神經梅毒患者淋巴細胞亞群分析

張　易　黃繼偉　許曉英　呂　燕

1)四川自貢市第五人民醫院檢驗科　自貢　643020　2)四川自貢市第一人民醫院檢驗科　自貢　643000

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神經梅毒患者淋巴細胞亞群分析

張易1)黃繼偉2)許曉英1)呂燕1)

1)四川自貢市第五人民醫院檢驗科自貢6430202)四川自貢市第一人民醫院檢驗科自貢643000

【摘要】目的分析神經梅毒患者外周血中淋巴細胞亞群的特點，探討其與神經梅毒發病的關系。方法選取神經梅毒患者52例為研究對象，分為無癥狀神經梅毒組、早期神經梅毒組與晚期神經梅毒組，選取同期健康體檢者50例為健康對照組，采集外周血，運用流式細胞術分析神經梅毒組與健康對照組的外周血淋巴細胞的表達水平。結果神經梅毒患者的CD3+CD8+ T淋巴細胞數量明顯高于健康對照組，差異有統計學意義(P<0.05)，神經梅毒患者NK細胞數量顯著低于健康對照組；無癥狀神經梅毒患者的CD3+T細胞與CD3+CD8+ T細胞數顯著高于早期神經梅毒患者和晚期神經梅毒患者，差異均有統計學意義(P<0.05)。結論神經梅毒患者的T淋巴細胞亞群失衡與NK細胞減少與神經梅毒的發生發展有一定關系。

【關鍵詞】神經梅毒；淋巴細胞；流式細胞儀

梅毒是梅毒螺旋體(treponema pallidum，TP)感染所致的一種慢性性傳播疾病，目前在我國重新流行且發病率有逐年上升的趨勢。研究表明，未經治療的早期梅毒患者中25%～40%將發展為神經梅毒[1]，目前機制尚不明確，但其發生、發展和轉歸與機體免疫功能尤其是細胞免疫功能密切相關，T淋巴細胞活性的下降增加感染梅毒的幾率[2]。本研究分析不同臨床階段神經梅毒患者淋巴細胞亞群的變化，探討淋巴細胞亞群對神經梅毒病程進展判斷的臨床價值。

1材料與方法

1．1一般資料選取2014-05—2015-03就診于我院及我市第人民醫院神經內科最終診斷為神經梅毒的患者52例，均簽署知情同意書。診斷標準：靜脈血RPR、TPPA檢測均為陽性，血HIV抗體陰性，并排除患自身免疫性疾病、惡性腫瘤、合并其他感染性及性傳播疾病患者。男31例，女21例，平均年齡(31.3±6.75)歲；其中無癥狀神經梅毒19例，早期神經梅毒(包括腦膜血管神經梅毒和腦膜神經梅毒)20例，晚期神經梅毒(包括麻痹性癡呆和脊髓癆)13例。選取同期健康體檢者50例為健康對照組，男30例，女20例，平均年齡(30.5±6.27)歲。

1．2儀器與試劑選用美國貝克曼公司COULTER Epics XL流式細胞儀、淋巴細胞亞群檢測試劑盒(BECKMAN COULTER原裝配套)、紅細胞裂解液(美國貝克曼公司)及磷酸緩沖液(PBS)等。

1．3方法按照《全國臨床檢驗操作規程》[3]采集靜脈血標本2 mL，排除黃疸、脂濁及溶血標本，EDTA-Na2抗凝，取100 μL抗凝血加入淋巴細胞檢測試劑20 μL并混勻，室溫避光放置15 min，加入1 mL紅細胞裂解液以破壞紅細胞，室溫避光放置15 min，混勻免洗模式上機檢測，標本采集到上機檢測4 h內完成。采用Cell Quest軟件進行參數獲取和結果數據分析。

1．4統計學方法應用SPSS 17.0統計軟件進行統計分析，計量資料以均數±標準差表示，方差齊采用t檢驗，方差不齊采用Mann-WhitneyU檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2．1神經梅毒患者的淋巴細胞亞群分析運用流式細胞術檢測健康對照與神經梅毒患者外周血淋巴細胞的表達水平，結果顯示，神經梅毒患者CD3+CD8+T淋巴細胞數量明顯高于健康對照組，差異有統計學意義(P=0.01)，CD3+CD4+T淋巴細胞在神經梅毒患者中下調，但與健康對照無顯著差異(P>0.05)，神經梅毒患者NK細胞數顯著低于健康對照組(P=0.01)，而CD3+T淋巴細胞與CD3-CD19+B淋巴細胞的變化，2組差異無統計學意義 (P>0.05)。見表1。

2.2神經梅毒患者不同臨床階段淋巴細胞亞群分析T淋巴細胞中CD3+T淋巴細胞在無癥狀神經梅毒患者中顯著升高(P<0.05)，與早期和晚期梅毒患者比較，CD3+CD8+在無癥狀神經梅毒患者中顯著升高(P<0.05)，CD3+CD4+T淋巴細胞在早期神經梅毒患者體內含量最低，在無癥狀神經梅毒患者中上調，但差異無統計學意義(P>0.05)。B淋巴細胞在無癥狀神經梅毒患者中含量最高，但在神經梅毒患者不同臨床階段差異無統計學意義(P>0.05)，NK細胞在早期神經梅毒患者中含量最高，但各組差異也無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表1　2組外周血淋巴細胞表達水平比較±s，個/μL)

表2　神經梅毒患者不同臨床階段T淋巴細胞亞群分布±s，個/μL)

注：與無癥狀神經梅毒比較，*P<0.05

3討論

神經梅毒患者在出現臨床癥狀之前就能從腦脊液中檢測到TP，動物實驗證明，在兔感染TP數分鐘后即可在淋巴結內檢測到TP，隨后TP經血流播散至全身也僅需數小時，表明在感染TP的早期，TP可能就已侵入了神經系統[4]。以往研究證實，大多數患者免疫系統會將侵入中樞神經系統的TP清除，但部分患者卻不能將其完全清除，從而導致神經系統的損害，最終發展為神經梅毒[5]。有研究者認為，神經梅毒與皮損進展較慢有一定的相關性，宿主的免疫反應在神經梅毒的發病機制中有重要作用[6]。

本研究結果顯示，神經梅毒患者CD3+T細胞與CD3+CD4+T細胞含量與健康對照相比差異無統計學意義(P>0.05)，而神經梅毒患者CD3+CD8+T細胞數量顯著高于健康對照組(P<0.05)，同時CD3+CD4+T細胞與CD3+CD8+T細胞的比值顯著低于健康對照組(P<0.05)，CD4+T細胞與CD8+T細胞比例失衡，表明在神經梅毒患者中存在T細胞亞群間的失衡[7]。在對神經梅毒患者不同臨床階段的進一步研究發現，無癥狀神經梅毒患者的CD3+T淋巴細胞含量顯著高于神經梅毒早期和晚期患者(P<0.05)，表明在疾病初期TP刺激機體淋巴細胞增殖，細胞免疫功能較強，但其功能會隨著病程的進展而減弱。無癥狀神經梅毒患者的CD3+CD8+T細胞數量顯著高于早期和晚期神經梅毒患者(P<0.05)，對于神經梅毒的免疫抑制現象，無癥狀神經梅毒患者的免疫抑制現象最顯著。有研究認為，NK細胞可能通過髓樣分化因子MyD88及Toll樣受體家族的TIR結構域誘導強烈的抗原特異性的CD3+CD8+淋巴細胞反應，導致CD3+CD8+T淋巴細胞數量的增加[8]。在一些慢性病毒感染模型，如乙肝、丙肝和HIV中，CD3+CD8+T淋巴細胞增加，可以殺死病毒感染靶標并削弱病毒的增殖能力，同時產生很生免疫性細胞因子[9]，CD3+CD8+T淋巴細胞可能在神經梅毒早期清除TP中發揮重要作用。

本研究中神經梅毒患者與健康的CD3-CD19+B淋巴細胞數量無顯著差異(P>0.05)，B淋巴細胞是免疫反應中重要的細胞類型，主要是表達和分泌免疫球蛋白，在免疫調節與免疫反應中發揮重要作用，其在不同臨床階段的神經梅毒患者體內也無顯著差異(P>0.05)，這可能與TP表面的黏多糖保護膜有關。黏多糖、宿主蛋白等組成的保護層TP表面，使得抗TP抗體較難接近相應抗原，起到保護TP不易被清除的作用[10]。本研究還發現，NK細胞數量在神經梅毒組顯著低于健康對照組(P<0.05)，且無癥狀神經梅毒患者的NK細胞含量最低，早期神經梅毒患者中含量最高，但差異無統計學意義(P>0.05)。現有研究認為，NK細胞在清除TP方面起重要作用，但梅毒患者血清中存在抑制因子，可以減弱NK細胞的活性[11]，從而可能使TP更易侵入神經系統，最終導致神經梅毒，同時可能因NK細胞的殺傷作用無特異性，導致不同臨床階段的神經梅毒患者NK細胞數量差異無統計學意義(P>0.05)。

綜上，神經梅毒患者CD3+CD8+T淋巴細胞數量升高，NK細胞數量下降，TP對神經梅毒患者的影響主要表現為細胞免疫失衡和細胞免疫抑制。無癥狀神經梅毒患者的CD3+CD8+T細胞數量顯著高于早期和晚期神經梅毒患者，表明CD3+CD8+T淋巴細胞的減少可能在神經梅毒病情發展中起重要作用。

4參考文獻

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(收稿 2015-08-12)

【中圖分類號】R759.1+3

【文獻標識碼】A

【文章編號】1673-5110(2016)15-0007-003

Analysis of lymphocyte subsets in patients with neurosyphilis

ZhangYi*，HuangJiwei，XuXiaoying，LvYan

*DepartmentofClinicalLaboratory，ZigongFifthPeople'sHospital，Zigong643020，China

【Abstract】Objective To analyze the subsets of the lymphocyte in peripheral blood in patients with neurosyphilis and investigate the relationship between these cells and onset of neurosyphilis. Methods The subsets of the lymphocyte were analyzed by flow cytometry with immunofluorescent staining in 52 patients with neurosyphilis and 50 healthy controls. Results Neurosyphilis patients' CD3+CD8+ T lymphocytes numbers were significantly higher than those in healthy controls，the difference was statistically significant (P<0.05)，the numbers of patients with neurosyphilis NK cells were significantly lower than those of the control group (P<0.05). Asymptomatic neurosyphilis patients' CD3+ T cells and CD3+CD8+ T cells count were significantly higher those in patients with early and late neurosyphilis neurosyphilis (P<0.05). Conclusion It is suggested that the change of T lymphocyte subsets and the reduction of NK cells are related to neurosyphilis．

【Keywords】Neurosyphilis；Lymphocyte；Flow cytometry