高效液相色譜法測定醒神通竅膠囊中遠志的含量

何雪冰李作孝*熊 軍張 昊楊思進（ 西南醫科大學附屬醫院，四川 瀘州 646000； 西南醫科大學附屬中醫醫院，四川 瀘州 646000）

高效液相色譜法測定醒神通竅膠囊中遠志的含量

何雪冰1李作孝1*熊 軍1張 昊1楊思進2
（1 西南醫科大學附屬醫院，四川 瀘州 646000；2 西南醫科大學附屬中醫醫院，四川 瀘州 646000）

目的 建立醒神通竅膠囊中遠志的測定方法。方法 醒神通竅膠囊用70%乙醇作為溶劑超聲提取，采用高效液相色譜法，色譜柱為phenomenex Proidigy柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；以甲醇-0.4%磷酸（90∶10）流動相；檢測波長為210 nm；柱溫：30 ℃。結果 遠志質量濃度在22～220 μg/mL范圍內進樣量與峰面積呈良好的線性關系，線性回歸方程Y=0.26940.2676，R2=0.9995（n=7），平均回收率為95.44%，RSD=1.18%。結論 該方法操作簡便、準確度高、重復性好，能夠對遠志進行含量測定，為提高醒神通竅膠囊的質量控制標準提供了一個有效的方法。

高效液相色譜法；醒神通竅膠囊；遠志；含量測定

［Key words］HPLC； Xingshen Tongqiao； Polygala tenuifolia willd； Content determination

醒神通竅膠囊是正在研究的一種新藥，由川穹、女貞子、遠志等組方，方中的遠志為主要藥物之一，研究表明遠志提取物及遠志中的主要化學成分皂苷類和糖酯類化合物均有抗癡呆和腦保護活性［1］，遠志提取物有助于修復因腦內膽堿能系統功能障礙引起的記憶缺陷，其對短期記憶的改善有助于修復東莨菪堿誘導的記憶缺陷［2］。遠志提取物BT-11不僅能夠提高老年人的認知能力［3］，還能提高老年人的記憶力［4］，對于血管性癡呆極為有益［5-6］。臨床上對血管性癡呆有良好的治療效果，為控制醒神通竅膠囊的質量，參照遠志含量測定的相關文獻［7-9］，對醒神通竅膠囊中的遠志進行了含量測定的研究，經過方法學的系統考察和3批樣品含量的測定，建立了醒神通竅膠囊中測定遠志含量的高效液相色譜法。報道如下。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀（DIONEX U-3000型），甲醇（色譜純，上海國藥集團化學公司），其他所用試劑均為分析純。醒神通竅膠囊（四川醫科大學附屬第一醫院，批號為150828、150709、141203）遠志對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為111572-200702，純度為98.7%），供含量測定用。

2 方法與結果

2.1 色譜條件：色譜柱：phenomenex Proidigy，ODS3 100A（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動相∶甲醇-0.4%磷酸（90∶10）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：210 nm；柱溫：30 ℃，進樣量：20 μL。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液的制備：精密稱取在干燥皿中干燥了24 h的遠志皂苷元對照品4.46 mg，置于20 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即配成220.1010 μg/mL的標對照品貯備液。

2.2.2 供試品溶液的制備：取醒神通竅膠囊藥粉2.3646 g，置于具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇10 mL，超聲提取30 min，取出，放冷，提取過濾液，精密移取2 mL濾液，于燒瓶中蒸干，蒸干后殘渣加入10%鹽酸溶液，沸水浴回流2 h，取出放冷、過濾，沉淀水洗至中性后用甲醇溶解，并轉移至10 mL量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻及得供試品溶液。

2.2.3 陰性對照溶液的制備：按處方比例取不含遠志的其他藥材，制成缺失遠志的陰性對照品，按供試品溶液制備方法制得陰性對照溶液。2.3 方法學考察

2.3.1 陰性干擾試驗：取供試品溶液、對照品溶液及陰性對照品溶液，按擬訂的色譜條件測定。供試品溶液與對照品溶液色譜圖中具有相同保留時間的色譜峰，而陰性無干擾，見圖1。

A B C圖1 高效液相色譜圖A.對照品溶液；B.陰性對照品溶液；C.供試品溶液

2.3.2 線性關系考察：分別精密取對照貯備液適量，配制成2 2.0 1 0 1 μg/mL、44.0202 μg/mL、88.0404 μg/mL、110.0505 μg/mL、132.0606 μg/mL、176.0808 μg/mL、220.1010 μg/mL的系列質量濃度溶液，分別進樣20 μL測定，按2.1項下色譜條件測定，記錄色譜面積，以遠志的質量濃度X為橫坐標、峰面積積分值Y為縱坐標繪制標準曲線。得回歸方程Y=0.26940.2676，R2=0.9995 （n=7）。結果表明，對照品質量濃度在22.0101～220.1010 μg/mL范圍內與峰面積線性關系良好。

2.3.4 精密度試驗：取110.0505 μg/mL的對照品溶液20 μL，連續進樣6次。測定遠志峰面積，結果得RSD=1.115%，表明儀器的精密度良好。2.3.5 重復性試驗：精密稱取同一批樣品（批號為150828）6份，按擬2.2.2方法平行制備成供試品溶液，分別進樣20 μL，進行測定，按外標法以峰面積計算含量及RSD。結果分別為4.8862、4.8612、4.8891、4.8464、4.8959、4.8555 μg/mL，平均值為4.8724 μg/mL RSD=0.4215%，表明本方法重現性良好。

2.3.6 穩定性試驗：精密吸取供試品溶液（檢品號：150828）20 μL，分別于0、2、4、8、12、16、24 h進樣，測定遠志峰面積，結果測得供試品遠志峰面積的RSD=0.2831%，表明供試品溶液中遠志在24 h內較穩定。

2.3.7 加樣回收試驗：精密稱取已知遠志含量的樣品9份（檢品號：150828樣品含量為1.0303 mg/g）適量，分別精密加入適量的對照品溶液（22.0101 μg/mL）50、100、150 μL，按供試品溶液制備方法處理，測定含量，計算回收率。結果見表1。

2.4 樣品含量測定：取3批樣品，按2.2項下方法制備供試品溶液，取20 μL進樣測定，每批測定3次計算含量，結果批號150828、150709、141203的樣品中遠志平均含量分別為1.0303、1.1524、1.1778 mg/g。

3 討 論

3.1 紫外線波長的選擇：取遠志對照品適量，用流動相溶液溶解，本文通過考察在不同檢測波長下（210、237、320 nm）所測成分紫外吸收，僅在210 nm處遠志有最大吸收，且靈敏度高，干擾較小，故選210 nm作為檢測波長。

表1 加樣回收試驗結果（n=9）

3.2 流動相的選擇：參考相關文獻［10-11］，在試驗過程中，曾采用多種流動相進行試驗，包括乙腈-0.1%磷酸溶液（15∶85），乙腈-水（15∶85）、甲醇-水等測試，結果色譜峰分離效果均不理想，未形成良好峰形的峰，而未被采用。文中所選用的流動相甲醇-0.4%磷酸（90∶10）分離，主峰與其他雜質分離度和峰形都理想效果較好，且保留時間較短。

3.3 供試品提取時間的選擇：在試驗過程中，分別考察不同柱溫（10、25、35、40 ℃）對色譜分離效果的影響，結果各柱溫對分離效果、保留時間的影響均有明顯區別，柱溫為30 ℃分離效果好，因此確定柱溫為30 ℃。醒神通竅膠囊為復方制劑，遠志的含量可作為該制劑的質量控制指標。綜上所述，文中建立的高效液相色譜法方法具有有操作簡便、結果可靠等特點，能夠用于醒神通竅膠囊的質量評價與控制。

［1]劉大偉，康利平，馬百平.遠志化學及藥理作用研究進展［J］.國際藥學研究雜志，2012，39（1）:32-44.

［2]Sun XL，Ito H，Masuoka T，et al.Effect of Polygala tenuifolia root extract on scopolamine-induced impairment of rat spatial cognition in an eight-arm radial maze task［J］.Biol Pharm Bull，2007，30（9）:1727-1731.

［3]Shin KY，Lee JY，Won BY，et al.BT-11 is effective for enhancing cognitive functions in the elderly humans ［J］.Neurosci Lett，2009，465（2）:157-159.

［4]Lee JY，Kim KY，Shin KY，et al.Effects of BT-11 on memory in healthy humans［J］.Neurosci Lett，2009，464（2）:111-114.

［5]高風超，陳翔，田新英.血管性癡呆危險因素及發病機制的研究進展［J］.醫學綜述，2014，20（6）:1068-1071.

［6]黃浩，唐士婷，藺心敬.血管性癡呆相關危險因素分析［J］.醫學綜述，2014，20（6）:1068-1071.

［7]莊姍姍，劉志宏，黃愛文，等.高效液相色譜法測定甘草遠志合劑中4種指標成分的含量［J］.中南藥學，2014，10（12）:1005-1008.

［8]竇智，胡長明.高效液相色譜法測定生遠志及其炮制品中遠志皂苷B的含量［J］.中國醫院藥學雜志，2014，34（19）:1676-1678.

［9]李智利，謝婷，陳文華.HPLC法測定萸蓯強腎膠囊中遠志酮Ⅲ、3，6'-二芥子酰基蔗糖和馬錢苷［J］.中成藥，2013，35（8）:1685-1689.

［10]周剛，呂慶紅.高效液相色譜法測定甘芍顆粒中甘草苷和甘草酸的含量［J］.中南藥學，2013，11（3）:227-229.

［11]余佳文，鄧開英，彭等.濤UPLC 同時測定藿香正氣口服液中甘草苷、柚皮蕓香苷、橙皮苷、甘草酸銨、厚樸酚、和厚樸酚的含量［J］.中國中藥雜志，2013，38（14）:2314-2317.

Determination of Polygala Tenuifolia Willd in Xingshen Tongqiao Capsule by HPLC

HE Xue-bing1， LI Zuo-xiao1*， XIONG Jun1， ZHANG Hao1， YANG Si-jin2
（1 Affiliated Hospital of the Southwest Medical University， Luzhou 646000， China； 2 Affiliated Chinese Medicine Hospital of Southwest Medical University， Luzhou 646000， China）

Objective To establish the determination method of Polygala tenuifolia willd in Xingshen Tongqiao capsule. Method Ultrasonic extraction of Xingshen Tongqiao capsule with 70% methanol as solvent. The separation was performed on a phenomenex proidigy column（250 mm × 4.6 mm， 5 μm）， the mobile phase consisted of methanol-0.4%phosphoric acid（90∶10）. The detection wavelength was set at 210 nm， and the column temperature was 30 ℃. Result There was a good linearity between the peak areas and the quantity of Polygala tenuifolia willd within the range of 22～220 μg/mL， equation of linear regression Y=0.26940.2676， R2=0.9995（n=7）. The average recovery was 95.44%， RSD=1.18%. Conclusion The establish method is simple， accurate，reproducible， and can be applied to the quality control of Xingshen Tongqiao capsule， which supplies an effective method for advance the quality control of Xingshen Tongqiao Capsule.

R282.710.3

B

1671-8194（2016）18-0037-02

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