CHD5及Ki67在胃癌組織中的表達①

周　昱，廉奇鑫，王　新

(佳木斯大學附屬第一醫院腫瘤科，黑龍江 佳木斯 154003)

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CHD5及Ki67在胃癌組織中的表達①

周昱，廉奇鑫，王新

(佳木斯大學附屬第一醫院腫瘤科，黑龍江 佳木斯 154003)

摘要：目的：研究CHD5與Ki67在胃黏膜癌變組織中的表達程度及兩個因子同臨床相應病理學特征之間的聯系以及兩者內在聯系。方法：通過采用ElivisionTMPlus/HRP免疫組化方法，分別檢測58例胃癌組織標本中CHD5和Ki67兩個與癌癥相關基因的表達狀況。結果：①在胃黏膜癌變組織及其相應的周圍正常組織中CHD5基因的蛋白顯色陽性率分別為34.48% (20/58)和70.69% (41/58)，并明顯的看出，在周圍組織中的表達多呈陽性。將結果分析處理后得出，CHD5的表達與癌組織的浸潤深度、瘤體組織分化程度、病變淋巴轉移以及腫瘤TNM分期有關(均P<0.05)；與患者的性別、發病年齡、腫瘤直徑范圍及遠處轉移無關(P>0.05)。②在胃黏膜癌變組織及其相應的周圍正常組織中ki67蛋白顯色陽性結果分別為67.24% (39/58)和36.21% (21/58)，結果分析后得出，在癌組織中腫瘤相關基因ki67的表達多為陽性。數據行統計處理后表明，ki67與癌組織的浸潤深度、瘤體組織分化程度、病變淋巴轉移以及腫瘤TNM分期有關(P<0.05)；與患者的性別、發病年齡、腫瘤直徑范圍及遠處轉移無關(P>0.05)。結論：①在胃癌組織中CHD5表達下降與浸潤深度、組織分化程度、患者是否出現淋巴結轉移以及TNM分期有關，②ki67在胃正常組織中表達不明顯，在胃癌中高表達。且與浸潤深度、組織分化程度、是否出現淋巴結轉移以及TNM分期密切相關。③CHD5與ki67表達具有負相關性，提示二者有彼此制約、相互拮抗的作用。

關鍵詞：胃癌；CHD5；Ki67

我國各種惡性腫瘤中，罹患胃癌[1]的人口數量和每年死于胃癌的人口數目均排在前三位，在多數情況下，胃癌患者術后生存質量低，存活期短，且極易復發。細胞與分子生物學研究表明，胃癌演變過程是分多步驟進行的,而且期間需要多因素協同參與。其過程涉及原癌基因、腫瘤抑制基因、腫瘤細胞凋亡相關因子及腫瘤轉移相關基因等多個因子的參與，該過程中，上述因子的參與形式是多變的。本課題研究CHD5與ki67胃癌組織及正常胃黏膜組織中的表達，并探索它們在胃癌組織中的臨床意義及相關性，從而判定預后。

1資料與方法

1.1標本來源

選取經佳木斯大學附屬第一醫院于2011-10～2014-10確診為胃癌并行手術治療的患者病理蠟塊，且再次由資深病理科醫生證實，共計58例，每例標本均采集胃粘膜癌變組織和距邊緣5cm的相應周圍正常組織，患者術前均未進行放、化療、免疫治療、生物治療及其它相關腫瘤治療。按照患者性別分成兩組，其中男35例，女23例。依據患者實際年齡分成兩組，其中>45歲38例，≤45歲20例，年齡32～85歲，平均(42.74±8.38) 歲。依照現行第7版[2,3]AJCC 國際胃癌TNM標準進行臨床分期：Ⅰ期5例，Ⅱ期12例，Ⅲ期 34例，Ⅳ期7例(行統計學處理時將Ⅰ期、Ⅱ期歸為一組，把Ⅲ期、Ⅳ期歸為一組)。根據是否存在淋巴結轉移劃分成兩類，其中確定存在淋巴結轉移者37例，經證實無淋巴結轉移者21例。判斷腫瘤浸潤深度又將其分成兩組，其中侵及漿膜層35例，未侵及漿膜層23例。同時按組織分化程度劃歸成3組：高等程度度組織分化8例，中等程度組織分化18例，低等程度組織分化32例。依據腫瘤直徑大小劃分兩組，其中包括34例腫瘤直徑≥5cm，25例<5cm。最后依據是否存在遠處轉移分類，其中包括有明確的遠處轉移者17例，而未證實發生遠處轉移者41例。

1.2主要試劑

鼠抗人單克隆抗體CHD5工作液購自上海聯碩生物科技有限公司，兔抗人多克隆抗體Ki67(即用型抗體)購自福州邁新生物技術開發有限公司。

1.3免疫組化

通過免疫組化方法(Elivision法)探索CHD5、ki67在為癌及正常癌旁組織中的表達情況。

1.4結果判定

參照相關文獻[4,5]進行結果評分。

(1)結果判定：CHD5在腫瘤組織及細胞的表達位置是同時出現于細胞核和細胞漿內的，但側重點有所不同，以細胞核表達為主，而Ki67在腫瘤細胞內的表達定位僅限于細胞核內。如果把胃癌組織切片在顯微鏡下觀察，兩者一旦呈陽性表達在細胞核均呈現為棕黃色顆粒，且強度大于背景非特異性染色者判定為陽性。(2)結果評分標準：采用雙重判定，把染色強度和陽性細胞百分比兩個指標共同作為評分標準，最后把二者評分乘積作為最終評分進行統計學分析。具體標準參照如下：染色強度判定，基本不著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，深棕色為3分；陽性細胞比例判定(不管顯色程度深淺)，著色細胞占總細胞數比例≤10%為1分，11%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。最后用陽性細胞的百分比得分乘以染色強度得分，把最終乘積最為結果進行判定：≤3為陰性(-)，4分以上為陽性，4～5分為(+)，6～7分為()，>8分為()。

1.5統計學方法

采用軟件SPSSl7.0進行處理分析，計數資料采用χ2檢驗，相關回歸分析采用 linear regression、logistic 分析，P<0.05表示存在差異，具有統計學意義。

2結果

2.1IHC 法檢測CHD5蛋白在胃黏膜癌變組織及相應的周圍正常中組織的表達

選用的58例胃黏膜癌變組織及細胞中，CHD5的陽性表達率為34.48%(20/58)，明顯低于相應的周圍正常組織中的70.69%(41/58)，存在有統計學上的顯著的差異，具有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1　CHD5在周圍正常組織和腫瘤組織中的表達

CHD5的蛋白陽性表達定位在細胞核及細胞漿內均有不同程度顯示，但以細胞核表達為主，呈現出棕黃色顆粒狀彌漫性分布。

2.2IHC法檢測ki67在胃黏膜癌變組織及相應的周圍正常中組織的表達

58例胃黏膜癌變組織及細胞中，ki67的陽性表達率為67.24%(39/58)，高于相應的周圍正常組織中的36.21%(21/58)，存在有統計學上的差異，具有明顯的統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2　ki67在周圍正常組織和腫瘤組織中的表達

ki67的陽性表達定位僅限于細胞核內，呈棕黃色顆粒狀彌漫性分布的表達情況。

2.3CHD5與ki67在胃黏膜癌變組織中的表達及臨床相應病理特征之間的關系

CHD5與ki67在胃黏膜癌變組織中的蛋白表達程度與癌組織的浸潤深度、瘤體組織分化程度、病變淋巴轉移以及腫瘤TNM分期有關(均P<0.05)；與患者的性別、發病年齡、腫瘤直徑范圍及遠處轉移無關(P>0.05)。見表3。

表3　CHD5與ki67在胃黏膜癌變組織中的表達程度和臨床相應病理特征的關系

注：#P<0.05。

2.4CHD5蛋白和ki67在胃癌組織標本中表達水平的相關性

胃黏膜癌變組織標本中CHD5的陽性表達率為34.48%，而ki67陽性表達率為67.24%；相應的周圍正常組織中CHD5陽性表達率為70.69%，而ki67陽性表達率為36.21%。通過CHD5與ki67表達的關聯性分析發現：CHD5的表達與ki67的表達均具有關聯性。CHD5與ki67 在胃黏膜癌變組織中的蛋白表達存在負相關(r=-0.743)。見表4。

表4　胃癌中CHD5與Ki67蛋白的關系

3討論

近年來有學者CHD5(染色體質域解螺旋酶DNA結合蛋白5)是一種腫瘤抑制因子。后經證實，CHD5的構成極其復雜，其本質是具有能調節染色質功能的染色體非組蛋白，并且其組合相當獨特。染色體質域解螺旋DNA結合蛋白主要作用體現為染色體重塑方面，但在其它許多方面也受到學者關注，如如何調節基因表達等。在臨床工作中ki67應用已經較普遍，對于腫瘤的評估具有指導意義。Ki-67是一種核蛋白質由MKI-67基因編碼，又稱之為MKI-67，在病理免疫組化中經常用到，提示細胞的增殖活躍程度。Ki67抗原是Gerdes等在1983年發現的,它是不穩定的非組蛋白核蛋白[6],Ki67是一種已經被證實的核蛋白，在胃癌進展過程中起到了調節細胞的凋亡的作用，它的表達過程同細胞周期是緊密聯系在一起的，Ki67能夠促進細胞向惡性程度加重的方向轉化，期間也發揮了幫助腫瘤的擴散和轉移等多方面的作用。

綜上所述，通過聯合檢測CHD5和ki67 在胃癌中的表達情況，結果發現CHD5與Ki67 在胃癌中的陽性表達存在負相關(P<0.05)，提示CHD5在腫瘤調控方面如介導細胞凋亡、拮抗細胞增殖等機制中發揮著重要作用，CHD5作為一個抑癌基因，其表達程度的下降或不明顯可能導致細胞凋亡與增殖的失衡，從而促進了惡性轉化，促使了胃癌的形成和進展。本研究旨在闡明抑癌基因CHD5異常表達在胃癌的形成、進展及侵襲進程中可能存在重要意義，臨床實踐測定CHD5和ki67在胃黏膜癌變組織中的表達程度，對衡量胃癌惡性度是存在指導性意義的，甚至有助于我們預測患者生存周期。

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基金項目：①1.黑龍江省青年基金，批準號：QC2013C013；2.佳木斯大學青年基金，編號：sq2013-013。

作者簡介：周昱(1969～)男，黑龍江集賢人，學士，副主任醫師，碩士研究生導師。 通訊作者：王新(1962～)男，黑龍江佳木斯人，碩士，主任醫師，碩士研究生導師。E-mail:zhouyu731@126.com。

中圖分類號：R735.2

文獻標識碼：A

文章編號：1008-0104(2016)03-0042-03

(收稿日期：2015-12-07)