生物農藥與化學農藥復配對桃枝枯病菌的毒力

尤春梅，高汝佳，黃沈鑫，汪孝璊，紀兆林*，董京萍，童蘊慧，宋宏峰，徐敬友

(1.揚州大學園藝與植物保護學院，江蘇揚州 225009；2.江蘇省農業科學院園藝研究所/江蘇省高效園藝作物遺傳改良重點實驗室，江蘇南京 210014)

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生物農藥與化學農藥復配對桃枝枯病菌的毒力

尤春梅1，高汝佳1，黃沈鑫1，汪孝璊1，紀兆林1*，董京萍1，童蘊慧1，宋宏峰2，徐敬友1

(1.揚州大學園藝與植物保護學院，江蘇揚州 225009；2.江蘇省農業科學院園藝研究所/江蘇省高效園藝作物遺傳改良重點實驗室，江蘇南京 210014)

摘要[目的]明確生物農藥和化學農藥復配對桃枝枯病菌的抑制效果。[方法]采用菌絲生長抑制法，測定10種生物藥劑對桃枝枯病菌的毒力，將毒力強的生物農藥與化學農藥咪鮮胺、多菌靈和烯唑醇進行復配，探討復配劑對桃枝枯病菌的聯合毒力效果。[結果]毒力作用最強的生物農藥是中生菌素，其次是申嗪霉素和梧寧霉素，其抑制中濃度(EC50)分別為0.041 9、0.231 4和0.655 4 μg/mL，與3種化學藥劑復配，發現申嗪霉素與3種化學農藥復配均達到增效作用，而中生菌素和梧寧霉素與化學農藥復配大多配比具有增效作用或相加作用。[結論]生物農藥與化學農藥復配能增加對桃枝枯病菌的毒力。

關鍵詞桃枝枯病菌；生物農藥；殺菌劑；毒力測定；復配

桃枝枯病，又名縊縮性潰瘍病，由桃擬莖點霉(Phomopsisamygdali)引起，是近幾年我國南方桃產區(如江蘇無錫、常州和浙江嘉興等)新出現并發生嚴重的病害[1-4]。該病曾在美國東部沿海地區發生和流行[5-6]。該病主要侵染新梢，通常在新梢基部出現褐斑，后環狀縊縮擴展，致使葉片枯黃、脫落和新枝枯死或折梢枯死，直接影響桃樹生長和果實產量[3-4]。

目前，生產上對桃枝枯病的防治以化學防治為主，缺乏生物防治。化學農藥防治桃枝枯病一般采用多菌靈、甲基硫菌靈、咪鮮胺、苯醚甲環唑等殺菌劑[7-8]，如果這些殺菌劑在果園常年使用及用藥量不斷增加，會使病菌產生抗藥性，導致的環境污染也日益嚴重。生物防治具有對人畜安全、環境兼容性好、病菌不易產生抗藥性等優點，因而日益引起人們的關注，但是生物防治也存在田間藥效慢、防效不穩定等問題。而生物與化學相結合的病蟲害防治策略受到各國植物保護專家的重視，因其既能有效控制病蟲害，又能降低化學農藥使用量，符合我國農藥減量化政策。目前，利用生物性藥劑及其與化學農藥復配防治桃枝枯病的研究鮮見報道。鑒于此，筆者通過室內毒力測定方法對有效抑制桃枝枯病菌的生物性農藥進行了篩選，并探討了其與化學農藥復配對病菌的毒力效果，旨在為桃枝枯病的防治提供理論依據。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1供試菌株。桃枝枯病菌為實驗室保存菌株ZN32。試驗前于PDA平板上活化。

1.1.2供試藥劑。選擇10 種生物農藥進行室內毒力測定，其中包括微生物源農藥8種：2%武夷霉素水劑(山東省濰坊萬勝生物農藥有限公司)，2%寧南霉素水劑(黑龍江強爾生化技術開發有限公司)，10%多抗霉素可濕性粉劑(住商農資廣州有限公司)，2%春雷霉素水劑(廣東省江門市植保有限公司)，0.3%梧寧霉素水劑(遼寧微克生物工程有限公司)，3%中生菌素可濕性粉劑(廣東省深圳諾普信農化股份有限公司)，1%申嗪霉素懸浮劑(上海農樂生物物品股份有限公司)，10%井岡霉素水劑(福建凱立生物制品有限公司)；植物源農藥2種：0.5%小檗堿水劑(浙江華京生物科技開放有限公司)，1%蛇床子素水乳劑(江蘇省科農化有限責任公司)。與生物農藥復配的化學農藥有96%咪鮮胺原藥(江蘇輝豐農化有限公司)、98%多菌靈原藥(江蘇省太倉市農藥廠有限公司)、92%烯唑醇原藥(江蘇建農農藥化工有限公司)。

1.2方法

1.2.1單劑的毒力測定。在無菌條件下，將供試藥劑溶解后以滅菌水適當稀釋，配制成1×104mg/L母液。將各藥劑用無菌水稀釋配制成不同濃度的含藥PDA平板。病菌在PDA上25 ℃培養5 d后，用打孔器在菌落邊緣打直徑6 mm的菌餅，用接種針移至含藥 PDA 平板中央。每處理4次重復，另設不含藥PDA為對照。移菌后將PDA平板置于25 ℃下培養，5 d后測量菌落直徑，并減去接菌餅直徑 6 mm，獲得菌落增長直徑。計算出各藥劑濃度的菌絲生長抑制率[菌絲生長抑制率=(對照菌落增長直徑-處理菌落增長直徑)/對照菌落增長直徑×100%]。對藥劑濃度對數(橫坐標)及對應的菌絲生長抑制率幾率值(縱坐標)進行回歸分析，求出毒力回歸方程：y=a+bx，并計算出藥劑的EC50和相關系數。

1.2.2復配藥劑的毒力測定。選用對桃枝枯病菌抑菌作用強的生物農藥(以A表示)分別和化學農藥咪鮮胺、多菌靈、烯唑醇(以B表示)按有效成分1∶1、1∶3和3∶1比例進行兩兩復配，制成混劑。移接桃枝枯病菌菌餅(直徑6 mm)分別至含不同濃度配比混劑的PDA平板中央，每處理3次重復。25 ℃培養5 d后測量菌落直徑，計算各配比混劑對病菌菌絲生長的抑制率。按藥劑濃度對數—菌絲生長抑制率幾率值建立菌株不同配比混劑的毒力回歸方程，計算EC50。根據Wadley法評價A與B混合后的聯合毒力作用，計算SR(增效比)[9]。

EC50(th)=(a+b)/[a/EC(A)50+b/EC(B)50]

SR=EC50(th)/EC50(ob)

式中，a、b分別為單劑在混劑中的比例；EC(A)50、EC(B)50分別為a、b單劑的EC50實測值；EC50(th)為混劑的EC50理論值；EC50(ob)為混劑的EC50實測值；SR表示a、b單劑混合后的相互作用，當SR<0.5時為拮抗作用，當SR=0.5～1.5時為相加作用，當SR>1.5時為增效作用。

2結果與分析

2.1不同單劑對桃枝枯病病菌的毒力由表1可知，毒力最強的生物農藥是中生菌素，EC50為0.041 9 μg/mL；其次是申嗪霉素、梧寧霉素和春雷霉素，EC50分別為0.231 4、0.655 4和2.254 5 μg/mL。而寧南霉素、小檗堿和井岡霉素等抑菌作用較差，EC50均值超過100 μg/mL，特別是井岡霉素的EC50達14 742.038 3 μg/mL(表1)。因此，可選用中生菌素、申嗪霉素和梧寧霉素與化學農藥進行復配。

表1　不同生物農藥對桃枝枯病菌的毒力

2.2復配藥劑對桃枝枯病菌的毒力由表2可知，中生菌素與咪鮮胺在1∶1和1∶3配比的SR值均大于1.5，表現為增效作用，在配比為3∶1時表現為相加作用；中生菌素與多菌靈的3種配比的SR值均大于1.5，均表現為增效作用；中生菌素與烯唑醇在1∶1復配時表現為增效作用，1∶3和3∶1比例復配時SR值分別為1.05和 0.83，均表現為相加作用。

表2　中生菌素與化學藥劑不同配比對桃枝枯病菌的聯合毒力

由表3可知，申嗪霉素與咪鮮胺、多菌靈、烯唑醇不同配比的SR值均大于1.5，均表現為增效作用，在配比為3∶1、3∶1和1∶1時的增效作用最明顯，SR值分別為4.02、2.09和8.19。

由表4可知，梧寧霉素與咪鮮胺配比為1∶3的SR值為5.73，表現為增效作用，而配比1∶1和3∶1的SR值分別為1.35和1.15，表現為相加作用；梧寧霉素與多菌靈配比1∶1為增效作用，1∶3時為相加作用，3∶1時表現為拮抗作用；梧寧霉素與烯唑醇復配除了3∶1配比表現為相加作用外，其他2個配比(1∶1和1∶3)的SR值分別為1.79、1.86，均為增效作用。

3結論與討論

室內毒力測定結果表明，10種生物藥劑對桃枝枯病菌菌絲生長都有不同程度的抑制作用。從EC50來看，抑菌能力最強的藥劑是中生菌素，其次是申嗪霉素、梧寧霉素等，而小檗堿、寧南霉素、井岡霉素等抑菌作用較差。與化學藥劑復配之后，申嗪霉素與3種化學農藥復配均達到增效作用；除了與咪鮮胺3∶1及烯唑醇1∶3和3∶1復配配比表現為相加作用，中生菌素與3種化學農藥的其他配比均表現為增效作用；而梧寧霉素除了與多菌靈3∶1配比復配表現拮抗作用外，與多菌靈其他配比及與其他農藥復配均表現為相加或增效作用。

表3　申嗪霉素與化學藥劑不同配比對桃枝枯病菌的聯合毒力

表4　梧寧霉素與化學藥劑不同配比對桃枝枯病菌的聯合毒力

該研究突破了桃枝枯病目前以化學農藥為主的防治對策的局限性，利用生物農藥與低毒化學農藥的協同作用進行防治研究，室內毒力復配測定結果表明中生菌素、申嗪霉素與梧寧霉素與咪鮮胺、多菌靈和烯唑醇等化學農藥復配，均有對桃枝枯病菌有明顯抑制作用的復配配比，增效比大于1.5。可選用生物農藥與化學農藥1∶1復配比進一步進行田間防病試驗，以確定防病效果。另外，復配藥劑的田間使用方法和防治技術有待進一步探索。

參考文獻

[1] 尹良芬，馬瓊瑤，陳育.桃潰瘍病的鑒定[J].西南農業學報，2011，24(5)：1748-1752.

[2] DAI F M，ZENG R，LU J P.First report of twig canker on peach caused byPhomopsisamygdalein China[J].Plant disease，2012，96(2)：288.

[3] 紀兆林，戴慧俊，金唯新，等.桃枝枯病病原鑒定[J].揚州大學學報(農業與生命科學版)，2013，34(4)：94-98.

[4] 方麗，熊彩珍，顧立明，等.桃枝枯病的癥狀及其病原鑒定[J].浙江農業學報，2013，25(1)：103-107.

[5] LALANCETTE N，POLK D F.Estimating yield and economic loss from constriction canker of peach[J].Plant disease，2000，84(9)：941-946.

[6] TUSET J J，PORTILLA M T.Taxonomic status ofFusicoccumamygdaliandPhomopsisamygdalina[J].Canadian journal of botany，1989，67：1275-1280.

[7] 紀兆林，戴慧俊，張慧琴，等.不同殺菌劑對桃枝枯病菌的毒力和田間防效[J].果樹學報，2013，30(2)：281-284.

[8] 金唯新，戴慧俊，紀兆林，等.桃枝枯病花前田間化學防治效果研究[J].安徽農業科學，2015，43(32)：122，169.

[9] 韓麗娟，顧中言，王強，等.農藥復配與復配農藥[M].南京：江蘇科學技術出版社，1994：31-51.

基金項目揚州大學大學生創新創業訓練計劃項目(x2015652)；江蘇省無錫市農業科技支撐項目(CLE01N1410)；江蘇省農業科技自主創新資金項目[CX(14)2015，CX(15)1020]；現代農業產業技術體系建設專項(CARS-31-2-02)。

作者簡介尤春梅(1995- )，女，江蘇鹽城人，本科生，專業：植物保護。*通訊作者，副教授，博士，從事植物病害防治及分子植物病理學研究。

收稿日期2016-04-20

中圖分類號S 436.621.1

文獻標識碼A

文章編號0517-6611(2016)15-152-03

Virulence of Biopesticide and Fungicide Complexes on the Pathogen of Peach Shoot Blight

YOU Chun-mei, GAO Ru-jia, HUANG Shen-xin, JI Zhao-lin*et al

(College of Horticulture and Plant Protection, Yangzhou University, Yangzhou, Jiangsu 225009)

Abstract[Objective] To screen the effective biopesticides and their mixtures with fungicides against the pathogen Phomopsis amygdali of peach shoot blight. [Method] The virulence of 10 biopesticides against P. amygdali was tested in the laboratory by mycelial growth inhibition method, and then the mixtures of biopesticides with high virulence and prochloraz, carbendazim and diniconazole respectively, were detected for their laboratory toxicities. [Result] Zhongshengmycin had the strongest virulence, with EC50value of 0.041 9 μg/mL, and shenqinmycin and tetramycin had better antimicrobial effects, with EC50values of 0.231 4 and 0.655 4 μg/mL, respectively. When shenqinmycin was mixed with the three fungicides in different proportion, the synergistic ratio (SR) values were all greater than 1.5, having increased toxicity effect. When mixed with the three fungicides, zhongshengmycin and tetramycin had mixed ratios for additive and synergistic toxicity effects. [Conclusion] The study indicates that the biopesticides mixed with chemical fungicides can increase the toxicity to P. amygdali.

Key wordsPeach shoot blight; Biopesticides; Fungicides; Virulence; Synergism