抗復(fù)感顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)考察△

龔敏陽(yáng)　伍小燕莫小林　黃權(quán)芳　陳曉明　陳　朝（廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院　南寧　530023）

抗復(fù)感顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)考察△

龔敏陽(yáng)伍小燕*莫小林黃權(quán)芳陳曉明陳朝（廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院南寧530023）

摘要：目的：考察抗復(fù)感顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：通過(guò)薄層色譜法定性鑒別方中黃芪和陳皮，選用高效液相色譜法對(duì)大黃素和大黃素甲醚進(jìn)行定量。結(jié)果：定性方法可靠，定量方法準(zhǔn)確、精密度和加收率較佳。結(jié)論：抗復(fù)感顆粒的定性、定量方法能有效控制制劑質(zhì)量。

關(guān)鍵詞：抗復(fù)感顆粒 黃芪 陳皮 何首烏 大黃素 大黃素甲醚

抗復(fù)感顆粒是由廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院自行研制開(kāi)發(fā)的治療小兒反復(fù)呼吸道感染的純中藥醫(yī)院制劑，臨床用于治療反復(fù)呼吸道感染患兒［1］。本方由黃芪、陳皮、何首烏等8味藥材組成，其中黃芪為君藥，陳皮、何首烏為臣藥。對(duì)上述三種中藥材進(jìn)行定性研究，對(duì)何首烏中有效成分進(jìn)行含量測(cè)定研究。

1材料

Waters 2698型高效液相色譜儀（美國(guó)）；Waters光電二級(jí)管陣列檢測(cè)器（美國(guó)），Empower色譜工作站，GH252電子分析天平（日本A&D），黃芪、陳皮、何首烏等8味藥材（購(gòu)于廣西萬(wàn)寶堂醫(yī)藥有限公司）。黃芪、陳皮、何首烏對(duì)照藥材、黃芪甲苷、橙皮苷、大黃素標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)分別為121462－200709、120969－200808、121454－200703、110781－200613、110721－201014、110756-200110。

2方法與結(jié)果

2.1黃芪的定性方法［2，3］

2.1.1供試品的制備：取抗復(fù)感顆粒10g，加乙醇30mL，加熱回流提取1h，過(guò)濾，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0mL溶解，注入已處理好的中性氧化鋁柱（干法制備，中性氧化鋁10g），用40%乙醇30mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)铀?0mL溶解，用水飽和正丁醇提取兩次，每次20mL，合并正丁醇（上層），用1%NaOH提取兩次，每次10mL，棄去堿液（下層），用正丁醇飽和的水洗至中性，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液。

2.1.2取缺黃芪藥材制成的樣品，同法制成陰性對(duì)照溶液。

2.1.3取黃芪對(duì)照藥材0.1g，同法制得對(duì)照藥材溶液。

2.1.4精密稱(chēng)取黃芪甲苷，用甲醇制成每毫升含1mg的溶液，制得對(duì)照品溶液。

2.1.5各吸取上述溶液2μL，點(diǎn)樣于硅膠G薄層板上，以三氯甲烷∶甲醇∶水（13∶7∶2）的下層為展開(kāi)劑，展開(kāi)，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱10min。供試品溶液和對(duì)照藥材溶液同一位置顯同樣斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無(wú)相同斑點(diǎn)。結(jié)果見(jiàn)圖1。

2.2陳皮的定性方法［2，4］。

2.2.1取抗復(fù)感顆粒10g，加甲醇30mL，加熱回流提取20min，過(guò)濾，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0mL溶解，用醋酸乙酯提取2次，每次15mL，蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液。

2.2.2取缺陳皮藥材制成的樣品，同上法制成陰性對(duì)照溶液。

2.2.3取陳皮對(duì)照藥材0.1g，同上法制得對(duì)照藥材溶液。

2.2.4精密稱(chēng)取橙皮苷，加甲醇制成每毫升含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.2.5各吸取上述溶液1μL，點(diǎn)樣于硅膠G薄層板上，以三氯甲烷∶甲醇∶水（9∶3∶0.5）的下層為展開(kāi)劑，上行展開(kāi)，晾干，噴以1%三氯化鋁溶液，置紫外燈（365nm）下檢視。供試品溶液和對(duì)照藥材溶液同一位置顯同樣斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無(wú)相同斑點(diǎn)。結(jié)果見(jiàn)圖2。

2.3何首烏的定性方法［5］。

2.3.1取抗復(fù)感顆粒10g，加甲醇30mL，加熱回流提取30min，過(guò)濾，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0mL溶解，加乙醚10mL提取，蒸干，殘?jiān)眉状?mL溶解，作為供試品溶液。

2.3.2取缺何首烏藥材制成的樣品，同法制成陰性對(duì)照溶液。

2.3.3稱(chēng)取何首烏對(duì)照藥材0.2g，同法制得對(duì)照藥材溶液。

2.3.4稱(chēng)取大黃素，加甲醇制成每毫升含1mg大黃素的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.3.5分別吸取上述溶液各1μL，點(diǎn)樣于硅膠G薄層板上，以石油醚（60℃～90℃）-乙酸乙酯-甲酸（7∶3∶0.5）為展開(kāi)劑，上行展開(kāi)，晾干，置氨水飽和的玻璃缸中，可見(jiàn)光下檢識(shí)。供試品溶液和對(duì)照藥材溶液同一位置顯同樣斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無(wú)相同斑點(diǎn)。結(jié)果見(jiàn)圖3。

2.4何首烏中大黃素和大黃素甲醚的含量測(cè)定［6］

2.4.1色譜條件：色譜柱：Inertsil ODS-SP；流動(dòng)相：流動(dòng)相A為甲醇，B為0.1%磷酸水溶液，梯度洗脫，0～20min，A 30%～50%；20～25min，A50%～80%；25～35min，A 80%～100%；35～50min；流速為1mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)為483nm，柱溫：30℃。

2.4.2精密稱(chēng)取大黃素、大黃素甲醚對(duì)照品適量，加甲醇制得含大黃素4.32mg·mL-1、含大黃素甲醚9.60mg·L-1的溶液，得對(duì)照品溶液。

2.4.3精密稱(chēng)取抗復(fù)感顆粒10g，加入50mL甲醇，加熱回流1h，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，過(guò)濾，棄去初濾液，取續(xù)濾液25mL，水浴蒸干，精密加8%鹽酸溶液20mL，超聲處理5min，加三氯甲烷20mL，水浴加熱回流1h，冷卻，酸液加三氯甲烷10mL萃取3次蒸干，殘?jiān)眉状既芙猓D(zhuǎn)移定容至10mL，得供試品溶液。另取用10g缺何首烏的陰性樣品，依上法制得陰性溶液。

2.4.4測(cè)定方法研究

2.4.4.1專(zhuān)屬性：分取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液，進(jìn)樣量為10μL，依色譜條件測(cè)定，結(jié)果陰性樣品溶液無(wú)干擾，見(jiàn)圖3，說(shuō)明本法專(zhuān)屬性良好。

2.4.4.2線(xiàn)性關(guān)系：取對(duì)照品溶液，進(jìn)樣量設(shè)為3、5、7、10、12、15、20、25、30μL按上述色譜條件測(cè)定，以峰面積（A）為橫坐標(biāo)，進(jìn)樣量（ng）為縱坐標(biāo)，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。大黃素的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)為C%= A*9.68×10-5+1.64，R=0.9993，n=9，證明進(jìn)樣量在 12.96～129.6mg·L-1范圍內(nèi)，線(xiàn)性關(guān)系良好。大黃素甲醚的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)為C%=A*5.46×10－4+12.8，R=0.9993，n=9，證明進(jìn)樣濃度在28.8～288ng范圍內(nèi)，線(xiàn)性關(guān)系良好。

2.4.4.3精密度：依法連續(xù)進(jìn)樣對(duì)照品溶液6次，計(jì)算峰面積，大黃素峰面積的RSD為1.51%（n=6），大黃素甲醚峰面積的RSD分別為2.55%（n=6），證明儀器精密度好。

2.4.4.4穩(wěn)定性：取供試品溶液，分別于室溫下0、2、4、6、8、10h進(jìn)樣10μL，依法測(cè)定，記錄峰面積，大黃素峰面積的RSD為2.72%（n=6），大黃素甲醚峰面積的RSD分別為2.38%（n=6），表明溶液在10h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.4.5重復(fù)性：依法制備測(cè)定抗復(fù)感顆粒6份，計(jì)算峰面積，大黃素峰面積的RSD為2.72%（n=6），大黃素甲醚峰面積的RSD 為2.37%（n=6），證明重復(fù)性好。

2.4.4.6加樣回收率：取已知含量的抗復(fù)感顆粒共6份，各精密加入大黃素、大黃素甲醚對(duì)照品，依法測(cè)定，大黃素的回收率為99.1%，RSD為2.92%（n=6），大黃素甲醚的回收率為95.0%，RSD為2.98%（n=6），證明加樣回收率符合規(guī)定。

3討論

進(jìn)行含量測(cè)定的實(shí)驗(yàn)時(shí)，通過(guò)參考文獻(xiàn)，流動(dòng)相曾選擇甲醇-0.1%磷酸溶液（87∶13）［7］，但供試品分離效果不理想。后換甲醇與0.1%醋酸梯度洗脫［8］，分離效果仍不滿(mǎn)意。最后換為本文所用流動(dòng)相，分離效果和出峰時(shí)間均符合要求。

參考文獻(xiàn)

［1］王力寧，玉振喜，張曉春，等.系列抗復(fù)感合劑防治小兒反復(fù)呼吸道感染的臨床研究［J］.廣西中醫(yī)藥，1998，21（6）：4.

［2］國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典2010年版一部［S］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：283-285.

［3］王春怡，葉雪蘭，李衛(wèi)民，等.黃芪總皂苷提取物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2012，23（1）：94-96.

［4］連芳，陳丹，曾令軍，等.玳玳黃酮滴丸質(zhì)量分析［J］.中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2014，31（7）：827-831.

［5］李勇軍，何迅，鄭林，等.蒲薏顆粒的定性定量研究［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2010，16（4）：24-27.

［6］蔡麗芬，鐘國(guó)躍，張倩，等.HPLC測(cè)定不同生長(zhǎng)年限及采收期何首烏中二苯乙烯苷和蒽醌類(lèi)成分的含量 ［J］.中國(guó)中藥雜志，2010，35（10）：1221-1225.

［7］李靜，張莉，曹玲，等.高效液相色譜法測(cè)定首烏丸中大黃素的含量［J］.中國(guó)生化藥物雜志，2009，30（2）：118-120，123.

［8］孟軍華，金澤祥，趙漢琪，等.4種蓼科植物中大黃素型蒽醌類(lèi)成分的測(cè)定［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2013，32（8）：1080-1081.

中圖分類(lèi)號(hào)：R286.0

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1672-8351（2016）07-0004-03

基金項(xiàng)目：△廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥管理局立項(xiàng)課題（GZYZ-10-10）全國(guó)中藥特色技術(shù)傳承人才培訓(xùn)項(xiàng)目

*通訊作者