中藥茅莓根、莖、葉中表兒茶素的含量測定

黃　鏞林鈺文楊柳青（.廣東省中醫(yī)院藥學部　廣州　500；.廣州市醫(yī)藥職業(yè)學校　廣州　50430）

中藥茅莓根、莖、葉中表兒茶素的含量測定

黃鏞1林鈺文2楊柳青1（1.廣東省中醫(yī)院藥學部廣州510120；2.廣州市醫(yī)藥職業(yè)學校廣州510430）

摘要：目的：比較中藥茅莓不同部位中表兒茶素的含量，為臨床用藥提供參考。方法：采用HPLC法測定茅莓根、莖、葉中表兒茶素的含量，從化學成分上考察茅莓不同藥用部位有效成分的分布。結(jié)果：不同產(chǎn)地茅莓根、莖、葉中表兒茶素含量有一定差異，以廣西產(chǎn)地的含量稍高；茅莓根、莖、葉等部位均含有表兒茶素，三者含量有明顯差異，含量的大小順序依次為：葉＞根＞莖。結(jié)論：茅莓根、莖、葉中表兒茶素含量有顯著差異，臨床上作為藥用應(yīng)有所區(qū)別。

關(guān)鍵詞：茅莓 藥用部位 表兒茶素 含量測定 HPLC

茅莓為薔薇科懸鉤子屬植物，是廣東地區(qū)民間常用藥，別名蛇泡簕、紅梅消、三月泡、薅秧藨、天青地白草等，根、莖、葉及全草均可藥用，具有清熱涼血、散結(jié)止痛、利尿消腫等功效，廣泛用于感冒發(fā)熱、跌打損傷、急性咽喉炎、腎盂腎炎、痛經(jīng)等疾病的治療［1～2］。臨床上常以茅莓根入藥，《廣東省中藥材標準（第二冊）》也僅收錄了茅莓根，從功效上分析，其根、莖、葉功效基本一致。研究表明，茅莓中含有化學成分包括：微量元素類、糖類、色素類、三萜及其苷類、黃酮/酚類、甾體及其苷類，以及茅莓葉中大量的揮發(fā)油類成分等［3］。有文獻報道，黃酮類成分是茅莓根中主要有效成分之一，表兒茶素在黃酮類成分中含量較大，具有保肝、抗癌的藥理作用［4］，可作為茅莓根的主要藥效評價成分。茅莓莖和葉中是否含有表兒茶素，本文將對其根、莖、葉不同部位中的表兒茶素進行測定，為臨床用藥提供參考。

1儀器與試藥

Agilent-1100高效液相色譜儀，包括DAD檢測器、自動進樣器、在線脫氣、四元泵（美國安捷倫科技有限公司）；SARTORIUS BP211D型電子天平（十萬分之一）。表兒茶素對照品（批號：11878—201202）購于中國藥品生物制品檢定所（純度≥98.0%）；茅莓采集于廣東、廣西等地，經(jīng)廣州中醫(yī)藥大學中藥鑒定教研室鑒定為薔薇科懸鉤子屬植物茅莓Rubus parvifolius L.的干燥全草。乙腈為色譜純，甲醇等試劑均為分析純，水為超純水。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件：色譜柱：Agilent Extend C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈-水（12∶88）；流速：1.0mL·min-1；柱溫：25℃；檢測波長：280nm；進樣量為20μL。

2.2對照品溶液的制備：精密稱取表兒茶素對照品適量，置于25mL量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，制得0.6mg/mL對照品溶液，過0.45μm微孔濾膜，即得。

2.3供試品溶液制備：取茅莓根、莖、葉樣品粉末1g，5份，精密稱定，置100mL具塞錐形瓶，精密加入50%甲醇25mL，稱定重量，超聲提取90min（功率240W，頻率45kHz），放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失重量，搖勻，離心取上清液，過0.45μm微孔濾膜，即得。

2.4標準曲線的制備：精密量取表兒茶素對照品溶液適量分別稀釋成濃度為 0.01mg/mL、0.02mg/mL、0.05mg/mL、0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.4mg/mL、0.6mg/mL的標準溶液，按照上述的色譜條件進樣20μL，測定表兒茶素的峰面積，以峰面積Y為縱坐標，進樣濃度（mg/mL）為橫坐標繪制標準曲線，得到回歸方程分別為：Y=12874X-12.475（R2=0.9998）。

2.5精密度試驗：精密吸取表兒茶素對照品溶液20μL，按上述色譜條件重復進樣5次，照上述色譜條件測定表兒茶素的峰面積。結(jié)果表兒茶素峰面積的RSD=1.08%（n=5），表明儀器精密度良好。

2.6穩(wěn)定性試驗：取同一份供試品溶液，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，照上述色譜條件，在0、12、24、36、48h進樣測定。結(jié)果表兒茶素峰面積的RSD=1.16%（n=5），表明供試品溶液在48h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7重復性試驗：取同一批供試品樣品5份，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，照上述色譜條件分別進樣20μL。結(jié)果表兒茶素峰面積的RSD=0.97%（n=5），表明方法重復性良好。

2.8加樣回收率試驗：精密稱取供試品樣品0.05g，加入適量表兒茶素的對照品，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，照上述色譜條件測定，計算加樣回收率。結(jié)果表兒茶素的平均回收率為98.7%，RSD=2.56%（n=5）。

2.9含量測定：按照上述含量測定方法，測定茅莓根、莖、葉中表兒茶素的含量。結(jié)果見表1、圖1。

表1茅莓根、莖、葉中表兒茶素含量測定結(jié)果（n=5）

表1結(jié)果表明，不同產(chǎn)地茅莓根、莖、葉中表兒茶素含量有一定差異，以廣西產(chǎn)地的含量稍高；茅莓根、莖、葉等部位均含有表兒茶素，3個藥用部位的含量有明顯差異，含量的大小順序依次為：葉＞根＞莖。

3討論

由于用藥習慣差異，茅莓在不同地方藥用部位有所區(qū)別，2006年版《中藥大辭典》、2008年版《廣西壯藥標準》、2003年版《貴州省中藥材標準》、2009年版《遼寧省中藥材標準》收錄了茅莓干燥地上部分；2010年版《中國藥典》附錄、2002年版《山東省中藥材標準》、1995年版《山東省中藥材標準》、2010年版《廣東省中藥材標準》收錄了茅莓根；臨床上，茅莓的根、莖、葉功效相似，醫(yī)家對茅莓根應(yīng)用較為普遍，但茅莓不同部位化學成分、藥理和臨床應(yīng)用是否有區(qū)別，有待研究。

目前有關(guān)茅莓化學成分的研究較少，近年來，國內(nèi)學者對茅莓根、莖、葉的化學成分進行了初步分析，分離鑒定出黃酮、二萜、三萜及三萜皂苷類成分，有學者研究表明，茅莓中黃酮具有抗氧化活性［5］，被認為是主要有效成分之一。本文以表兒茶素為評價指標，考察茅莓不同部位成分含量，為臨床用藥提供參考。實驗結(jié)果表明，茅莓根、莖、葉中表兒茶素含量有明顯的差異，同時學者研究表明，茅莓根和葉中揮發(fā)油成分和抑菌作用也有一定差異［6～7］，因此，茅莓根、莖、葉作為藥用于臨床應(yīng)有所側(cè)重。

參考文獻

［1］廣東省食品藥品監(jiān)督管理局.廣東省中藥材標準（第二冊）［S］.廣州：廣東科技出版社，2011：200.

［2］陳小露，梅全喜，周洪波.茅莓根化學成分研究［J］.中藥材，2014，37（6）：995-997.

［3］胡小剛.茅莓化學成分分離及藥理學活性初探［D］.第三軍醫(yī)大學碩士學位論文，2013.

［4］張旭，楊萬青，蘇聰，等.HPLC法測定茅莓根中表兒茶素的含量［J］.中國新藥雜志，2014，23（24）：2915-2918.

［5］鄭紅，劉德勝，丁媛媛，等.茅莓黃酮體外抗氧化活性研究［J］.湖北農(nóng)業(yè)科學，2013，52（23）：5828-5830.

［6］譚明雄，王恒山，黎霜.茅莓根和葉揮發(fā)油抑菌活性的研究［J］.科技進展，2002，9：21-22.

［7］譚明雄，王恒山，陳憲明.茅莓葉和根揮發(fā)油的主要化學成分［J］.科技進展，2003，17（6），46-47.

中圖分類號：R284

文獻標識碼：A

文章編號：1672-8351（2016）07-0003-02

The Determination of the Content of L-epicatechin of Roots，Stems and Leaves from Rubus parvifolius L.

Huang Yong1Lin Yuwen2Yang Liuqing1（1.Pharmaceutical Department of Guangdong Provincial Hospital of TCM，Guangdong，Guangzhou，510120；China.2.Guangzhou Pharmaceutical School Guangzhou，510430.）

Abstract：Objective：To compare the content of L-epicatechin from different parts of Rubus parvifolius L，to provide reference for clinical application.Methods：Using the method of HPLC to determine the content of L-epicatechin from roots，stems and leaves of Rubus parvifolius L.，to evaluate similarities and differences of Clinical efficacy on the chemical composition.Results：There was some different of the content of L-epicatechin for different place of Rubus parvifolius L.，and the content of Rubus parvifolius L.from Guangxi was lightly higher，we found the compound of L-epicatechin from roots，stems and leaves of Rubus parvifolius L.，and there are significant differences in the content of the three，the size of the order was：leaf＞root＞stem.Conclusion：There was some different of the content of L-epicatechin for roots，stems and leaves of Rubus parvifolius L.，it should be different as a medicinal clinic.

Key words：Rubus parvifolius L.Medicinal parts L-epicatechin Determination HPLC