苗藥復方窩來溜溶液的抗菌活性研究

雷　曄　禹俊梅　劉書華

黔東南民族職業技術學院醫藥技術系，貴州　凱里　556000

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苗藥復方窩來溜溶液的抗菌活性研究

雷曄禹俊梅劉書華

黔東南民族職業技術學院醫藥技術系，貴州凱里556000

【摘要】目的：研究苗藥復方窩來溜溶液的抗菌活性。方法：以復方窩來溜溶液為研究對象，在實驗室內對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌進行抑菌試驗。結果：苗藥復方窩來溜溶液對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和白色念珠菌的平均抑菌率都達到100.00%。結論：苗藥復方窩來溜溶液對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和白色念珠菌具有較強的抑制作用。

【關鍵詞】苗藥復方窩來溜；蜘蛛香；抗菌

苗藥復方窩來溜溶液為苗藥蜘蛛香、桂枝、桑枝、松葉等制成的復方溶液劑。主要藥物蜘蛛香(Valeriana wallichii DC，V.jatamansi Jones)又名馬蹄香、老虎七、土細辛、印度纈草等，具有理氣和中，散寒除濕，活血消腫的功效。臨床用于脘腹脹痛、嘔吐泄瀉、小兒疳積、風寒濕痹、肺氣水腫、月經不調和跌打損傷，外用于治療瘡癤等。為使苗藥復方窩來溜溶液劑作為健康產品用于相關人群，依據衛生部GB15979-2002《一次性使用衛生用品衛生標準》[1]規定的標準，對苗藥復方窩來溜溶液劑進行抗菌作用試驗，現將結果報告如下。

1儀器與材料

1.1儀器HH.B11.500電熱恒溫培養箱9060749。

1.2材料復方窩來溜溶液劑(批號：20140407，貴州苗侗百草醫藥發展有限公司)。大腸桿菌(8099)、金黃色葡萄球菌(ATCC 6538)、白色念珠菌(ATCC 10231)由中國普通微生物菌種保藏管理中心提供，試驗使用第6～7代37℃培養18～24h。所用試劑均為分析純。

2方法

2.1微生物污染檢測采用GB15979-2002《一次性使用衛生用品衛生標準》附錄B“產品微生物檢測方法”作為檢測依據。試驗溫度20.4℃、濕度43%，實驗室潔凈度為百級，用無菌方法打開同批號的3瓶包裝，從每瓶包裝中取原液混合做樣液備用。①細菌菌落總數檢測：共接種5個平皿，每個平皿中加入1ml樣液，然后用冷卻至45℃左右的熔化的營養瓊脂培養基15～20ml倒入每個平皿內混合均勻，待瓊脂凝固后翻轉平皿置(35±2)℃培養48h后，計算平板上的菌落數。②大腸菌群檢測：取樣液5ml，接種50ml乳糖膽鹽發酵管，置(35±2)℃培養24h，觀察產酸產氣情況。③金黃色葡萄球菌檢測：取樣液5ml，加入到50ml SCDLP培養液中，充分混勻，置(35±2)℃培養24h。自上述增菌液中取1～2接種環，劃線接種在血瓊脂培養基上，置(35±2)℃培養24～48h，在血瓊脂平板上觀察菌落特征。④溶血性鏈球菌檢測：取樣液5ml，加入到50ml葡萄糖肉湯，(35±2)℃培養24h。將培養物劃線接種血瓊脂平板，(35±2)℃培養24h觀察菌落特征。⑤綠膿桿菌檢測：取樣液5ml，加入到50ml SCDLP培養液中，充分混勻，置(35±2)℃培養18～24h，觀察培養液表面情況。⑥真菌菌落總數檢測方法：接種五個平皿，每個平皿中加入1ml樣液，然后用冷卻至45℃左右的熔化的沙氏瓊脂培養基15～25ml倒入每個平皿內混合均勻，瓊脂凝固后翻轉平皿置(25±2)℃培養7天，分別于3、5、7天觀察，計算平板上的菌落數。2.2抗菌試驗采用GB15979-2002《一次性使用衛生用品衛生標準》附錄C4“溶出性抗(抑)菌產品抑菌性能試驗方法”為依據，試驗溫度(20±1)℃。將試驗菌24h斜面培養物用PBS洗下，制成菌懸液(要求的濃度為：用100μl滴于5ml樣液內，回收菌數為1×104～9×104cfu/ml)。取被試樣液(5ml)和對照樣液(與試樣同質材料，同等大小，但不含抗菌材料，且經滅菌處理)各4管。取上述菌懸液，分別在每個被試樣液和對照樣液內滴加100μl，均勻混合，開始計時，作用2、5、10、20min，用無菌鑷分別將樣液(0.5ml)投入含5ml PBS的試管內，充分混勻，作適當稀釋，然后取其中2～3個稀釋度，分別吸取0.5ml，置于兩個平皿，用涼至40～45℃的營養瓊脂培養基(大腸桿菌、金黃色葡萄球菌)或沙氏瓊脂培養基(白色念珠菌)15ml做傾注，轉動平皿，使其充分均勻，瓊脂凝固后翻轉平板，培養48h(大腸桿菌、金黃色葡萄球菌)或72h(白色念珠菌)，做活菌菌落計數。試驗重復三次。按下式計算抑菌率：X=(A-B)/A×100%(式中，X為抑菌率，%；A為對照品平均菌落數；B為被試品平均菌落數。)

2.3判斷標準①細菌菌落總數檢測結果判定，菌落數在100以內，按實有數報告，大于100時采用二位有效數字。將復檢樣品依前法復測2次，2次結果平均值都不超過200cfu/ml，則被檢樣品合格，如其中有任何1次結果平均值超過200cfu/ml，則判定被檢樣品不合格。②大腸菌群檢測結果判定，如乳糖膽鹽發酵管不產酸產氣，可判定為大腸菌群陰性，凡乳糖膽鹽發酵管產酸產氣，在伊紅美蘭平板上培養有典型大腸菌落，可報告被檢樣品檢出大腸桿菌。③金黃色葡萄球菌檢測結果判定：在血瓊脂平板上有金色葡萄球菌生長的，可報告被檢樣品檢出金黃色葡萄球菌。④溶血性鏈球菌檢測結果判定：在血瓊脂平板上有溶血性鏈球菌生長的，可報告被檢樣品檢出金黃色葡萄球菌。⑤綠膿桿菌檢測結果判定，如培養液表面呈現一層薄菌膜，培養液呈黃綠色或藍綠色，則從培養液薄菌膜處挑取培養物，劃線接種十六烷三甲溴化銨瓊脂平板培養，有綠膿桿菌生長的，可報告被檢樣品中檢出綠膿桿菌。⑥真菌菌落檢測結果判定：當沙氏培養基上的菌落數在100以內，按實有數報告，大于100時采用二位有效數字。如樣品真菌菌落總數超過100cfu/ml，復檢2次，2次結果都不超過100cfu/ml，則判定被檢樣品合格，其中有任何1次結果超過100cfu/ml，則判定被檢樣品不合格。⑦抗菌試驗結果判定，抑菌率≥50%～90%，產品有抑菌作用，抑菌率≥90%，產品有較強抑菌作用。

3結果

3.1檢測結果復方窩來溜溶液經檢測細菌菌落總數、大腸菌群、金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、綠膿桿菌、真菌菌落總數均符合GB15979-2002《一次性使用衛生用品衛生標準》的要求，見表1。

表1　窩來溜溶液微生物檢測結果

3.2抑菌效果經三次重復試驗，結果表明：在(20±1)℃條件下，苗藥復方窩來溜溶液劑原液對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌作用2min，平均抑菌率達100.00%，表明產品具有較強的抑菌作用。見表2、3、4。

表2　窩來溜溶液劑對大腸桿菌的抑菌效果

注：陽性對照組平均回收菌落數為53000CFU/ml (45200CFU/ml～58000CFU/ml);陰性對照均無菌生長。

4討論

苗藥復方窩來溜溶液經微生物污染檢測，產品符合GB15979-2002《一次性使用衛生用品衛生標準》的規定。在(20±1)℃的條件下，苗藥復方窩來溜溶液原液分別對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌作用2min，平均抑菌率均達100.00%。說明苗藥復方窩來溜溶液劑原液對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌具有較強的抑菌作用。

表3　窩來溜溶液劑對金黃色葡萄球菌的抑菌效果

注：陽性對照組平均回收菌落數為31467CFU/ml (29600CFU/ml～34400CFU/ml)；陰性對照均無菌生長。

表4　窩來溜溶液劑對白色念珠菌的抑菌效果

注：陽性對照組平均回收菌落數為68600CFU/ml (62400CFU/ml～74200CFU/ml)；陰性對照均無菌生長。

苗藥復方窩來溜中的主要成分蜘蛛香具有廣泛的藥理活性，蜘蛛香所含的環烯醚萜類成分具有抗腫瘤、鎮靜催眠、抗焦慮、解痙等作用[2]。曹斌[3]等證明蜘蛛香可顯著延長戊巴比妥鈉小鼠睡眠時間，明顯減少醋酸所致的小鼠扭體反應次數，具有鎮靜、催眠、抗驚厥和一定的鎮痛作用；郜紅利[4]等證明蜘蛛香中的總黃酮類成分具有鎮痛、改善胃腸運動的作用；蜘蛛香有抗前列腺增生、抗菌及抗病毒等作用[5]。此外，蜘蛛香的揮發油成分對芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌和白色念珠菌有明顯的抑制作用[6]。動物實驗表明，蜘蛛香無明顯的藥物依賴作用和毒性作用[6]，因此具有天然、毒性低、藥理作用廣泛的特點。以蜘蛛香為主要成分的苗藥窩來溜在黔東南地區苗族民間常外用于祛風濕、活血、強力等。研究結果進一步佐證了將苗藥窩來溜制成的溶液劑可對常見致病菌如大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和白色念珠菌具有較強的抑菌作用。

參考文獻

[1] GB15979-2002. 一次性使用衛生用品衛生標準。

[2] 李少華，閆智勇.蜘蛛香環烯醚萜類成分的研究進展[J].中國新藥雜志，2012,21(6)：633-637.

[3] 曹斌，洪庚辛.蜘蛛香的中樞抑制作用[J].中國中藥雜志，1994，19(1):40.

[4] 郜紅利，譚玉柱.蜘蛛香提取物的藥理學研究[J].華西藥學雜志，2014，29(2)：154-157.

[5] 李蓉，吳瑩. 蜘蛛香的藥理作用研究進展[J].科技資訊，2009，(31): 159.

[6] 陳暢，李韶菁，唐仕歡，等.蜘蛛香藥理研究進展[J].中國中藥雜志，2012，37(14)：2174-2177.

【中圖分類號】R285.5

【文獻標志碼】A

【文章編號】1007-8517(2016)10-0021-02

(收稿日期：2016.03.16)

Study on the antibacterial effect of Miao Nationality Medicine compound wo-lai-liu solution

LEI YeYU JunmeiLIU Shuhua

Qiandongnan National Polytechnic, Kaili 556000, China

Abstract:Objective To study the antimicrobial activity of the Mao Nationality Medicine compound wo-lai-liu solution in laboratory. Methods Take Mao Nationality Medicine compound wo-lai-liu solution as the reseach object, the antibacterial test of Escherichia coli, Staphylococcus aureus and Candida albicans was carried out in laboratory. Results Antibacterial test showed that the inhibitory rate of Escherichia coli, Staphylococcus aureus and Candida albicans was 100% on average. Conclusion Miao Nationality Medicine compound wo-lai-liu solution has a strong inhibitory effect on Escherichia coli, Staphylococcus aureus and Candida albicans.

Key words:Miao Nationality Medicine compound wo-lai-liu; Valeriana wallichii DC ;V.jatamansiJones; Antibacterial test