次仁旺姆

西藏自治區食品藥品檢驗所,西藏　拉薩　850000

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民族醫藥

藏藥綠絨蒿的質量標準研究

次仁旺姆

西藏自治區食品藥品檢驗所,西藏拉薩850000

【摘要】目的：建立三種藏藥綠絨蒿的質量標準。方法：考察藥材基源；采用顯微和薄層色譜法對樣品進行鑒別；采用高效液相色譜法測定木犀草素的含量：Waters Xselect C18 (250mm × 4.6mm，5μm)；流動相：甲醇-0.2%磷酸水溶液(55∶45)；檢測波長：350nm；進樣量10μl，流速為1.0ml/min。結果：將綠絨蒿的植物基源規定為罌粟科植物全緣綠絨蒿M.Integrifolia (Maxim.)Franch.、毛瓣綠絨蒿 M. torquata Prain.及五脈綠絨蒿 M. quintuplinervia Regel的干燥全草，并進行薄層檢測及含量測定；木犀草素線性范圍為32.811～656.280μg，R2=1,方法回收率為94.86%，RSD為1.27%。結論：制定了藏藥綠絨蒿的質量標準，為該品種的質量控制提供了參考依據。

【關鍵詞】綠絨蒿；高效液相色譜法；薄層色譜；木犀草素

綠絨蒿為藏族習用藥材，收載于《中華人民共和國衛生部藥品標準·藏藥》第一冊[1]。藏藥綠絨蒿具有清熱，利尿，消炎，止痛等作用，用于治療肺炎，肝炎，肝與肺的熱癥，水腫。在《中華人民共和國衛生部藥品標準·藏藥》第一冊上只有其性狀和顯微鑒別，無其他檢測項目，檢測方法有限，且植物的基源有些混用。對綠絨蒿質量控制方法進行研究，以建立能有效控制其質量的藥材標準。

1儀器與材料

1.1儀器Spectra system?液相色譜儀(Waters公司；Mettler XP205型電子天平(精密度為十萬分之一)；Mettler XP504電子天平(精密度為萬分之一)。

1.2材料木犀草素對照品(批號：111520-200504，中國生物制品檢定所)；對照藥材(取自西藏藥檢所標本室，經格桑索朗主任藥師鑒定為全緣綠絨蒿)。乙腈、甲醇為色譜純，水為純凈水，其它試劑為分析純。10批綠絨蒿藥材為各地采集或收集。見表1。

表1　綠絨蒿樣品來源一覽表

2方法與結果

2.1基源衛生部頒《藥品標準》藏藥中，綠絨蒿為罌粟科植物全緣綠絨蒿Meconopsisintegrifolia(Maxim.) Franch.及五脈綠絨蒿M.quintuplinerviaRegel、長葉綠絨蒿M.LancifoliaFranch.等的干燥全草。

據本課題組在西藏，青海和云南等地實際樣品采集過程中發現綠絨蒿藥用來源主要為全緣綠絨M.integrifolia(Maxim.) Franch.及五脈綠絨蒿M.quintuplinerviaRegel。后經文本考證[2-4]，長葉綠絨蒿主要分布于東北和華北地區，藏醫臨床較少用。西藏藏醫臨床使用較多為全緣綠絨蒿及毛瓣綠絨蒿，青海、云南等藏醫臨床使用較多為五脈綠絨蒿。故將綠絨蒿的植物基源規定罌粟科植物全緣綠絨蒿M.Integrifolia(Maxim.)Franch.、毛瓣綠絨蒿M.torquataPrain.及五脈綠絨蒿M.quintuplinerviaRegel的干燥全草。

2.2顯微鑒別采用常規生藥鑒定方法，分別對上述樣品粉末制片觀察并對其進行了顯微照相。主要特征如下：

2.2.1全緣綠絨蒿粉末呈淺橙黃色。表皮毛多見，多細胞組成，碎斷，呈柱狀，基部至頂端多分枝，頂細胞尖，直徑約至45μm，可見圓形壁孔。導管較多見，直徑約至15μm，單個，或數個結合，多碎斷，具梯紋、網紋、紋孔排列整齊。花粉粒多見，圓球形，直徑80μm，棕黃色，壁較厚，表明梳稀疣狀突起。見圖1。

2.2.2五脈綠絨蒿粉末灰綠色。表皮毛多見，多細胞組成，碎斷，呈柱狀，基部至頂端多分枝，頂細胞尖，直徑約至75μm，可見圓形壁孔。導管多螺紋,亦見網紋及環紋,直徑約至15μm。花粉粒多見，圓球形，直徑約至50μm，棕黃色，壁薄，表明紋理狀。氣孔不定式，副衛細胞4～5個。

導管　　 　　氣孔　　　表皮毛　　　花粉粒圖1　全緣綠絨蒿的顯微鏡特征

2.2.3毛瓣綠絨蒿粉末淺綠色。表皮毛多見，多細胞組成，碎斷，呈柱狀，基部至頂端多分枝，頂細胞尖，直徑約至75μm，長至750μm，可見圓形壁孔。導管多為螺紋和梯紋，直徑約至15μm。花粉粒多見，圓球形，直徑約至50μm，棕黃色，壁較厚，表明緊密疣狀突起。氣孔不定式，副衛細胞4～5個。

2.3薄層色譜鑒別

2.3.1供試品溶液的制備取本品粉末約2.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20ml，密塞，超聲處理(功率200 W，頻率40kHz)兩次，每次30min，過濾，合并濾液，濃縮并定容至10ml，即得。

2.3.2對照藥材溶液的制備另取綠絨蒿對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液。

2.3.3薄層色譜法按照2010版中國藥典一部附錄VI B試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一羧甲基纖維素鈉溶液制備的硅膠G薄層板上。以環己烷-醋酸乙酯(6∶1)為展開劑，展開，取出，晾干。置紫外光燈(365 nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應位置上顯相同顏色的熒光斑點。見圖2。

1　　2 　3　　4 　5　　6 　7　　8 　9 　10 　111～10綠絨蒿樣品；11綠絨蒿對照藥材圖2　綠絨蒿的薄層鑒別

3含量測定

3.1色譜條件色譜柱：Waters Xselect C18 (250 mm × 4.6 mm, 5μm)；流動相：甲醇-0.2%磷酸水溶液(55∶45)；檢測波長：350nm；進樣量10μl；流速為1.0ml/min；用紫外檢測器檢測。在此條件下，木犀草素和其它組分均能達到基線分離。供試品中木犀草素保留時間與對照品一致。見圖3。

3.2供試品溶液的制備取本品粉末約2.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20ml，密塞，超聲處理(功率200W，頻率40kHz)兩次，每次30min，過濾，合并濾液，濃縮并定容至10ml，用0.45μm微孔濾膜過濾，取續濾液，即得。

圖3　樣品的HPLC色譜圖

3.3對照品溶液的制備取木犀草素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得。

3.4線性范圍的考察精密吸取對照品溶液各1、2、4、8、16、20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測定其峰面積，并以峰面積為縱坐標，木犀草素量(μg)為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程Y=4021.6X+7903.7，R2=1(n=6)。結果表明：木犀草素在32.811～656.280μg之間與峰面積線性關系良好。見圖4。

圖4　木犀草素標準曲線

3.5精密度試驗精密吸取對照品溶液(32.814μg/ml )10μl，注入液相色譜儀，共6次，記錄色譜圖，6次測定值的相對標準偏差低于2%，表明該方法精密度良好。

3.6穩定性實驗將新配制的供試品溶液，在上述色譜條件下在0、1、3、8、15、24h測定測得木犀草素的峰面積，計算其RSD。結果表明：在24h內，該方法具有較好的穩定性。見表2。

3.7加樣回收試驗取已知含量的供試品(木犀草素的含量為0.306mg/g)6份，分別精密加入對照品溶液(0.9115mg/ml)0.5ml，再照供試品溶液的制備法提取，按確定的測定方法進行測定，計算回收率。結果表明：平均回收率為94.86%，RSD為1.27%，表明該方法回收率良好。見表3。

3.8樣品測定取所收集的10批樣品， 按上述提取和色譜條件，對10批次的綠絨蒿進行了含量測定，求得各樣品中木犀草素的含量。，見表6。

表2　穩定性考察結果

表3　木犀草素加樣回收試驗結果

表4　10批供試品測定結果　(n=2)

4討論

4.1從供試品的測定結果可以看出,綠絨蒿中木犀草素含量相差10倍多，若按以木犀草素含量平均值下浮20%制定其含量下限，西藏、云南、青海三地的一半綠絨蒿都不合格，容易造成資源的浪費。為了很好的控制藥物質量，保護藥材資源，故規定綠絨蒿中木犀草素(C15H10O6)的含量暫定為：本品每克含木犀草素(C15H10O6)不得少于0.050mg。

4.2 在質量標準研究中，新增了【檢查】項下的水分、總灰分和酸不溶性灰分的檢查以及【浸出物】等項，在這里不再一一列出。

4.3實驗用的樣品基源有罌粟科植物全緣綠絨蒿、毛瓣綠絨蒿及五脈綠絨蒿。經過研究發現這三種綠絨蒿在薄層鑒別和含量測定中，實驗結果均一致，說明本質量標準研究適用于這三種綠絨蒿的檢測。

4.4經過反復的試驗，薄層色譜行為的重現性良好，專屬性強， Rf值適中，分離效果好，因此可以將此方法定為綠絨蒿藥材的定性鑒別。

4.5將木犀草素對照品甲醇溶液在200～400nm內進行全波長掃描，測得其在349.4nm 有最大吸收。且對照品色譜峰與其它峰達到良好的基線分離，雜質干擾少，峰形好。

參考文獻

[1] 中國衛生部藥典委員會.中華人民共和國衛生部藥品標準[S].藏藥(第一冊).1995:98-99.

[2] 羅達尚,孫安玲,夏光成.青藏高原藏藥-綠絨蒿屬植物資源初探[J].中草藥,1984,15 (8): 23-24.

[3] 楊永昌. 藏藥志[M]. 西寧: 青海人民出版社,1991：465-468.

[4] 中華本草編委會.中華本草(藏藥卷)[M].上海:上海科技出版社,2002：101-102；169.

作者簡介：次仁旺姆，女，主管藥師，主要從事藥品檢驗及藏藥標準提高工作。

【中圖分類號】R29

【文獻標志碼】A

【文章編號】1007-8517(2016)11-0001-03

(收稿日期：2016.03.29)