中草藥制劑對草魚生長和非特異性免疫效應的研究

姜志勇　王智勇　李志斐

（1.廣東省海洋與漁業技術推廣總站　　廣州　510222）（2.惠州市惠城區水生動物防疫檢疫站　　惠州　516001）（3.中國水產科學研究院珠江水產研究所　　廣州　510380）

中草藥制劑對草魚生長和非特異性免疫效應的研究

姜志勇1王智勇2李志斐3

（1.廣東省海洋與漁業技術推廣總站廣州510222）
（2.惠州市惠城區水生動物防疫檢疫站惠州516001）
（3.中國水產科學研究院珠江水產研究所廣州510380）

在基礎飼料中分別添加0.5g/kg、1.0g/kg和1.5g/kg的中草藥制劑，配制成3種試驗飼料，以基礎飼料為對照組飼料，每個處理設3個平行組，對體重為16克左右的草魚進行為期60天的飼養試驗，每20天取樣一次，以相對增重率、成活率為指標，探討了中草藥對草魚生長的影響；以血清中的溶菌酶（LZM）、一氧化氮合酶（NOS）、堿性磷酸酶（AKP）和超氧化物歧化酶（SOD）活性為指標，探討了中草藥制劑對草魚非特異性免疫效應的影響。結果表明，飼料中添加“中草藥制劑”可以顯著提高草魚的相對增重率，降低飼料系數（P＜0.05）。試驗組草魚血清中的LZM、NOS、AKP和SOD等活性均高于對照組。因此，中草藥制劑具有顯著促生長、提高機體抗應激以及增強機體免疫能力的作用，建議在實際養殖生產中，添加量為1.0g/kg較為合適。

中草藥制劑；草魚；生長；免疫

草魚（Ctenopharyngodon idella）作為傳統淡水養殖品種，在我國具有悠久的養殖歷史，是內陸居民的重要食用魚類之一，我國年產量在400多萬噸。隨著草魚養殖規模的不斷擴大，病害頻繁發生，其防病抗病的研究也日趨重要。開發新的免疫增強劑成為草魚研究的重點。

中草藥具有藥源豐富、成本低廉、作用廣泛、低毒、副作用小、不易產生抗藥性等特點，且其中某些成分不僅有抗菌作用，而且有免疫作用，能改善機體的免疫狀態，提高自身抗菌能力，同時還可明顯地提高魚類的生產性能，從而增加了養魚的經濟效益，充分顯示了中草藥在防治魚病上的優勢。近幾年來，中草藥已被廣泛用于水生動物養殖中，并且在預防疾病、加速生長、提高生產性能和改善水產品品質等方面取得了明顯的效果。蔡中華等研究了黃連、大黃、無花果及花粉對鯉非特異性免疫功能的影響，其結果顯示，除無花果外，黃連、大黃及花粉都對鯉魚的非特異性免疫功能有增強的作用。王景華報道，在鯉的飼養過程中添加茯苓多糖，有助于降低其死亡率。大量的應用結果表明，中草藥飼料添加劑作用主要有：增進食欲，促進日增重和提高水產動物的餌料利用率；增強機體免疫功能，提高抗病，抗應激能力；改善水生動物的肉質；增強水生動物的繁殖性能；用于人工配合飼料的防霉防腐，保鮮效果顯著。本文研究了一種中草藥制劑對草魚生長和免疫功能的影響，以期通過刺激草魚自身免疫系統，從而提高機體防御能力而達到防治疾病的目的。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1中草藥制劑

中草藥添加劑由中國水產科學研究院珠江水產研究所養殖與營養研究室研制。中草藥添加劑主要成分是大蒜素30%、板藍根15%、黃芪15%、甘草10%、金銀花10%、杜仲5%、首烏散10%等，輔助添加了維生素C和維生素E。按上述比例混合粉碎，100目過篩后均勻拌飼使用。

1.1.2試驗用魚

試驗所需要的草魚取自佛山市南海區通威水產養殖有限公司，暫養1周后開始試驗。挑選體質健壯、外觀無明顯癥狀、規格整齊的個體用于試驗。

1.1.3試驗地點

試驗在中國水產科學研究院珠江水產研究所健康養殖基地進行。

1.1.4試驗條件

試驗是在2.0×2.0×1.0m的水泥池中進行，試驗期間水深0.8m。試驗用水為經過沙濾的天然池塘水，經過沙濾后直接放入養殖池中。試驗期間水溫為21.5～28.0℃。絕大多數時間在25℃左右。試驗整個過程連續充氣，上午溶解氧維持在4.0mg/L，下午維持在6.0mg/L左右。

1.2試驗方法

試驗以中草藥制劑添加水平為試驗因子，采用單因素梯度法。添加量設3個水平，分別為0組（對照）、A組（0.5kg/T）、B組（1.0kg/T）和C組（1.5kg/T）。每組設3個平行。每個重復25尾魚。每種飼料隨機投喂3個水泥池。生長試驗和免疫試驗各自單獨進行。基礎飼料配方見表1。

表1試驗基礎料配比

1.3日常管理

試驗期間日投飼率為3%～5%，具體根據魚的攝食情況，每天進行調整。每天分2次投喂，分別在上午8：00-9：00和下午16：00-15：00。每天收集殘餌和污物一次，每周換水一次，換水量為30% ～50%。

1.4生長指標

試驗共60天。試驗結束時每個平行逐尾記數魚的尾數計算成活率，并稱量全部體重。

相對增重率=（末重-初重）/初重×100%；

餌料系數=攝食飼料的重量/魚體重增加量；

成活率=收獲尾數/放養尾數×100%。

1.5非特異性免疫指標的測定

分別在試驗開始后的第20天、40天和60天，每個水泥池取3尾魚尾部靜脈取血。室溫靜止1小時后，于4℃冰箱過夜，4000r/min離心5分鐘，取上清液標記后放在-20℃冰箱待測。

選用超氧化物歧化酶（SOD）、堿性磷酸酶（AKP）、一氧化氮合酶（NOS）和溶菌酶（LZM）作為非特異性免疫指標。SOD、AKP、LZM和NOS活性采用試劑盒測定，試劑盒購自南京建成生物研究所。具體測定步驟按說明書進行。

1.6數據處理

所有數據均采用SPSS統計軟件進行分析處理，利用方差分析（ANOVA）來檢驗各組之間的顯著性。

2　結果與討論

2.1添加“中草藥制劑”對草魚生長情況的影響

在飼料中添加“中草藥制劑”飼喂草魚對其生長情況的影響結果列于表2。由表2可見，飼料中添加“中草藥制劑”投喂60d，均能顯著提高相對增重倍數（P＜0.05），對成活率的影響以及飼料系數有一定的影響，表現各個試驗組與對照組存在顯著差異（P＜0.05），但是各個試驗組之間沒有顯著差異。綜合相對增重率、成活率以及飼料系數來看，B組效果最好。

表2試驗結果

2.2添加中草藥制劑對草魚非特異性免疫情況的影響

表3　中草藥制劑對草魚幾種酶活力的影響

超氧化物歧化酶是重要的抗氧化酶之一，具有催化超氧化物陰離子自由基O2-的歧化反應，清除自由基，阻止自由基引起連鎖反應，對機體起保護作用。從表3可看出，飼料中分別添加不同濃度的“中草藥制劑”，投喂草魚20d后，各試驗組組織液中超氧化物歧化酶活性與對照組相比有明顯差異，且B組與其他兩試驗組也存在差異；投喂40d后，超氧化物歧化酶活性著高于基礎料組，與20d時的情況基本一致；至60d時，雖然各試驗組和對照組之間還存在差異，但相互之間的差異不再顯著。

NOS可以催化L-精氨酸產生NO，NO能作用于微生物的關鍵代謝酶，從而抑制代謝酶的活性或使其失活而發揮抗微生物的作用，還可以和氧自由基作用生成強氧化劑達到殺滅微生物的作用。從表3可看出，飼料中分別添加不同濃度的“中草藥制劑”，投喂草魚20d后，各試驗組組織液中NOS活性與對照組相比有明顯差異；投喂40d后，NOS活性著高于基礎料組，且C組與其他兩組之間存在顯著差異；至60d時，各試驗組和對照組之間還存在差異，C組與其他兩組之間同樣存在顯著差異。

AKP是巨噬細胞內溶酶體的標志酶，是溶酶體的重要組成部分，已經有研究結果證明，在甲殼動物血細胞進行吞噬和包圍化的免疫反應中，會伴隨有AKP的釋放。從表3可看出，飼料中分別添加不同濃度的“中草藥制劑”，投喂草魚20d后，B、C組組織液中AKP活性與對照組相比有明顯差異，并且兩者之間也存在顯著差異，但A組和對照組之間差異不顯著；投喂40d后，AKP活性與20d時情況相似；至60d時，A、B組和對照組之間還存在差異，但C組與對照組相比差異不顯著。

LZM在引發和維持機體防御免疫的過程中起著重要的作用。它在機體免疫過程中除了溶解細菌細胞壁外，還可誘導和調節其他免疫因子的合成與分泌。從表3可看出，飼料中分別添加不同濃度的“中草藥制劑”，投喂草魚20d后，各試驗組組織液中LZM活性與對照組相比有明顯差異；投喂40d后，LZM活性著高于基礎料組，且A組與其他兩組之間存在顯著差異；至60d時，各試驗組和對照組之間還存在差異，但兩兩之間不存在顯著差異。

3　討論

3.1中草藥添加劑對草魚生長性能的影響

在草魚基礎飼料中添加一定量的中草藥添加劑能顯著提高草魚的相對增重率、提高成活率、降低飼料系數。研究表明，中草藥含有多種營養成分和生物活性物質，通常有多糖、氨基酸、蛋白質、油脂、酶、色素、維生素、有機酸、鞣質、生物堿、黃酮、甙類、無機鹽等，以及一些未知的促生長活性物質，作為餌料添加劑，有補充營養、促進生長的作用。段賢彩用辣蓼草、松針等組方，在飼料中添加l%飼喂草魚、鯉魚，成活率從30%～50%提高到70%～80%，畝產量增加了200%；韓如政在l齡和2齡鯉餌料中分別添加0.4%的復方中草藥，可提高18%的生長速度，餌料系數降低18.2%～24%。與本次試驗結果相一致。

3.2復方中草藥對草魚肝臟六種酶活力的影響

抗生素雖然在抵抗疾病能力等方面具有一定的效果，但也存在很大的副作用，它不僅破壞免疫力，而且會造成一定的環境負效應，中草藥等無殘留、無污染且又能增強免疫力的“綠色”藥物逐漸被廣泛開發和應用。它主要是通過促進機體免疫器官發育、增加非特異性免疫和特異性免疫等途徑來增強機體的免疫力。機體非特異性免疫功能狀態直接反映出機體的抗逆能力強弱。超氧化物歧化酶（SOD）、堿性磷酸酶（AKP）、一氧化氮合酶（NOS）和溶菌酶（LZM）可作為非特異性免疫功能強弱的評價指標。梁擁軍等在基礎飼料中添加0.5%、1.0%、2.0%復方中草藥飼養寶石鱸，結果表明，添加1.0%復方中草藥可顯著提高寶石鱸肝臟中SOD、溶菌酶和過氧化氫酶活性。劉紅柏等研究認為，1.0%與2.0%黃芪水煎劑可顯著提高史氏鱘肝臟中的NO含量。劉紅柏等研究了6個復方和5個單方中草藥對施氏鱘血漿和肝臟中酶指標的影響，認為三黃粉、甘草復方方劑能顯著性增加施氏鱘血漿和組織樣中NOS的含量。本試驗用添加了一定量復方中草藥的飼料飼喂草魚，測定其血清中超氧化物歧化酶（SOD）、堿性磷酸酶（AKP）、一氧化氮合酶（NOS）和溶菌酶（LZM）四種酶活性的影響，結果顯示，復方中草藥可以不同程度提高草魚血清中相關酶的活力。試驗結果表明，在基礎飼料中添加一定量的復方中草藥制劑，可以提高草魚的非特異性免疫功能。

4　結語

4.1飼料中添加中草藥制劑能顯著提高草魚溶菌、超氧化物歧化酶、堿性磷酸酶和一氧化氮合酶的活性，提高機體抗病能力。

4.2飼料中添加中草藥制劑，可以提高草魚的生長速度。

4.3從本次試驗來看，飼料中中草藥制劑的適宜添加量為1.0g/kg。

（略）

資金項目：廣東省海洋漁業科技推廣專項（項目編號：B20140C01）資助。