回顧性分析抗核抗體單一熒光核型與抗核抗體譜分型的關系

黃琳淋，張松照

(1.重慶市涪陵中心醫院檢驗科　408000；2.浙江大學醫學院附屬第二醫院檢驗科，杭州 310009)

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回顧性分析抗核抗體單一熒光核型與抗核抗體譜分型的關系

黃琳淋1，張松照2

(1.重慶市涪陵中心醫院檢驗科408000；2.浙江大學醫學院附屬第二醫院檢驗科，杭州 310009)

摘要:目的分析抗核抗體(ANA)單一熒光模型陽性的樣本免疫印跡法檢測的結果，探討兩者的相關性，并研究是否能通過熒光模型初步判斷其特異性抗體。方法回顧性分析347例ANA單一熒光模型陽性標本，對比間接免疫熒光法和免疫印跡法檢測的符合率。結果347例間接熒光法ANA陽性標本，其中自身免疫性疾病標本137例，非自身免疫性疾病標本210例，免疫印跡法檢測ANA陽性例數分別為100、60例，符合率分別為73.0%、28.6%。核型主要以核顆粒型為主，多出現抗SSA、抗SSB、抗Ro52抗體，高爾基體型、肌動蛋白型核型等核型少見。僅有3例標本的核仁型在分型中出現條帶。著絲點型多會出現抗著絲點抗體，特異性高。結論在自身免疫性疾病患者中，間接免疫熒光法和免疫印跡法兩者具有較高的相關性，但因其具有各自的局限性，應將兩者結合起來，報告熒光核型。

關鍵詞:抗核抗體；間接免疫熒光法；免疫印跡法；核型

由于機體免疫功能異常，常出現針對自身細胞內各種成分的自身抗體，這類抗體總稱為抗核抗體(ANA)，而自身免疫性疾病，如系統性紅斑浪狼瘡、混合型結締組織病等，常常能檢測出與疾病相關的自身抗體。這些自身抗體在鑒別診斷自身免疫性疾病上具有十分重要的意義。臨床常用間接免疫熒光法(IIF)作為檢測ANA的篩查方法，針對細胞成分的總抗體，檢測靈敏度高，但特異性較低；同時用免疫印跡法對自身可溶性抗原分型，具有較高特異度。本文主要分析IIF與免疫印記法在ANA檢測中的相關性，探討兩種方法在疾病診斷中的作用。

1資料與方法

1.1一般資料回顧性分析來自浙江省浙江大學附屬第二醫院就診患者，IIF檢測ANA為陽性(滴度≥1∶100)，單一熒光模型的樣本347例。

1.2方法IIF檢測采用歐蒙抗核抗體IgG試劑盒，以Hep-2細胞和猴肝為抗原基質，血清稀釋度為1∶100、1∶320、1∶1 000，以滴度≥1∶100為陽性；免疫印跡法檢測采用抗核抗體歐蒙印跡法試劑盒，抗原包括：抗nRP/Sm、抗Sm、抗SSA、抗Ro52、抗SSB、抗Scl-70、抗PM-Scl、抗Jo-1、抗CNEP B、抗PCNA、抗核小體、抗組蛋白、抗核糖體P蛋白、抗AMA M2、抗dsDNA抗體。儀器采用全自動免疫印記儀EUROBlotMasterⅡ、掃描儀、OLYMPUS熒光顯微鏡、EUROLineScan自動判別軟件。IIF和免疫印跡法嚴格按照說明書進行檢測。

2結果

2.1347例IIF檢測ANA陽性的患者中，自身免疫性疾病137例，占39.5%，非自身免疫性疾病210例，占60.5%。

2.2IIF檢測ANA陽性的137例自身免疫性疾病患者中，免疫印跡法檢測ANA陽性100例，ANA陰性37例，IIF與免疫印跡法符合率為73.0%，IIF檢測ANA陽性的210例非自身免疫性疾病患者中，免疫印跡法檢測ANA陽性60例，符合率為28.6%。

2.3IIF檢測ANA陽性標本各類熒光核型構成比，見表1。

2.4自身免疫性疾病ANA熒光核型與分型的比較，見表2。非自身免疫性疾病ANA熒光核型與分型的比較，見表3。

2.5IIF與免疫印記法檢測同時為ANA陽性時，ANA熒光模型與分型檢測結果比較，見表4。

表1　　IIF檢測ANA陽性標本中各類熒光核型的分布(n)

表2　　自身免疫性疾病ANA熒光核型與分型的比較(n)

表3　　非自身免疫性疾病ANA熒光核型與分型的比較(n)

表4　　ANA熒光核型與分型條帶的比較(n)

3討論

ANA是一組以真核細胞核成分為靶抗原的自身抗體的總稱，無器官特異性和種屬特異性[1]。目前臨床上檢測ANA最常用的方法有IIF、免疫印跡法、酶聯免疫吸附試驗等，其中IIF是檢測ANA的篩查方法，也被認為是“金標準”，其基質含有完整的細胞成分抗原譜，如細胞核抗原、細胞質抗原、細胞骨架抗原等，能夠針對細胞中抗原出現特異性的熒光核型，靈敏度很高，已在實驗室被廣泛地使用[2]，但它有自身缺陷，即IIF不能提示具體的靶抗原，特異性低[3-4]。免疫印跡法則在反應膜條上包被多種高純化抗原，具有更高的特異性，缺點是抗原種類有限，只能檢測出有限的抗體。因此，在臨床工作中，常常出現熒光核型與免疫印跡法不相符合的情況[5]。本研究主要針對于單一熒光核型的樣本，避免混合型核型的中多種抗體的干擾，分析其免疫印跡法的條帶，探討兩者相關性。

從本研究結果可見，在IIF檢測為ANA陽性的標本中，有一部分的標本為非自身免疫性疾病，如腦梗死、間質性肺炎等，但這些標本在免疫印跡法中陽性率低，僅為28.6%，這表明非自身免疫性疾病患者雖會出現熒光滴度，但大部分不會有免疫分型，有學者認為正常人群，尤其是女性，也可出現ANA陽性[6]。而自身免疫性疾病標本中，IIF和免疫印跡法同時為陽性的標本占73.0%，兩者符合率高，但仍會出現IIF與免疫印記法不相符合的情況，這可能是因為IIF覆蓋的自身抗體遠遠多于免疫印跡法所檢測的抗體。在收集的標本中，核顆粒型核型最為常見，以抗SSA、抗SSB、抗Ro52為主，周邊型、高爾基體型和肌動蛋白型核型等少見。核仁型核型也較為常見，多出現在非自身免疫性疾病中(n=30)，且僅有2例的核仁型在分型中出現條帶，這可能是由于大多數核仁型熒光模型出現在非自身免疫性疾病，也有可能存在與核型相關抗體[7]，如抗核仁低相對分子質量的RNA、抗RNA聚合酶-1、抗U3RNP、抗PM-Scl等抗體之外的未知抗體，可做進一步的研究。著絲點型核型特異性高，出現著絲點型核型的樣本都有分型結果(n=24)，并多會出現抗著絲點抗體。胞漿型核型以抗線粒體M2抗體最多，有3例。另外，由本文結果可見，1種熒光核型可以出現多個條帶，同一條帶可以出現在不同熒光核型中。

綜上所述，IIF可以作為檢測ANA的篩查方法，但在非自身免疫性疾病患者中也有一定的陽性率；在自身免疫行疾病中，IIF檢測ANA與免疫印跡法檢測ENA具有較高的符合率，不同的熒光核型，其抗可溶性抗原抗體不同，如核顆粒型，多與抗SSA、抗Ro52、抗SSB有關；著絲點型，多與抗著絲點抗體有關。1種自身抗體可以出現不同的熒光模型，不同的自身抗體也可以出現相同的熒光模型。因此，在臨床工作中，應當將IIF與免疫印跡法結合起來，同時報告熒光核型。對于只有熒光核型的病例，需與臨床診斷結合，避免漏檢和誤診。

參考文獻

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DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.14.054

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)14-2023-03

(收稿日期：2016-01-16修回日期：2016-03-25)