往往較噴霧法重，一般條件的情況下采用。

2.2 自然誘發法

選擇稻瘟病重病區，在多霧天氣和陰雨的條件下，種植鑒定材料，采用自發誘發抗病鑒定。

將鑒定材料種植在重病區肥沃土壤上，施氮水平略高于當地豐產田。如有必要可進行人工田間接種，以誘導發病。每個鑒定材料一般栽植10～20叢，可移栽或直播，重復三次。以當地抗、感品種作對照。在鑒定區周圍應種植若干行咸感病的品種作誘發行，以增加感染強度。保持高濕條件。

對于數量較大的世代材料，每個株系種植2～5行，每行10株（叢），每隔10個株系種植一個抗、感病品種作對照。當感病品種達到高度發病時，即可進行病情鑒定。

3 病情鑒定

一般在接種后7d左右進行病情鑒定。

病情鑒定的方法可按全國稻瘟病鑒定分級標準（表1）逐株進行，分別記錄每株鑒定的結果，然后計算各品種的病情指數。

表1 苗瘟和葉瘟抗性分級標準

苗瘟和葉瘟抗性分級標準（IRRI）。

表2

S511

A

1004-7344（2016）30-0204-02

國際水稻所將稻瘟病的抗性分級標準分為10級（表2）。

2016-9-30